艷山姜葉化學(xué)成分的研究

游華林， 周芹茹， 吳林菁， 廖尚高， 沈祥春， 張嫩玲*

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省天然藥物資源高效利用工程中心/貴州省高等學(xué)校天然藥物藥理與成藥性評價(jià)特色重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/貴州醫(yī)科大學(xué)天然藥物資源優(yōu)效利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽 550025)

艷山姜Alpiniazerumbet(Pers.) Burtt.et Smith為姜科山姜屬多年生草本植物，廣泛分布于我國貴州、云南、廣東、廣西等地[1]，其性溫，味辛、澀，具有健脾暖胃、溫中燥濕、行氣止痛的功效，可治療消化不良、心腹冷痛、胸腹脹滿、嘔吐腹瀉等癥[2-3]，是貴州地區(qū)苗族常用藥[4]。目前，對艷山姜葉化學(xué)成分的報(bào)道較少，故本研究對其提取物進(jìn)行分離純化，得到10個(gè)化合物，其中化合物1～7為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Avance NEO-400 MHz核磁共振波譜儀(內(nèi)標(biāo)TMS，德國Bruker公司)；VG-Autospec-3000型質(zhì)譜儀(美國貝克曼公司)；制備TLC、柱層析硅膠、薄層色譜硅膠GF254(煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司)；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠(瑞士Pharmacia公司)；MCI(美國Fisher Wharton公司)；LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津公司)。其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

艷山姜葉采自貴州省貞豐縣連環(huán)鄉(xiāng)，經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)本館館長龍慶德副教授鑒定為姜科山姜屬植物艷山姜Alpiniazerumbet(Pers.) Burtt.et Smith的葉，標(biāo)本(編號20160920)存放于貴州醫(yī)科大學(xué)天然藥物優(yōu)效利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

艷山姜葉(25 kg)冷凍干燥后切段，95%乙醇浸提3次后合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收至無醇味，加適量熱水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，萃取液合并后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，分別得石油醚部位245 g、乙酸乙酯部位652 g。石油醚萃取物(242 g)經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚-丙酮(99∶1～60∶40)梯度洗脫，TLC檢測合并得Fr.1～Fr.10，F(xiàn)r.2經(jīng)MCI柱層析甲醇洗脫后經(jīng)TLC檢測合并為Fr.2-1～Fr.2-10，F(xiàn)r.2-1反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯(100∶0～90∶10)梯度洗脫后分離純化得化合物3(14.6 mg)；Fr2-2經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)及硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(95∶5)洗脫，得化合物1(11 mg)、2(12.2 mg)。Fr4經(jīng)MCI柱層析，以甲醇-水(85∶15～100∶0)梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測合并為8個(gè)流分(Fr.4-1～Fr.4-8)，F(xiàn)r.4-2反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(98∶2)洗脫后重結(jié)晶得化合物4(15.2 mg)。Fr.8經(jīng)MCI柱層析，以甲醇-水(70∶30～100∶0)梯度洗脫，通過TLC檢測，合并為Fr.8-1～Fr.8-10，F(xiàn)r.8-2經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)、硅膠柱層析(氯仿-乙酸乙酯98∶2)和重結(jié)晶得化合物5(12.6 mg)；Fr.8-4經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)柱層析后，經(jīng)制備TLC石油醚-乙酸乙酯(80∶20)得化合物6(8.6 mg)；Fr.8-10經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)柱層析后經(jīng)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯(90∶10)洗脫，再經(jīng)甲醇-水(80∶20)洗脫得化合物7(7.2 mg)。Fr.9經(jīng)MCI柱層析甲醇-水(70∶30～100∶0)梯度洗脫后得10個(gè)流分Fr.9-1～Fr.9-10，F(xiàn)r.9-4重結(jié)晶得化合物8(16 mg)。正丁醇部位(100.5 g)經(jīng)HP20大孔樹脂分離純化，以乙醇-水(100∶0～0∶100)梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測合并為3個(gè)流分B1～B3，B1經(jīng)硅膠柱，以氯仿-甲醇(90∶10)梯度洗脫，再經(jīng)制備TLC氯仿-甲醇(80∶20)純化得化合物9(12.6 mg)、10(14 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色油狀，分子式C15H24O。ESI-MSm/z：221.2[M+H]+。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ: 4.91 (1H, s, H-15b), 4.79 (1H, s, H-15a), 2.79 (1H, dd,J=14.8 Hz, H-5), 2.55 (1H, q,J=9.5 Hz, H-9), 2.24～2.30 (1H, m, H-7a), 2.14～2.21 (1H, m, H-6b), 1.99～2.07 (2H, m, H-3b, 7b), 1.70 (3H, t,J=9.8 Hz, H-1), 1.62～1.65 (1H, m, H-10b), 1.55～1.61 (2H, m, H-2b, 10a), 1.38～1.41 (1H, m, H-2a), 1.25～1.32 (1H, m, H-6a), 1.13 (3H, s, 14-CH3), 0.94 (3H, s, 13-CH3), 0.95 (4H, m, H-3a, 12-CH3);13C-NMR(100 MHz, CDCl3)δ: 50.7 (C-1), 27.3 (C-2), 39.1(C-3), 59.6 (C-4), 63.6 (C-5), 30.2 (C-6), 29.8 (C-7), 151.6 (C-8), 48.7 (C-9), 39.7 (C-10), 33.9 (C-11), 29.9 (12-CH3), 21.6 (13-CH3), 17.0 (14-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]基本一致，故鑒定為caryophyllene oxide。

化合物2：淡黃色油狀，分子式C29H50O2。ESI-MSm/z：431.4[M+H]+。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ: 4.22 (1H, s, 6-OH), 2.62 (2H, t, H-4), 2.17 (3H, s, 8-CH3), 2.13 (6H, s, 5′-CH3, 7′-CH3), 1.24 (3H, s, 2-CH3), 0.88 (6H, d, 12′-CH3, 13′-CH3), 0.87 (3H, d, 4′-CH3), 0.86 (3H, d, 8′-CH3);13C-NMR(100 MHz, CDCl3)δ: 74.6 (C-2), 31.6 (C-3), 20.8 (C-4), 117.5 (C-4a), 118.5 (C-5), 144.6 (C-6), 121.1 (C-7), 122.6 (C-8), 145.6 (C-8a), 39.8 (C-1′), 21.1 (C-2′), 37.5 (C-3′), 32.8 (C-4′), 37.5 (C-5′), 24.5 (C-6′), 37.5 (C-7′), 32.7 (C-8′), 37.3 (C-9′), 24.8 (C-10′), 39.4 (C-11′), 28.0 (C-12′), 23.8 (2-CH3), 11.3 (5-CH3), 12.2 (7-CH3), 11.8 (8-CH3), 19.7 (4′-CH3), 19.8 (8′-CH3), 22.7 (12′-CH3), 22.8 (13′-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]基本一致，故鑒定為α-tocopherol。

化合物3：透明油狀，分子式C20H38O。ESI-MSm/z：295.3[M+H]+。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ: 5.41 (1H, t,J=1.4, 7.0 Hz, H-14), 4.15 (2H, d,J=7.0 Hz, H-15), 1.98 (1H, m, H-12a), 1.67 (3H, brs, 20-CH3), 1.52 (2H, m, H-11), 1.51 (1H, m, H-5), 1.41 (1H, m, H-9), 1.38 (2H, m, H-6, 10a), 1.34 (2H, m, H-8), 1.28 (4H, m, H-2a, 10b, 7), 1.26 (2H, m, H-3), 1.24 (2H, m, H-4), 1.13 (1H, m, H-12b), 1.06 (1H, m, H-2b), 0.87 (3H, s, 16-CH3), 0.86 (3H, s, 17-CH3), 0.85 (3H, d,J=7.1 Hz, 18-CH3), 0.84 (3H, d,J=6.6 Hz, 19-CH3);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 36.7 (C-1), 39.4 (C-2), 24.8 (C-3), 37.3 (C-4), 28.0 (C-5), 32.8 (C-6), 24.5 (C-7), 37.3 (C-8), 32.7 (C-9), 37.4 (C-10), 25.2 (C-11), 39.9 (C-12), 140.3 (C-13), 123.1 (C-14), 59.4 (C-15), 22.7 (16-CH3), 22.6 (17-CH3), 19.8 (18-CH3), 19.7 (19-CH3), 16.2 (20-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]基本一致，故鑒定為cassipourol。

化合物5：白色粉末，分子式C9H8O2。ESI-MSm/z：171.0[M+Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.73 (1H, d,J=16.2 Hz, H-7), 7.48 (2H, dd,J=6.8, 2.9 Hz, H-2, 6), 7.33 (3H, m, H-3, 4, 5), 6.39 (1H, d,J=15.9 Hz, H-8);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 134.0 (C-1), 129.0 (C-2), 128.4 (C-3), 130.8 (C-4), 128.4 (C-5), 129.0 (C-6), 147.1 (C-7), 117.4 (C-8), 172.5 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致，故鑒定為trans-cinnamic acid。

化合物6：淡黃色粉末，分子式C9H7ON。ESI-MSm/z：144.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 9.94(1H, s, -CHO), 8.29 (1H, d,J=1.5 Hz, H-5), 8.08 (1H, dd,J=7.2, 1.5 Hz, H-2), 7.52 (1H, dd, H-8), 7.24 (2H, m, H-6, 7);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 137.56 (C-2), 118.6 (C-3), 123.9 (C-4), 122.6 (C-5), 121.3 (C-6), 112.9 (C-7), 124.6 (C-4′), 138.9 (C-7′), 185.4 (-CHO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10-11]基本一致，故鑒定為indole-3-aldehyde。

化合物7：白色粉末(甲醇)，分子式C17H16O4。ESI-MSm/z：285.1[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.43 (2H, m, H-2′, 6′), 7.26 (3H, m, H-3′, 4′,5′), 6.17 (1H, d, H-3), 6.10 (1H, d,J=2.3 Hz, H-8), 5.43 (1H, d,J=2.3 Hz, H-6), 3.90 (3H, s, 7-OCH3), 3.83 (3H, s, 5-OCH3);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 162.3 (C-2), 106.0 (C-3), 189.3 (C-4), 165.0 (C-5), 93.6 (C-6), 166.0 (C-7), 93.2 (C-8), 138.8(C-9), 106.0 (C-10), 128.7 (C-1′), 126.1 (C-2′, 6′), 128.7 (C-3′,5′), 128.8(C-4′), 56.1 (5-OCH3), 55.6(7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致，故鑒定為5,7-methoxyflavanone。

化合物8：黃色針晶(甲醇)，分子式C16H14O4。ESI-MSm/z：271.1[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.44 (5H, m, H-2′, 3′,4′,5′,6′), 6.08 (1H, d,J=2.2 Hz, H-8), 6.01 (1H,d,J=2.1 Hz, H-6), 5.49 (1H, dd,J=12.3, 3.1 Hz, H-2), 3.74 (3H, s, 5-OCH3), 2.99 (1H, dd,J=16.4, 12.4 Hz, H-3β), 2.63 (1H, dd,J=16.4, 3.1 Hz, H-3α)；13C-NMR (100 MHz， CDCl3)δ: 78.5 (C-2), 45.3 (C-3), 187.7 (C-4), 164.5 (C-5), 96.1 (C-6), 164.8 (C-7), 93.8 (C-8), 162.6 (C-9), 104.9 (C-10), 139.6 (C-1′), 126.9 (C-2′,C-6′), 128.9 (C-3′,C-5′), 128.7 (C-4′), 56.0 (5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致，故鑒定為alpinetin。

化合物9：橙色無定形沉淀，分子式C17H18O4。ESI-MSm/z：287.3[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 14.03 (1H, s, 2′-OH), 7.31～7.19 (5H, m, H-2，3，4，5，6), 6.08 (1H, d,J=2.1 Hz, H-5′), 5.92 (1H, d,J=2.1 Hz, H-3′), 3.83 (6H, d,J=5.4 Hz, 4′,6′-OCH3), 3.32 (2H, dt,J=8.1, 7.4 Hz, H-7), 3.00 (2H, dt,J=8.5, 7.2 Hz, H-8);13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ: 45.7 (C-α), 30.7 (C-β), 141.7 (C-1), 128.4 (C-2, 3, 5, 6), 125.9 (C-4), 105.7 (C-1′), 162.7 (C-2′), 93.6 (C-3′), 165.9 (C-4′), 90.8 (C-5′), 167.7 (C-6′), 204.5 (C=O), 55.6 (4′-OCH3), 55.5 (6′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致，故鑒定為dihydroflavokawin B。

化合物10：黃色粉末，分子式C17H16O4。ESI-MSm/z：285.1[M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 14.22 (1H, s, 2′-OH), 7.82 (1H, d,J=17.3 Hz, H-7), 7.72 (1H, d,J=17.3 Hz, H-8), 7.54 (2H, d,J=6.5 Hz, H-2,6), 7.33 (2H, d,J=6.5 Hz, H-3,5), 7.19 (2H, s, H-4), 6.04 (1H, s, H-3′), 5.90 (1H, s, H-5′), 3.85 (3H, s, 6′-OCH3), 3.78 (3H, s, 4′-OCH3);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ:128.4 (C-α), 135.6 (C-β), 142.3 (C-1), 130.1 (C-2), 128.9 (C-3), 127.5 (C-4), 128.9 (C-5), 130.1 (C-6), 106.3 (C-1′), 162.5 (C-2′), 93.8 (C-3′), 166.3 (C-4′), 91.3 (C-5′), 168.4 (C-6′), 55.8 (4′-OCH3), 55.6 (6′-OCH3), 192.7 (C=O)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]基本一致，故鑒定為2′-hydroxy-4′,6′-dimethoxychalcone。

4 討論

本研究運(yùn)用Sephadex LH-20柱、硅膠柱等方法從黔產(chǎn)艷山姜葉中分離鑒定出10個(gè)化合物，其中化合物1～7為首次從該植物中分離得到。另外，化合物3對急性骨髓性白血病的細(xì)胞增殖具有一定活性[7]；化合物8具有一定的抗炎活性，與甲基CpG結(jié)合蛋白2(methyl CpG binding protein 2, MeCP2)聯(lián)合有望成為防治炎癥疾病的潛在新手段[16-17]。