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    河南省三種地方牛種超數排卵結果與分析

    2022-01-25 08:18:56施巧婷張子敬滑留帥馮亞杰李志鋼祁興磊王玉海徐照學王二耀
    中國牛業(yè)科學 2021年5期
    關鍵詞:胚率供體母牛

    施巧婷,張子敬,滑留帥,馮亞杰,李志鋼,祁興磊,王玉海,許 斌,徐照學,王二耀*

    (1.河南省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所,鄭州 45002;2.平頂山市畜牧技術推廣站,河南平頂山 467000;3.河南省泌陽縣夏南牛研究推廣中心,河南 泌陽 463700;4.南陽黃牛科技中心,河南南陽 473005;5.伊吾縣畜牧改良站,新疆 哈密 839300)

    地方牛品種具有體軀高大結實、結構勻稱、耐粗飼、適應性強、抗病性強、性情溫順、遺傳性能較穩(wěn)定等優(yōu)點。是我國寶貴的種質資源。但受引進品種影響,地方品種普遍存在品種退化、數量銳減等問題。牛胚胎移植技術可充分利用現(xiàn)有種質資源,生產更多優(yōu)良種公、母畜,它是加速牛群改良和純種繁育進程,迅速提高中國牛群整體水平的重要而有效的手段。

    通過超數排卵技術可以獲得更多可用卵子和胚胎。影響牛超數排卵效果因素較多,牛的品種、年齡、飼養(yǎng)管理、藥品種類劑量、環(huán)境條件、重復超排、超排及采胚技術熟練程度等都能影響超排效果[1-5]。本次試驗旨在分析河南肉牛繁育關鍵技術實施現(xiàn)狀,建立起一套適合于地方肉牛產業(yè)化生產的超數排卵方案,探討切實有效的擴繁技術,以提高牛的超數排卵效率,使胚胎移植技術更好的為畜牧業(yè)生產服務。

    1 材料與方法

    1.1 試驗設計

    1.1.1 體牛的選擇 選擇夏南牛、南陽牛、郟縣紅牛母牛作為供體,所有供體牛體格健壯,無遺傳及傳染性疾病、寄蟲病、生殖系統(tǒng)疾病等,供體繁殖機能正常,生產性能良好,遺傳穩(wěn)定,系譜清楚,胎次在3胎以下。

    1.1.2 試驗物品及器材 垂體促卵泡素(FSH)(加拿大進口),400 mg/瓶(20 mL 稀釋);氯前列烯醇(PG)上海市計劃生育科學研究所出品,每支 0.2 mg;2%鹽酸普魯卡因;MEM.Gibco公司生產,每份 9.73 g;保存液(Holding),美國ICP公司出品,每袋50 mL;冷凍液,美國ICP公司生產每袋20 mL;程序冷凍儀(型號ET-1N),日本富士平公司出品;體式顯微鏡,由德國卡爾蔡司公司(Carl Zeiss,型號:Stemi 305)生產,沖胚管、擴張棒、集卵杯、抽粘液棒購于北京綠欣康農牧科技有限公司。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 供體牛超排方法 采用兩次PG+FSH法,具體操作方法如下:發(fā)情周期任意一天肌肉注射PG 2 mL記為第1天,第12天第二次肌肉注射PG 2 mL,第23天連續(xù) 4d遞減注射FSH,并在注射 FSH 的第 3 天下午注射 PG 2 mL。用藥劑量根據牛的體重是否經產等因素確定。供體牛發(fā)情后進行人工授精。

    1.2.2 牛胚胎采集方法 供體牛發(fā)情后人工授精的第 7天采用二路沖胚管法進行非手術沖胚。首先將供體牛保定,用2%普魯卡因4 mL進行薦尾間隙硬膜外腔麻醉,劑量為 4~6 mL,用子宮頸粘液去除棒吸除粘液。將帶鋼芯的沖胚管插入陰門,達到子宮頸口。用直腸把握法將沖胚管導入子宮頸和子宮角。當沖胚管前端到達子宮角前端,給沖胚管氣囊充氣約 8~15 mL,抽出沖胚管內芯;用100 mL 注射器吸取沖胚液從輸入管注入子宮角,然后回收沖胚液,每側子宮反復 4~5 次,每個子宮角用 500 mL 沖胚液,將回收液收集集卵杯在室溫下(18 ℃~22 ℃)靜置5~10 min,鏡檢。

    1.2.3 胚胎級別鑒定 根據胚胎的輪廓、細胞發(fā)育的均勻性、細胞的色澤等將胚胎分為 4 級。A 級:優(yōu)良胚胎,形態(tài)典型、卵細胞和分裂球的輪廓清晰、細胞質致密、色澤和分布均勻一致;B級:普通胚胎,與典型的胚胎相比,稍有變形,但卵細胞和分裂球的輪廓清晰、細胞質較致密、分布均勻、水泡樣和變性細胞占10%~30%;C 級:不良胚胎,形態(tài)變化明顯,卵細胞和分裂球的輪廓稍不清晰或部分不清晰、細胞質不均勻、色澤發(fā)暗、水泡樣和變性細胞占 30%~50%;D 級:變性、退化胚胎。其中A、B級胚胎為可用胚。

    1.3 統(tǒng)計方法

    依據胚胎鑒定分級法對各組回收的胚胎進行鑒定分級,統(tǒng)計各組總的胚胎數、可用胚數。采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理試驗數據。依據下列公式計算可用胚率和一級胚胎率,可用胚率=可用胚胎數/總胚胎數×100%,采用2個樣本百分數差異顯著性檢驗(t法)分別對各組可用胚率作差異性檢驗。

    2 結果

    表1 河南三種地方牛超排結果分析

    由表1可知夏南牛超排7頭獲得90枚胚胎,其中69枚可用,可用胚9.86枚/頭,南陽??捎门?.71枚/頭,郟縣紅牛為6.75枚/頭,可用胚中夏南牛最高與郟縣紅牛和南陽牛有顯著性差異(P<0. 05)。可用胚率郟縣紅牛最高79.41%,夏南牛喂76.67%,顯著高于南陽牛(P<0.05)。

    3 討論

    影響牛超排效果的因素較多,牛的品種、營養(yǎng)水平、超排處理方法、激素種類及沖胚技術的嫻熟度等對超排效果均有影響[1-5]。本試驗采用PGF2+FSH處理河南三種地方肉牛,獲得比較好的效果。

    近年來中國奶牛體內生產和胚胎移植數量正在逐漸減少,引入肉牛品種體內胚胎生產有增加的趨勢,每頭平均有用胚胎為5.7~7.0枚[5]。牛的品種會影響超排效果,但地方品種牛超數排卵效果差。對奶牛(頭均1.2~7.2枚),可用胚率可達到76.3%[6]。Huseyin Erdem超排西門塔爾牛,146頭牛獲得618枚可用胚,頭均4.23枚[7]。Fernando Naranjo-Chacón在熱帶地區(qū)超排瘤?!良遗?,可用胚達到5.9枚[8]。王木等[9]報道南陽黃牛頭均有用胚數為2.89枚;李金輝等[10]報道秦川牛頭均有用胚數為4.20枚;喬利敏等枚[11]報道晉南牛頭均有用胚胎數為3.90;王新莊等[12]報道郟縣紅牛頭均有用胚數為4.28枚;胡在鉅等[13]報道廣西南丹黃牛頭均有用胚數為4.40枚。朱芳賢對復州牛進行了47頭次超數排卵處理,頭均回收卵子數7.98枚,其中頭均有效胚數4.62枚[14]。但王峰[15]對荷斯坦牛、西門塔爾、海福特、安格斯、利木贊、夏洛萊進行了超數排卵實驗,表明相同超排處理方法可用胚,除夏洛萊無顯著性差異,夏洛萊頭均可用胚較低(4.41±3.56)枚 。我們超排處理了河南地方三種肉牛,三種牛超排后可用胚數均超過7枚,高于以上報道,說明三種河南地方肉牛都具有很好的繁殖性能,可以用胚胎移植方法快速擴繁。

    超排方法對超排效果也有顯著影響。寧財等采用日本進口FSH處理錦江牛獲得胚胎數5.8枚和可用胚3.8枚稍高[16],與薛仰全等采用CUE+MATE孕酮栓+FSH+PGF2α處理奶牛獲得頭均可用胚4.86枚相當[17]。FSH劑量可以影響胚胎數量和質量,在實踐中掌握牛的胎次及年齡,確定合適的FSH劑量方能達到較好的超排效果[2,4-5]。營養(yǎng)和環(huán)境因素對超排母牛也有影響[3],應盡量規(guī)避和降低不良應激因素對牛體的影響。本次3種供體牛飼養(yǎng)管理和所處的環(huán)境不同,所用激素和處理方法相同,采胚操作是同一人完成,牛個體對激素應答反應有差異,可能是超排效果有差別的原因。筆者經驗認為,經產牛第一針PG處理時清宮可以獲得等多的可用胚。

    河南的規(guī)?;龃蠖季邆渥雠3瑪蹬怕选⑴咛ヒ浦驳臈l件,基本掌握牛同期發(fā)情、超數排卵及胚胎移植等技術及流程,但在技術細節(jié)上還需要加強和提高,主要表現(xiàn)在供體牛的選擇,清宮及沖胚技術等方面。在實際生產中,一些牛場在選擇供體牛時,只選擇外表和繁殖器官正常,無明顯的繁殖性疾病的母牛,我們認為還應當查看牛只配種檔案,挑選體格健康、情期受胎率高、繁殖性能優(yōu)良的母牛作為超數排卵母牛,才能確保繁育技術的高效和穩(wěn)定。另外,沖胚技術的熟練程度對胚胎回收率和母牛健康有很大影響,生產實踐中也應加強和提高。

    4 結論

    試驗采用兩次PG+ FSH的方法對河南省肉牛超數排卵效果良好,獲得的總胚胎數、可用胚數及可用胚率,較國內同行超排獲得胚胎數多,可用胚率高,試驗結果為今后肉牛繁育技術的更廣泛開展提供參考。

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