超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定桑葚中唑螨酯殘留量

◎ 王 森，李國烈，陳緯成

（南充農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心，四川 南充 637000）

唑螨酯化學名稱為(E)-α-(1,3-二甲基-5-苯氧基吡唑-4-基亞甲基氨基氧)對甲苯甲酸異丁酯，又名Kiron、Ortus、殺螨王和霸螨靈[1]。唑螨酯作為廣譜殺螨劑，速效性好，持效期長，與其他藥物無交互抗性，主要用于防治紅蜘蛛、銹壁虱等病害[2]。

桑葚，又名桑果，富含維生素、氨基酸和人體所需的微量元素，既可直接食用，也可用于加工制作桑果汁、桑果酒等。近年來，桑果市場發(fā)展前景廣闊[3-5]。在桑果生產(chǎn)中，主要通過使用化學藥物來防治病蟲害，不規(guī)范的使用化學藥物可能會造成桑葚中農(nóng)藥殘留超標，危害人體健康[6]。朱興江等[7]采用高效液相色譜法測定了柑桔和白菜中唑螨酯的殘留量。李國烈等[8]報道了桑葚中醚菌酯等藥物的殘留測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters Xevo TQS超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀；Sigma3-18KS離心機；Mettler ToledoML802分析天平；IKA Vortex Genius 旋渦混合器；安捷倫石墨化炭黑氨基復合柱500 mg/6 mL。

唑螨酯標準品；甲醇和乙腈（質(zhì)譜級，霍尼韋爾）；甲苯（色譜級，霍尼韋爾），甲酸（色譜級，阿拉?。?；超純水（屈臣氏）。

1.2 樣品前處理

稱取10 g樣品（精確至0.05 g）至50 mL離心管中，加入5 g氯化鈉、1顆均質(zhì)子，再加入20.00 mL乙腈，渦旋振蕩提取 15 min，高速離心 5 min（6 000 r·min-1），吸取上清液10.00 mL過柱（預先用10 mL乙腈＋甲苯（75+25）活化小柱，棄去廢液），再用20 mL乙腈＋甲苯（75+25）洗脫，收集所有流出液，40 ℃水浴旋蒸至近干，用5.00 mL 85%甲醇溶液溶解殘渣，渦旋混勻后過濾膜，裝入樣品瓶待檢測。

1.3 儀器條件

色譜柱：Waters Xbridge C18（3.0 mm×50 mm×3.5 μm）。采用0.1%甲酸乙腈溶液（A）、0.1%甲酸水溶液（B）作為流動相，梯度洗脫程序見表1。柱溫：35 ℃；進樣量：1.00 μL；掃描模式：多反應監(jiān)測模式（MRM）；霧化氣流速：1 200 L·h-1；錐孔氣流速：200 L·h-1；碰撞氣流速：0.10 mL·min-1；鞘氣溫度為500 ℃。其他相關參數(shù)見表2。

表1 流動相及梯度洗脫程序表

表2 質(zhì)譜參數(shù)表

1.4 標準曲線和檢測限

取唑螨酯標準品 1 mL（1 000 μg·mL-1）于 10 mL容量瓶，用色譜級甲醇定容，得100 μg·mL-1標準儲備溶液，-20 ℃保存，3個月內(nèi)可使用。根據(jù)需要，將儲備液用桑葉空白基質(zhì)配制為一定濃度的標準溶液，按照1.3中儀器條件進行分析。以質(zhì)量濃度為橫坐標、對應色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線。通過添加一系列已知質(zhì)量濃度的樣品進行測定，以3倍信噪比（S/N=3）時的樣品質(zhì)量濃度為檢出限。

1.5 回收率和精密度

在桑葚空白樣品中，選擇 1 μg·kg-1、10 μg·kg-1、100 μg·kg-13個濃度的添加水平進行加標回收試驗，每個水平進行6個平行實驗，計算回收率和精密度。

1.6 基質(zhì)效應

使用85%甲醇水溶液配制的標液稱為試劑標液（A），使用桑葚空白基質(zhì)配制的標液稱為基質(zhì)標液（B），以兩者峰面積比值來評價基質(zhì)效應。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法選擇性

桑葚樣品經(jīng)前處理、上機分析，得色譜圖見圖1-圖4。結(jié)果表明，采取該方法檢測樣品凈化效果好、基質(zhì)干擾小、峰形及分離度良好，同時可獲得較強的信號響應。

圖1 唑螨酯標液圖譜（1.00 μg·L-1，試劑標）圖

圖4 唑螨酯加標樣品圖譜（1.00 μg·kg-1）圖

2.2 線性范圍和檢測限

該試驗條件下，唑螨酯在質(zhì)量濃度1.00～100.00 μg·L-1時線性關系良好，標準曲線回歸方程為y=2.042 55×107x+2 719.46，R2=0.999。 檢 測 限（S/N=3）為 0.25 μg·kg-1，以 4倍檢測限為定量限，則定量限為 1.00 μg·kg-1[9]。

2.3 方法回收率和精密度

在 1 μg·kg-1、10 μg·kg-1、100 μg·kg-1共 3 個添加濃度水平下，唑螨酯的回收率為83.9%～89.2%，相對標準偏差（RSD）為3.13%～4.31%，見表3。結(jié)果表明，該方法具有較高的回收率和準確度。日內(nèi)精密度RSD（n=6）為2.99%～4.39%，日間精密度RSD（n=3）為2.76%～3.26%，見表4。結(jié)果表明，該方法具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，滿足質(zhì)量控制要求。

表3 方法回收率表（n=6）

表4 方法精密度表（n=6）

2.4 基質(zhì)效應

基質(zhì)效應結(jié)果見表5。在不同濃度條件下，唑螨酯在桑葚中的基質(zhì)效應分別為80.38%～84.50%，即基質(zhì)抑制作用。因此為了提高方法的準確性和靈敏度，采用本方法測定桑葚中的唑螨酯時應采用桑葚基質(zhì)匹配標準曲線對實際樣品進行定量。

表5 方法基質(zhì)效應表（n=5）

圖2 桑葚空白樣品圖譜圖

圖3 唑螨酯標液圖譜（1.00 μg·L-1，桑葚基質(zhì)標）圖

3 結(jié)論

本試驗建立了測定桑葚中唑螨酯殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，樣品經(jīng)乙腈提取，固相萃取小柱凈化，超高效液相色譜分離，質(zhì)譜多反應監(jiān)測模式檢測，外標法定量。方法檢出限為0.25 μg·kg-1，定量限為 1.00 μg·kg-1，符合殘留限量的要求（0.1 mg·kg-1），平均回收率為83.9%～89.2%，精密度為2.76%～4.39%，適用于桑葚中唑螨酯殘留量的測定。