不同品種百合炮制品總皂苷含量比較

李辰鈺 李佳琪 顏瑞辰 李晨光

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)院，吉林 吉林 132101）

百合作為一種藥食兩用植物，應(yīng)用歷史超過(guò)2 000年，其主要來(lái)源為百合科植物卷丹（Lilium lancifoliumThumb.）、百合（Lilium browniiF.E.Brown var.viridulumBaker）或細(xì)葉百合（Lilium pumilumDC.）的干燥肉質(zhì)鱗葉［1］。卷丹是百合科百合屬多年生草本球根植物，其因火紅的花色反卷的花瓣而享有卷丹的美名，被稱為“百合之冠”。細(xì)葉百合為百合科百合屬多年生草本植物，花色美麗嬌艷具有觀賞價(jià)值，是抗旱性優(yōu)良的育種品種。百合中含有薯蕷皂苷、多糖類、生物堿等多種生物活性成分，具有寧心安神，促進(jìn)血液循環(huán)，美容養(yǎng)顏等功效［2］。百合皂苷類型多為甾體皂苷［3］，具有抗抑郁，鎮(zhèn)靜催眠，抑制人前列腺癌細(xì)胞增殖和侵襲、抗炎抑菌等作用［4］。

百合炮制方法有炙制、熬制、蜜制、炒制和蒸制。百合主要分布于湖南、四川、河南、江蘇和浙江等省，野生資源較少。周秀玲等運(yùn)用分光光度法，用濃硫酸作為顯色劑測(cè)定不同品種百合中多糖和皂苷的含量，結(jié)果表明，卷丹中皂苷含量最高［5］。傅春燕等人采用香草醛-高氯酸顯色測(cè)定10個(gè)批次龍牙百合中總皂苷含量，結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定性好，可作為龍牙百合皂苷定量分析的有效方法［6］。高彥寧等以高氯酸作為顯色劑在408 nm處測(cè)定皂苷含量，來(lái)源不同的百合總皂苷含量有所差異，但江蘇南通卷丹中總皂苷含量最高［7］。賀曉龍等對(duì)藥用植物百合傳統(tǒng)與現(xiàn)代的提取方法進(jìn)行概述并進(jìn)行細(xì)致的比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)提取方法研究得更加透徹，提取率更高，其中是會(huì)浪費(fèi)許多化學(xué)試劑而污染空氣環(huán)境，而新方法污染更少、省時(shí)省力，但提取率低一些［8］。張璐等運(yùn)用超聲波法與酶解法相結(jié)合提取百合總皂苷并確定了最佳提取工藝，果膠酶的合理使用對(duì)百合中不溶解物質(zhì)淀粉和蛋白質(zhì)有一定水解作用，提高了提取物得率，超聲波的強(qiáng)烈振蕩有助于百合有效成分溶出，酶解法對(duì)溫度有一定的要求，在低溫度下進(jìn)行操作節(jié)省溶劑的同時(shí)節(jié)省能源［9］。何郁菲等對(duì)比水浴回流法和超聲波輔助回流法提取百合總皂苷，結(jié)果表明，超聲波輔助回流提取法明顯優(yōu)于水浴回流提取法，超聲波輔助回流提取法用時(shí)較短，避免藥材因過(guò)長(zhǎng)時(shí)間加熱對(duì)有效藥用成分的不良影響，同時(shí)雜質(zhì)的溶解量降低，更有益于人體健康［10］。羅林明等對(duì)3種藥用植物百合進(jìn)行化學(xué)成分及藥理作用方面的概括總結(jié)，百合主要含有甾體皂苷、甾醇、酚酸甘油酯、黃酮、苯丙素、生物堿和多糖等化學(xué)成分［11］。目前，對(duì)百合不同炮制品總皂苷含量的研究罕有報(bào)道。鑒于此，筆者使用香草醛-高氯酸法測(cè)定薯蕷皂苷含量，超聲波輔助提取不同品種百合炮制品中的總皂苷，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析百合不同品種及其各炮制品中總皂苷的含量差異，為百合的栽培、育種及開(kāi)發(fā)利用提供相應(yīng)的理論指導(dǎo)［12］。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

龍牙百合（Lilium browniivar.viridulum）購(gòu)于湖南邵陽(yáng)，蘭州百合（Lilium davidiivar.willmottiaeE.H.Wilson Raffil）購(gòu)于甘肅蘭州，卷丹（Lilium lancifoliumThumb.）和細(xì)葉百合（Lilium pumilumDC.）采自吉林省吉林市左家鎮(zhèn)，經(jīng)中藥學(xué)院馬堯教授鑒定確認(rèn)（樣品見(jiàn)圖1）。

圖1 百合樣品

薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)置于成都瑞芬思生物科技有限公司，其余試劑乙醇、香草醛、醋酸、高氯酸均為分析純。

1.2 試驗(yàn)儀器

試驗(yàn)所需儀器有上海精科可見(jiàn)分光光度計(jì)721G-100、日本島津電子天平AUW120D、寧波新藝SB-5200DT超聲波清洗機(jī)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備。精密稱定薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品5.2 mg，置于25 mL容量瓶中，加80%乙醇定容，搖勻，既得0.208 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定。分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL和3.0 mL置于25 mL具塞試管中，揮干溶劑，加入2.5%香草醛-冰乙酸2 mL、高氯酸5 mL，搖勻，在80℃恒溫水浴中顯色25 min后取出，放入常溫水浴中停止反應(yīng)，再加入5 mL冰乙酸混勻。將2.5%香草醛-冰乙酸7 mL和高氯酸5 mL作為空白對(duì)照，使用分光光度計(jì)在460 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程［13］。

1.3.3 不同百合炮制品制備。①凈百合：新鮮百合掰瓣洗凈，篩去雜質(zhì)，放入烤箱中60℃烘至脆硬狀態(tài)。②蜜百合：取凈百合置于熱鍋中，文火翻炒至表面微微泛黃，噴淋用熱水化開(kāi)的煉蜜，繼續(xù)翻炒至干燥不黏手即可出鍋。每100 kg百合使用煉蜜20 kg［14］。③蒸百合：生百合洗凈分瓣置于籠屜中，大火燒水燒開(kāi)后將籠屜架于水上，轉(zhuǎn)小火，保持水微沸狀態(tài)，蒸至百合內(nèi)里熟透［15］，掰開(kāi)后呈磨砂質(zhì)感，冷卻后放入烘箱，烘干至脆硬狀態(tài)。

1.3.4 百合總皂苷提取。①浸提法：稱取蘭州百合凈制品粉末（過(guò)0.28 mm篩，60℃烘干）5 g，在25 mL的80%乙醇中浸泡12 h，濾過(guò)粉末定容至25 mL容量瓶中（見(jiàn)圖2）。

圖2 浸提操作示意圖

②超聲法：稱取蘭州百合凈制品粉末（過(guò)0.28 mm篩，60℃烘干）5 g，使用80%乙醇25 mL在55℃條件下超聲提取30 min，取出后過(guò)濾到25 mL容量瓶中并定容。

1.3.5 總皂苷含量測(cè)定。向具塞試管加入3 mL待測(cè)液，揮干溶劑，再加入2.5%香草醛-冰乙酸2 mL、高氯酸5 mL，搖勻，在80℃恒溫水中顯色25 min后取出放入常溫水浴中停止反應(yīng)，再加入冰乙酸5 mL混勻。以2.5%香草醛-冰乙酸7 mL、高氯酸5 mL作為空白對(duì)照，使用分光光度計(jì)在460 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，以回歸方程計(jì)算待測(cè)液濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以吸光度為橫坐標(biāo)、百合總皂苷濃度為縱坐標(biāo)，回歸處理后得到回歸方程Y=1.431X-0.017 1，R2=0.999 2（見(jiàn)圖3），表明線性關(guān)系良好。

圖3 百合總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 不同提取方法對(duì)百合總皂苷含量的影響

取蘭州百合凈制品粉末（60℃烘干，過(guò)0.28 mm篩）5 g，根據(jù)1.3.4試驗(yàn)方法分別檢測(cè)各個(gè)樣品，按照回歸方程計(jì)算結(jié)果，如表1所示。結(jié)果表明，采用浸提法提取蘭州百合平均總皂苷含量為0.20 mg/g，超聲輔助提取蘭州百合平均總皂苷含量為1.10 mg/g，后者明顯高于前者，表明超聲法提取效果明顯優(yōu)于浸提法，后續(xù)試驗(yàn)采用超聲輔助法提取不同炮制品百合總皂苷。

2.3 不同品種百合炮制品的總皂苷含量差異

采用超聲法對(duì)百合樣品進(jìn)行處理，并使用1.3.2中的顯色條件分別對(duì)樣品進(jìn)行顯色處理。按照回歸方程進(jìn)行計(jì)算，得到樣品總皂苷含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。就凈制品而言，不同品種百合中卷丹的總皂苷含量為3.19 mg/g，明顯高于其他品種，龍牙百合為2.96 mg/g，細(xì)葉百合為1.69 mg/g，蘭州百合為1.48 mg/g。生產(chǎn)上卷丹種植面積較廣，臨床入藥較為普遍。蘭州百合的皂苷含量較低，日常生活中多制作藥膳食用或作為保健品使用，不適宜入藥。同種百合不同種炮制品的總皂苷含量存在差異，蜜制品總皂苷含量最高，平均值為2.40 mg/g，其次是凈制品，平均值為2.33 mg/g，蒸制百合的總皂苷含量最低，平均值為1.90 mg/g。蜜制百合總皂苷含量明顯高于其他2種，蒸制品總皂苷含量相較于凈制品略有流失，原因可能是由于蒸制品加工過(guò)程中總皂苷部分溶解于水蒸氣而損失，而蜜制加工能有效減少百合中總皂苷的流失，煉蜜中糖與皂苷元結(jié)合，從而使總皂苷含量上升。

表2 百合不同炮制方法的總皂苷含量比較 mg/g

3 討論

不同品種百合的不同炮制方法之間的總皂苷含量存在差異，以蜜制卷丹的總皂苷含量最高，蒸制蘭州百合的總皂苷含量最低；蜜制品的總皂苷含量明顯高于蒸制品和凈制品，卷丹的總皂苷含量明顯高于細(xì)葉百合、龍牙百合和蘭州百合。

試驗(yàn)結(jié)果表明，傳統(tǒng)方法蜜制百合對(duì)于增加總皂苷含量有著明顯的效果；在日常應(yīng)用中，卷丹適合作為中藥材使用，細(xì)葉百合和龍牙百合適合作為藥食同源或者保健品等對(duì)藥用成分要求較低的原材料，而蘭州百合口感鮮甜，不似其他品種藥材味道苦澀，更適用于制作藥膳、保健品或者單純作為蔬菜使用。

目前市場(chǎng)上以卷丹和蘭州百合的銷售量最高，其中卷丹藥用效果最佳，蘭州百合口感最佳，而細(xì)葉百合和龍牙百合由于藥效和口感都較次而沒(méi)有太大的市場(chǎng)，且在未來(lái)的市場(chǎng)中這一現(xiàn)象還會(huì)持續(xù)出現(xiàn)。