彌漫大B細胞淋巴瘤中PIK3CA、PTEN的表達及臨床病理學(xué)意義

馬明福，崔文麗，王?，|，李羿興，張 巍

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科,烏魯木齊 830054）

彌漫大B細胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤中的侵襲性亞型，約占非霍奇金淋巴瘤的33.3%[1]。它是一種異質(zhì)性疾病，具有不同的組織學(xué)亞型。DLBCL的治療通常采用利妥昔單抗、環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿、潑尼松龍（R-CHOP）等常規(guī)化療方案進行，但仍有相當一部分患者耐藥或在治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)情況。因此，為提高治愈率，需要尋找新的靶向治療藥物。磷脂酰肌醇-3-激酶催化亞單位α（PIK3CA）作為一種癌基因，可正向調(diào)節(jié)PI3K/Akt/mTOR信號通路，而該信號通路的激活參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，如結(jié)腸癌[2]、乳腺癌[3]、肺癌[4]及淋巴瘤[5]等。而10號染色體上缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物（PTEN）作為一種抑癌基因，可負向抑制PI3K/Akt/mTOR信號通路的激活，從而抑制惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。DLBCL依賴PI3K/Akt/mTOR信號通路阻斷細胞凋亡，提示PI3K/Akt/mTOR信號通路在DLBCL的臨床治療干預(yù)中具有重要意義。而PIK3CA與PTEN是該信號通路的關(guān)鍵因子。因此，本研究以PIK3CA、PTEN作為切入點，通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測DLBCL中PIK3CA、PTEN蛋白質(zhì)表達情況，并分析其與各臨床病理指標及預(yù)后間的相關(guān)性，為DLBCL的治療提供新的、可行的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料選擇2010年1月1日-2013年12月31日在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科首次診斷的82例DLBCL患者石蠟標本及完整的臨床病理信息。納入標準：首次診斷，術(shù)前未經(jīng)任何治療，具有完整的臨床病理資料者。排除標準：存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性淋巴瘤或其他影響生存期的惡性疾病患者；精神類疾病患者；臨床資料不完整或術(shù)前經(jīng)過治療者，制片不佳無法判斷免疫組織化學(xué)結(jié)果的?；颊呒凹覍僖押炇鹬橥鈺?。

1.2 試劑PIK3CA蛋白免疫組化試劑（PI3K p110α單克隆抗體，克隆號：C73F8），PTEN蛋白免疫組化試劑（克隆號：28H6），均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 蛋白質(zhì)水平檢測按照免疫組織化學(xué)試劑盒鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法切片，置于65℃烤箱1 h，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，沖洗3次，置于3%過氧化氫溶液避光孵育10 min，PBS沖洗，抗原修復(fù)，依次加一抗，PBS洗凈，加二抗，PBS洗凈，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，封片。

1.3.2 結(jié)果判定光鏡下每張切片隨機選擇10個高倍視野觀察100個細胞。將染色強度分為未著色計0分，淡黃色計1分，深黃色計2分，棕褐色計3分；陽性細胞百分比≤1 %為0分，1 %～20 %為1分，21%～50 %為2分，＞50%為3分。每張切片兩個評分相乘結(jié)果≥4分判讀為陽性，＜4分判讀為陰性。采用雙盲法，由兩位高年資醫(yī)師進行閱片，并取平均值。

1.4 生存分析以確診當日為起始點進行電話隨訪，并收集患者生存信息。以患者死亡為終點事件，隨訪時間2020年12月31日截止，失訪患者自失去聯(lián)系當月起按截尾數(shù)據(jù)計算。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件進行分析，計數(shù)資料以百分比（n/%）表示，采用χ2檢驗，生存分析采用Kaplan-Meier法。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PIK3CA、PTEN蛋白表達情況免疫組織化學(xué)染色顯示，PIK3CA在DLBCL中呈陽性表達時定位于細胞漿，陰性則不著色；而PTEN在DLBCL中陽性表達時定位于細胞核，陰性不著色，見圖1。

圖1 PIK3CA、PTEN的免疫組織化學(xué)染色切片圖（×200）

2.2 PIK3CA、PTEN與各病例參數(shù)的相關(guān)性結(jié)果PIK3CA、PTEN在DLBCL中陽性表達率分別為90.2%（74/82）、11.0%（9/82）。PIK3CA蛋白與腫瘤物直徑、臨床分期有關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。PTEN蛋白質(zhì)在DLBCL中的缺失率為11.0%（9/82），與其他臨床病理指標未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性（P＞0.05），見表2。PIK3CA蛋白陽性表達與PTEN蛋白陽性表達有關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 PIK3CA在DLBCL中臨床相關(guān)病理參數(shù)分析/n(%)

表2 PTEN在DLBCL中臨床病理參數(shù)分析/n(%)

續(xù)表

2.3 PIK3CA、PTEN生存分析結(jié)果PIK3CA陽性表達患者中位總生存時間（OS）為20個月，陰性表達患者OS為22個月，兩者間未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)性（P=0.492）；PTEN陽性表達患者中位總生存時間（OS）為21個月，陰性表達患者OS為23個月，未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性（P=0.342）；PIK3CA和PTEN的表達水平與患者預(yù)后無相關(guān)性（P＞0.05），見圖2。

圖2 PIK3CA、PTEN生存分析圖

續(xù)表

3 討論

彌漫大B細胞淋巴瘤是最常見的非霍奇金淋巴瘤，表現(xiàn)為單個或多個淋巴結(jié)內(nèi)或結(jié)外部位快速增長的腫塊，其在臨床表現(xiàn)、分子遺傳學(xué)、療效及預(yù)后等方面不盡相同，是一個異質(zhì)性的腫瘤。盡管近年來對DLBCL治療相關(guān)的研究較多，且療效較好，但目前使用的標準治療方法5年總生存率僅為60%～70%[6]，故基于DLBCL的分子機制的精準醫(yī)學(xué)治療，對提高預(yù)后效果具有重要意義。

PIK3CA位于3q26.3染色體上，是由1 068個氨基酸組成的124 kDa的蛋白質(zhì)。PIK3CA是PI3K/Akt/mTOR信號通路的關(guān)鍵下游蛋白激酶，在惡性腫瘤細胞增殖、分解代謝、細胞黏附及凋亡中發(fā)揮重要作用。既往研究表明，PIK3CA作為胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶（PI3K）的亞基，在許多惡性腫瘤中發(fā)生突變，是激活PI3K/Akt/mTOR信號通路的主要機制[7]。而PTEN位于10q23染色體上，在多數(shù)惡性腫瘤中，該區(qū)域經(jīng)常發(fā)生雜合性缺失。它是一種兼具蛋白質(zhì)和脂質(zhì)磷酸酶活性的雙磷酸酶，最初被發(fā)現(xiàn)是一種具有細胞生長與生存調(diào)節(jié)功能的腫瘤抑制因子。之后有研究證實，PTEN是PI3K/Akt/mTOR信號通路的負調(diào)控因子，在抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中起著重要作用[8]。Cui等[9]通過對199例DLBCL的組織芯片進行免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果表明，PIK3CA在DLBCL中廣泛表達，支持PIK3CA在DLBCL中的致癌特性。Alowiri等[10]研究發(fā)現(xiàn)，PIK3CA mRNA表達較非腫瘤組織顯著升高(P＜0.001,Z=5.700)，而本研究中PIK3CA陽性表達率為90.2%（74/82），在大部分DLBCL中表達，這說明PIK3CA的表達可能與DLBCL的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。同時本研究結(jié)果顯示，PIK3CA蛋白表達與腫瘤物直徑、臨床分期有關(guān)，其中腫瘤物直徑≤4 cm、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達率較高，提示PIK3CA的表達在DLBCL腫瘤直徑、疾病晚期方面存在差異。而PTEN在DLBCL中的陽性表達率為11.0%（9/82），與各臨床病理指標之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性，說明PTEN蛋白缺失在DLBCL發(fā)生、發(fā)展中可能是一個獨立因素，或因病例較少所致，故PTEN蛋白與DLBCL發(fā)生、發(fā)展相關(guān)性有待擴大樣本量進一步研究。Gehringer等[11]發(fā)現(xiàn)，PTEN在伯基特淋巴瘤中抑制PI3K/Akt/mTOR信號通路活性的作用相同，進一步驗證了本研究中PIK3CA蛋白表達與PTEN蛋白表達有關(guān)（P＜0.05）這一實驗結(jié)果。

綜上所述，PIK3CA、PTEN表達與DLBCL的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，但兩者在腫瘤組織中的具體作用機制仍需進一步深入研究與探索，以期為DLBCL的靶向治療提供新的理論依據(jù)。