貝萊斯芽孢桿菌對(duì)柑橘病原菌皮落青霉的生防初探

宋 波，張廷富，楊昌鑫，文國(guó)琴

(西華師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川 南充 637000)

【研究意義】柑橘是全世界種植面積最廣的水果，也是我國(guó)重要的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)[1-2]。柑橘味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，含有豐富的黃酮類化合物，在醫(yī)藥、食品、保健等領(lǐng)域具有較好的利用前景[3-5]。柑橘在生產(chǎn)、儲(chǔ)運(yùn)和加工過程中往往會(huì)受到多種因素影響，導(dǎo)致柑橘發(fā)病腐爛。我國(guó)柑橘的病害有100種左右，其中采后病害有20多種。因此，加強(qiáng)對(duì)柑橘采后病害的防治研究，對(duì)降低柑橘病害和促進(jìn)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】根據(jù)發(fā)病特征可將柑橘病害分為侵染性病害和生理性病害[6]。侵染性病害由病原微生物侵染引起。青霉菌是最主要的柑橘真菌病原，真菌引起的柑橘采后侵染病害中，由指狀青霉(Penicillumdigitatum)和意大利青霉(P.italicum)等引起的綠霉病、青霉病最嚴(yán)重，酸腐、蒂腐病、炭疽病、黑腐病、黑斑病、褐腐病等病害次之[7]。柑橘生理病害主要有褐斑病、枯水病、水腫病、油斑病等[8]。這些病害嚴(yán)重危害了柑橘采后保鮮，對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)造成巨大損失。目前，普遍認(rèn)為引起柑橘采后病變腐爛的青霉菌主要是意大利青霉(P.italicum)和指狀青霉(P.digitatum)，但也有研究顯示擴(kuò)展青霉(P.expansum)、波蘭青霉(P.polonicum)、產(chǎn)黃青霉(P.chrysogenus)等也是引起柑橘采后病害的病原青霉[9]。有效的防控方法非常重要，物理防控和化學(xué)防控是目前使用的最廣泛的病害防控手段。物理防控對(duì)柑橘病害有較好的防控效果，但也有成本高、耗能大的缺陷?；瘜W(xué)防控是利用化學(xué)藥物抑制病原菌生長(zhǎng)而達(dá)到病害防控的目的，比如咪鮮胺、抑霉唑、雙弧鹽、笨菌靈等。研究表明，咪酰胺和抑霉唑?qū)Ω涕偾嗝共?、綠霉病、蒂腐病等采后病害具有較好的防控效果[10-11]，但是大量使用化學(xué)藥物會(huì)導(dǎo)致病原菌出現(xiàn)耐藥性，從而影響防治效果。近年來，生物防控越來越多被利用于動(dòng)植物病害防治，比如利用拮抗微生物、抗菌素類物質(zhì)或者茶多酚、橘皮提取物、植酸等天然生物保鮮劑對(duì)病害進(jìn)行防控。相較于物理和化學(xué)防控，生物防控具有綠色環(huán)保、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì)。芽孢桿菌屬由于具有較好的抑制植物病原菌的能力被廣泛用作農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的生物控制劑[12]。其中貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)是一種新興的拮抗微生物，可產(chǎn)生多種次級(jí)代謝產(chǎn)物，如脂肽類抗生素、聚酮類化合物和抗菌蛋白等，具有廣譜的抑菌作用，被廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物病害的生物防控[13]。如B.velezensis被制成殺菌劑，不僅有效防治真菌性病害還可以用于刺激植物生長(zhǎng)，從萵苣變種皺葉根分離出的B.velezensis制成懸浮劑直接應(yīng)用于萵苣幼苗，可以控制根腐病。從番茄組織中分離出來的菌株B.velezensisC2作為番茄黃萎病的生物制劑和生物防治劑具有較大的商業(yè)化潛力，可有效防治番茄黃萎病。C2的GC-MS分析顯示其具有抗真菌活性的揮發(fā)性代謝物[14]。因此，B.velezensis在植物病害生物防治上作為新的微生物資源具較大研究前景?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】從采后霉?fàn)€的柚子表皮樣品上分離得到1株青霉，通過形態(tài)學(xué)鑒定和分子鑒定相結(jié)合的方法將其鑒定為皮落青霉(P.crustosum)，并利用貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液對(duì)其進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，檢測(cè)其對(duì)皮落青霉的抑制效果?！緮M解決的關(guān)鍵問題】當(dāng)前國(guó)內(nèi)的微生物制劑較少，且多數(shù)制劑的活性較低，本研究為柑橘采后真菌病害的綠色防控提供理論與技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌源

采后明顯病變霉?fàn)€的沃柑采集于四川省德陽市中江縣，在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離純化致病后，將其編號(hào)為DYC1-1。生防菌株貝萊斯芽孢桿菌SB023由六盤水師范學(xué)院張曉勇老師提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌株的分離純化與鑒定 病原菌的分離。病原菌分離純化的方法參照方達(dá)中[15]的植病研究方法，從病變霉?fàn)€的柚子表面上挑取孢子，在PDA培養(yǎng)基上連續(xù)“Z”形劃線，28 ℃恒溫培養(yǎng)；菌落長(zhǎng)出后，從單個(gè)分散的菌落上挑取孢子，再在PDA培養(yǎng)基上連續(xù)劃線進(jìn)行純化，重復(fù)操作3次，直到分離純化出菌落形態(tài)特征一致的菌株。

形態(tài)鑒定。利用接種環(huán)將純化后的病原菌接種到PDA平板中央，28 ℃恒溫培養(yǎng)，觀察并記錄菌落的形態(tài)特征及動(dòng)態(tài)變化。待菌落長(zhǎng)出后，利用顯微鏡觀察菌絲和孢子的形態(tài)。在載玻片中央滴一滴棉藍(lán)染色液，用接種針在菌落邊緣挑取少量帶孢子的菌絲，將其分散在染液中，蓋上蓋玻片，用濾紙吸去多余染液，將載玻片放于顯微鏡下觀察。根據(jù)病原菌菌絲和孢子的特征并參考孔華忠[16]的方法，對(duì)病原菌進(jìn)行初步的形態(tài)學(xué)鑒定。

分子鑒定。參照Bios pin真菌基因組DNA提取試劑盒提取病原菌株DYC1-1的基因組DNA，并以此DNA為模板，以通用引物ITS1和ITS4為引物，擴(kuò)增核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS和細(xì)胞色素氧化酶1(CO1)基因片段，擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序后通過數(shù)據(jù)庫比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建進(jìn)行分子鑒定。PCR檢測(cè)病原菌株反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min,30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，16 ℃保存。PCR擴(kuò)增完成后，取5 μL 擴(kuò)增產(chǎn)物點(diǎn)樣用1%瓊脂凝膠電泳檢測(cè)，通過凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察并拍照，然后將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送昆泰銳(武漢)生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

BLAST序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹構(gòu)建。將測(cè)序序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行比對(duì)和同源性分析，同源性95%～99%鑒定為同一屬，99%以上可鑒定為同種，從而確定菌株種類[14]。分別選取與病原菌ITS和CO1序列同源性較高的菌株序列，將序列導(dǎo)入MEGA-X軟件進(jìn)行clustalw多序列比對(duì)并對(duì)序列兩端剪齊，利用鄰接法(Neighbor-Joining)重復(fù)1000次構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

1.2.2 病原菌致病性實(shí)驗(yàn) 將純培養(yǎng)的病原菌菌株接種至PDA培養(yǎng)基上，28 ℃恒溫培養(yǎng)。待菌落長(zhǎng)出后，用接種環(huán)刮取分生孢子放入裝有無菌水的EP管中充分洗脫，重復(fù)多次操作，然后用塞有棉花的注射器過濾，制備孢子懸液。取健康、無損傷的柚子和沃柑用無菌水清洗，表皮經(jīng)75%酒精擦洗后，用移液槍槍頭輕刺果實(shí)表皮并旋轉(zhuǎn)，以刺破表皮為宜，然后在刺破傷口接種20 μL孢子懸液，以接種等體積無菌水作為對(duì)照。將接種后的柑橘果實(shí)裝入保鮮袋內(nèi)并封口，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中貯藏，觀察并記錄發(fā)病癥狀的動(dòng)態(tài)變化[15]，并利用十字交叉法測(cè)量病變部位的病斑大小。

1.2.3 貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液的抑菌試驗(yàn) 貝萊斯芽孢桿菌SB023經(jīng)PDB發(fā)酵5 d后，離心收集上清液并用0.22 μm濾器過濾制備發(fā)酵液，按照發(fā)酵液終濃度分別為0、1%、2%、3%、10%的比例添加到PDA培養(yǎng)基中倒?jié)舛忍荻绕桨?。取DYC1-1孢子懸液(1×107個(gè)/mL)50 μL均勻涂布在較薄的PDA培養(yǎng)基平板表面，28 ℃恒溫培養(yǎng)12 h后獲得種子平板；用打孔器從PDA平板上打取菌餅，用無菌牙簽挑取菌餅接種在不同濃度發(fā)酵液的PDA培養(yǎng)基平板中央，以0的平板為對(duì)照組，各濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。28 ℃恒溫培養(yǎng)7 d后使用十字交叉法測(cè)量各個(gè)平板上菌落的直徑并計(jì)算抑菌率。

抑菌率(%)=(對(duì)照組菌落直徑-實(shí)驗(yàn)組菌落直徑)/(對(duì)照組菌落直徑-接種菌餅直徑)[17]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2016、SPSS 24等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌鑒定

2.1.1 形態(tài)學(xué)特征 病原菌DYC1-1在PDA上28 ℃生長(zhǎng)7 d的菌落直徑約為35 mm。菌落上有放射狀輪紋，質(zhì)地絨狀兼有粉末狀，分生孢子生長(zhǎng)較快，能形成明顯的青綠色霉層；菌落的邊緣初始為白色，培養(yǎng)一段時(shí)間后變?yōu)楹稚囵B(yǎng)基背面為淡黃色(圖1-A,1-B)。通過鏡檢觀察，菌株菌絲粗壯，有隔膜和分枝，分生孢子梗先端有1～2個(gè)分枝，分生孢子呈現(xiàn)球形或近球形，分生孢子鏈較稀疏，近圓柱狀(圖 1-C,1-D)。參照真菌鑒定手冊(cè)和中國(guó)真菌志的青霉屬及其相關(guān)有性型屬文獻(xiàn)資料描述[18-19]，將 DYC1-1初步鑒定為半知菌亞門青霉屬皮落青霉或擴(kuò)展青霉。

A.菌落正面; B.菌落背面; C.菌絲(40×); D.孢子梗(40×)A.Positive side of colony; B.Colony back; C.Mycelium (40 ×); D.Spore peduncle (40 ×)圖1 病原菌株DYC1-1在PDA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)Fig.1 Colony morphology of DYC1-1 strains on PDA medium

2.1.2 分子生物學(xué) DYC1-1菌株分生孢子接種在PDB中培養(yǎng)3 d后收集菌絲體，改良CTAB法提取基因組DNA并進(jìn)行PCR擴(kuò)增。從圖2-A可知，PCR擴(kuò)增條帶明顯，基因組DNA提取成功。以基因組DNA為模板，通用引物 ITS1和ITS4 PCR擴(kuò)增引物(ITS1：5′-TCCGTAGGAACCTGCGG，ITS4：5′-TCCTCCGCTATTGATATGC，PenF1：5′-GACAAGAAGGTGAT TTTTATCTTC，AspR1：5′-TCCTCCGCTATTGATATGC)擴(kuò)增出約550 bp的ITS片段(圖2-B)；以及青霉/曲霉鑒定引物PenF1和AspR1從DYC1-1基因組中擴(kuò)增出約550 bp的CO1片段(圖2-C)。

將DYC1-1菌株ITS和CO1基因擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序分別獲得522和523 bp的DNA序列，BLAST比對(duì)顯示，DYC1-1的rDNA-ITS和CO1序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中皮落青霉(Penicilliumcrustosem)的序列一致性均為100%。利用MEGA 6將其與一致性最高的同源序列進(jìn)行clustalw比對(duì)，基于ITS和CO1序列使用N-J法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)，DYC1-1與已鑒定的P.crustosum(MZ447552.1、EF180217.1)聚在同一進(jìn)化枝，可信度為95%，將DYC1-1菌株鑒定為皮落青霉(P.crustosum)。

A.基因組DNA, M: 1 kb Ladder, 2: DYC1-1; B. ITS擴(kuò)增產(chǎn)物, M.1 kb Ladder, 2.DYC1-1; C. CO1擴(kuò)增產(chǎn)物, M.DS5000, 1.DYC1-1A. Genomic DNA, M: 1 kb Ladder, 2: DYC1-1;B. ITS amplification product, M.1 kb Ladder, 2.DYC1-1;C. CO1 amplification product, M.DS5000, 1.DYC1-1 圖2 DYC1-1基因組及PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)Fig.2 The electrophoresis detection of DYC1-1 strains genomic DNA and PCR amplification product

圖3 菌株DYC1-1基于rDNA-ITS序列的系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree constructed by strain DYC1-1 based on rDNA-ITS

2.2 致病性實(shí)驗(yàn)

將DYC1-1孢子懸液分別接種到柚子和沃柑表皮上，柚子和沃柑均發(fā)生病變，但是病原菌對(duì)沃柑的毒力強(qiáng)于柚子。接種2 dpi時(shí)，2種果實(shí)的接種處均出現(xiàn)了褐色斑漬，之后沃柑上的褐色斑漬迅速擴(kuò)大，并長(zhǎng)出藍(lán)綠色霉層(圖4-A)，10 dpi病斑直徑為40.5 mm；接種無菌水的對(duì)照組均未發(fā)生明顯腐爛和擴(kuò)散，接種DYC1-1與用無菌水間的病斑直徑差異極顯著(P<0.01，圖4-B)。而DYC1-1接種在柚子表皮上的病變緩慢，10 dpi時(shí)病斑未形成明顯霉層，只在柚子皮層中有褐色侵染斑痕，但沒有大面積的腐爛(圖4-C，4-D)。所以，DYC1-1對(duì)不同種類柑橘的致病性有一定差異。同時(shí)，從DYC1-1回接發(fā)病的果實(shí)上可以分離出與接種菌株形態(tài)相同的菌株，根據(jù)科赫假設(shè)驗(yàn)證說明所分離純化的DYC1-1是引起柑橘采后霉腐的病原菌。

2.3 貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液對(duì)病原菌的影響

貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液對(duì)菌株DYC1-1的生長(zhǎng)具有一定抑制作用，發(fā)酵液濃度為1%、2%和3%的抑菌率分別為8.41%、8.73%和13.7%，發(fā)酵液濃度為10%的抑制率可達(dá)到37.8%，抑制率隨發(fā)酵液濃度的升高而升高(圖5-A,5-B)；而回歸分析估計(jì)貝萊斯芽孢桿菌SB023發(fā)酵液的半有效最大濃度EC50為8.2%。顯微鏡觀察顯示，與正常對(duì)照組菌絲相比，SB023發(fā)酵液添加組的DYC1-1菌絲有明顯的膨大形變和扭曲(圖5-C)，說明貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液中存在誘導(dǎo)真菌菌絲畸變的活性物質(zhì)。

3 討 論

引起柑橘采后病害的病原青霉種類較多，主要有Penicilliumitalicum、P.digitatum、P.expansum、P.polonicum、P.chrysogenus等病原菌。準(zhǔn)確的病原菌分類鑒定是研究各類病害的基礎(chǔ)，然而青霉菌屬的病原真菌在菌落形態(tài)特征上相似度較高，僅憑肉眼難以區(qū)分。此外，根據(jù)菌落形態(tài)，以分生孢子和孢子梗的特點(diǎn)進(jìn)行鑒定的傳統(tǒng)形態(tài)鑒定法，存在難以準(zhǔn)確到種、不可靠以及耗時(shí)長(zhǎng)等問題?；贗TS基因的分子鑒定法被廣泛運(yùn)用于病原菌的鑒定，該方法具有鑒定快速、準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)。然而，有些青霉僅通過ITS序列無法將其鑒定到種，Seifert等[20]對(duì)青霉屬真菌的研究表明，CO1基因的種內(nèi)平均變異率小于 ITS基因的變異率,僅為0.06%，種間平均變異率為5.6%，CO1基因?qū)η嗝箤僬婢姆直媛蕛?yōu)于ITS。本研究分離的DYC1-1通過ITS序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建不能鑒定到具體的種，而通過形態(tài)鑒定與CO1分子鑒定相結(jié)合的方法將1株柑橘采后病原菌成功鑒定為皮落青霉(P.crustosum)，這為柑橘采后病原菌的準(zhǔn)確鑒定及其多樣性研究提供一定參考。

A.DYC1-1在沃柑上的致病癥狀; B.DYC1-1接種沃柑與無菌水對(duì)照間的病斑直徑比較; C. DYC1-1在柚子上的致病癥狀；D. 柚子表皮內(nèi)側(cè)的發(fā)病癥狀。A、C、D上面是無菌水做對(duì)照，下面是接種DYC1-1 A. Pathogenic symptoms of DYC1-1 on citrus;B.Comparison of spot diameter between DYC1-1 inoculated fertile citrus and sterile water control; C.Pathogenic symptoms of DYC1-1 on grapefruit. D. Symptoms of the medial epidermis of grapefruit.A, C, D showed sterile water as control on the top, and DYC1-1 inoculation on the bottom圖4 病原菌DYC1-1的致病性實(shí)驗(yàn)Fig.4 Pathogenicity experiment of DYC1-1

A.不同濃度的發(fā)酵液對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響; B. 不同濃度發(fā)酵液對(duì)DYC1-1的抑制率; C. 發(fā)酵液膨誘導(dǎo)DYC1-1菌絲的膨大與畸形化(40×)A. The effect of different concentrations of fermentation broth on the growth of strain; B. The inhibition rate of different concentrations of fermentation broth on DYC1-1; C. Expansion and deformity of DYC1-1 hyphae induced by fermentation broth expansion (40 ×)圖5 貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液對(duì)病原菌的影響Fig.5 Effects of fermentation broth of B.velezensis on pathogenic bacteria

本研究從腐爛柚子上分離的DYC1-1能夠引起沃柑腐爛，而對(duì)柚子的致病性較弱，在不同種類的果實(shí)間致病性存在較大差異。在相同實(shí)驗(yàn)條件下， DYC1-1對(duì)沃柑的毒力遠(yuǎn)高于柚子，這可能是因?yàn)椴煌麑?shí)在結(jié)構(gòu)和生理上存在差異。柚子常溫下可貯藏 2～4個(gè)月，有 “天然水果罐頭”之稱。在結(jié)構(gòu)方面，柚子果皮厚，外果皮油胞大，含有的芳香油具有抗真菌入侵能力，中果皮有較厚的海綿層(白皮層)，內(nèi)果皮的囊瓣壁厚且硬，保護(hù)著汁胞[21]。實(shí)驗(yàn)中的柚子不易被侵染，而分離病原菌的柚子樣品卻腐爛嚴(yán)重，可能是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中的柚子屬于不易感病型品種，它對(duì)病原菌具有更強(qiáng)的抗性，而分離菌株的樣品中江柚可能屬于易感病品種。此外，柑橘的病變腐爛往往是由多種致病菌共同作用引起，除果實(shí)的種類和品種外，影響柑橘果實(shí)霉?fàn)€的因素還包括果實(shí)的成熟度、果實(shí)的傷害、果實(shí)的儲(chǔ)存條件等[22]。因此，后期還需進(jìn)一步研究更多的柑橘種類并進(jìn)行同種類柑橘的橫向比較。

枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilits)是較早應(yīng)用于生物防治的拮抗微生物。Jiang等[23]研究表明，枯草芽孢桿菌可以通過產(chǎn)生iturin A等物質(zhì)干擾真菌的運(yùn)輸、能量代謝和滲透壓，從而抑制病原真菌生長(zhǎng)。貝萊斯芽孢桿菌是一種新型的拮抗微生物，其抑菌機(jī)制是通過產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)而具有廣譜抑菌作用。Chowdhury等[24]研究表明，貝萊斯芽孢桿菌產(chǎn)生的桿菌毒素等抗菌物質(zhì)會(huì)使真菌的菌絲體、細(xì)胞質(zhì)膜的形態(tài)發(fā)生改變，從而抑制真菌生長(zhǎng)。此外，貝萊斯芽孢桿菌產(chǎn)生的伊枯草菌素等抗菌物質(zhì)會(huì)使細(xì)胞膜發(fā)生穿孔，導(dǎo)致內(nèi)容物流失[25]。目前皮落青霉是柑橘采后青霉病害的病原之一，但是關(guān)于皮落青霉對(duì)不同種類柑橘果實(shí)的致病性研究鮮有報(bào)道，關(guān)于貝萊斯芽孢桿菌在柑橘采后病害防控方面的研究和應(yīng)用較少。本研究顯示，貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液能引起DYC1-1菌絲發(fā)生膨大形變，說明貝萊斯芽孢桿菌能產(chǎn)生改變青霉細(xì)胞質(zhì)膜形態(tài)的抑菌活性物質(zhì)，10%的發(fā)酵液抑制率可達(dá)到37.8%，貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液對(duì)皮落青霉具有一定的防效，利用貝萊斯芽孢桿菌等拮抗微生物來防治柑橘采后病害，在柑橘產(chǎn)業(yè)的綠色化發(fā)展上具有巨大的潛力。

4 結(jié) 論

通過病原菌形態(tài)特征觀察、擴(kuò)增ITS和CO1基因片段進(jìn)行分子鑒定，將從發(fā)病腐爛的柚子表皮上分離到的青霉DYC1-1鑒定為皮落青霉(Penicillium.crustosum)。通過回接驗(yàn)證皮落青霉DYC1-1能夠不同程度地引起不同柑橘果實(shí)病變腐爛，是柑橘采后青霉病害的病原，但是對(duì)不同種類柑橘的致病能力存在差異，對(duì)沃柑的侵染能力較強(qiáng)，而對(duì)柚子雖有侵染性，但不造成大面積腐爛。貝萊芽孢桿菌發(fā)酵液對(duì)皮落青霉的生長(zhǎng)具有一定的抑制效果，其半有效最大濃度約為8.7%，貝萊芽孢桿菌在柑橘病害綠色防控上有巨大的應(yīng)用潛力。