• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    海島棉抗枯萎病性狀與 SSR標(biāo)記的關(guān)聯(lián)分析

    2022-01-01 08:37:42陸小雙張夢潔韓萬里龍遺磊劉鵬飛陳全家曲延英鄧曉娟
    新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:海島棉感病枯萎病

    陸小雙,張夢潔,韓萬里,龍遺磊,劉鵬飛,陳全家,曲延英,鄧曉娟

    (新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院,烏魯木齊 830052)

    0 引 言

    【研究意義】棉花枯萎病病原菌為尖鐮孢萎蔫?;?Fusariumoxysporum.f.sp.Vasinfectum(Atk.) Snyder and Hansen),屬于土傳維管束病害,該病菌在土壤中存活年限長,一般在苗期或現(xiàn)蕾期出現(xiàn)發(fā)病高峰,該病的發(fā)生受多種因素的影響,防治起來困難[1-2]?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】2014~2018年5年間我國棉花枯萎病的平均發(fā)病面積為36.42×104hm2·次,造成19.70%的產(chǎn)量損失[3]。施用生物有機(jī)肥能夠降低棉花枯萎病的發(fā)病率,增產(chǎn)約3.1%~10.8%,但增加栽培成本[4]?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】輪作倒茬的方式雖然可以有效抑制棉花枯萎病的發(fā)生,但也受耕地資源限制[5]。棉花抗病新品種的選擇和培育是最為有效的解決途徑之一[6]。傳統(tǒng)大田育種方法不僅周期較長,傳統(tǒng)的病圃鑒定耗時(shí)耗力且準(zhǔn)確性較差[7],分子標(biāo)記技術(shù)的成熟與發(fā)展為棉花抗病品種選育提供了新的技術(shù)支持[8]。【擬解決的關(guān)鍵問題】鑒定204份海島棉種質(zhì)資源,分析獲得的海島棉抗病基因SSR分子標(biāo)記,篩選獲得關(guān)聯(lián)的海島棉抗枯萎病分子標(biāo)記,為棉花分子標(biāo)記輔助育種提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    供試材料為以 204 份海島棉材料構(gòu)成的自然群體,由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院作物遺傳育種實(shí)驗(yàn)室提供。

    菌種為尖孢鐮刀菌七號生理小種,由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院提供。表1

    表1 204份海島棉材料來源Table 1 The origin regions of 204 sea island cotton accessions

    在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院棉花培養(yǎng)室室內(nèi)鑒定棉花枯萎病抗性。將棉花材料種在直徑約為10 cm的營養(yǎng)缽里,每缽種1個(gè)材料,每缽播種5粒種子,3次重復(fù),掛牌標(biāo)記。采用一般肥水管理。

    在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物病理系棉花病害研究室制備馬鈴薯液體培養(yǎng)基。將挑取枯萎病菌單菌落接種于馬鈴薯液體培養(yǎng)基中,25℃、200 r/min震蕩培養(yǎng)1周以上,用細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)菌液濃度達(dá)到1×107個(gè)/cm2時(shí)備用。

    1.2 方 法

    1.2.1 海島棉資源群體枯萎病抗性的室內(nèi)鑒定

    待棉花幼苗2片子葉展平時(shí),用滅過菌的剪刀將營養(yǎng)缽底部剪掉1 cm左右,然后放在含有枯萎病菌的培養(yǎng)皿中沾取菌液后,放回原處。在接種3周后開始調(diào)查和統(tǒng)計(jì)室內(nèi)病情,待病情穩(wěn)定后調(diào)查發(fā)病率。

    棉花枯萎病株分級標(biāo)準(zhǔn)采用國家統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)[9]。表2

    表2 棉花枯萎病級劃分標(biāo)準(zhǔn)Table 2 The classification standard of cotton Fusarium wilt

    采用病情指數(shù)來鑒定棉花株系的枯萎病抗性,參考有關(guān)資料,將鑒定材料分為免疫(I)、高抗(HR)、抗病(R)、耐病(T)和感病(S)5個(gè)等級[10]。表3

    表3 棉花材料抗病性劃分標(biāo)準(zhǔn)Table 3 Criteria for disease resistance of cotton materials

    1.2.2 SSR分子標(biāo)記開發(fā)、鑒定和評價(jià)

    利用黃啟秀等[11]報(bào)道的5個(gè)海島棉抗枯萎病基因,通過primer5.0設(shè)計(jì)SSR分子標(biāo)記40對。以4個(gè)抗病材料和3個(gè)感病材料(抗病材料為06-146、埃棉2號、DJ-07-136和Pimas-7,感病材料為新海14號、海92-3和埃及棉424)對SSR引物進(jìn)行初步篩選。獲得的特異條帶在海島棉資源群體中分析,驗(yàn)證分子標(biāo)記的適用性。

    以棉花幼苗真葉期葉片為材料,用改進(jìn)的 CTAB 法提取DNA[12]。所用 SSR引物由新疆昆泰銳生物技術(shù)有限公司合成。PCR 反應(yīng)程序:95℃ 預(yù)變性 5 min; 30 個(gè)循環(huán)( 94℃ 變性 30 s,58℃ 退火溫度 45 s,延伸30 s); 72℃ 延伸 10 min;4℃ 保存。使用濃度為 8% 的聚丙烯酰胺凝膠電泳對 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分離,待跑完電泳以后,銀染依據(jù)郭大龍等[13]方法照相保存。表4

    表4 SSR引物及基因來源Table 4 SSR primers and gene sources

    2 結(jié)果與分析

    2.1 群體室內(nèi)抗病性鑒定結(jié)果

    研究表明,204份海島棉資源材料中,高抗材料(HR)2份(中國新疆和內(nèi)地各1份),占所測定棉花材料的0.98%;抗病材料(R)34份(中國內(nèi)地11份,蘇聯(lián)10份,中國新疆7份,美國2份,未知4份),占所測定棉花材料的16.67%;耐病材料(T)107份(中國新疆29份,前蘇聯(lián)26份,中國內(nèi)地22份,埃及10份,美國8份,未知12份),占所測定棉花材料的52.45%;感病材料(S) 61份(中國內(nèi)地18份,中國新疆10份,前蘇聯(lián)9份,美國5份,埃及5份,阿爾巴尼亞2份,未知12份),占所測定棉花材料的29.90%;無免疫材料。表5

    表5 海島棉材料的室內(nèi)鑒定結(jié)果Table 5 Indoor identification results of island cotton materials

    2.2 分子標(biāo)記篩選

    研究表明,共有6對引物與抗病性具有多態(tài)性。CHS-04和CHS-05重復(fù)性較強(qiáng)。引物CHS-04擴(kuò)增下抗病品種06-146、DJ-07-136、埃棉2號和Pimas-7擴(kuò)增出一條特意差異帶,條帶大約為1 350 bp,而感病品種新海14號和埃及棉424未能擴(kuò)增出這條帶,而是400 bp的帶。引物CHS-05擴(kuò)增下感病品種新海14號、海92-3和埃及棉424擴(kuò)增出兩條差異帶,大小約為400 bp 和 630 bp,而抗病材料DJ-07-136擴(kuò)增出一條帶,約為630 bp,06-146、Pimas-7和埃棉2號均未能擴(kuò)增出這兩條帶。圖1,表6

    注:A:CHS-04 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物M:D2000 Maker;1:新海14號;2:06-146;3:埃棉2號;4:DJ-07-136;5:Pimas-7;6:海92-3;7:埃及棉424 B:CHS-05 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物M:D2000 Maker;a:新海14號;b:06-146;c:埃棉2號;d:DJ-07-136;e:Pimas-7;f:海92-3;g:埃及棉424

    表6 引物篩選PCR擴(kuò)增電泳Table 6 primer screening PCR amplification electrophoresis results

    續(xù)表6 引物篩選PCR擴(kuò)增電泳Table 6 primer screening PCR amplification electrophoresis results

    2.3 抗病性分子標(biāo)記與枯萎病抗性關(guān)聯(lián)鑒定

    研究表明,引物CHS-04擴(kuò)增抗病條帶與抗病材料一致率為1;與感病材料一致率較低,為0.67。引物CHS-05擴(kuò)增感病條帶與感病材料一致率達(dá)到1;與抗病材料一致率較低,為0.875。表7

    表7 抗病材料普遍條帶與材料抗性的一致率Table 7 Consistent rate of common strips and resistance of resistant materials

    2.4 抗病關(guān)聯(lián)分子標(biāo)記的評價(jià)

    研究表明,引物CHS-04擴(kuò)增條帶與群體材料一致率介于41.67%~52.94%,平均值為46.67%。引物CHS-05擴(kuò)增條帶與群體材料一致率介于30.39%~54.68%,平均值為35.78%。圖2,圖3,表8

    注:M:D2000Maker;1:蘇K202;2:新海35號;3:吐77-104;4:躍61;5:孔雀200;6:吉1;7:NMGB-16;8:司-6002;9:巴1248;10:雞爪海島棉長;11:躍51;12:90199;13:云南4號;14:海92-2;15:巴3119;16:9078依;17:軍海1號;18:墨-1413;19:阿101;20:吉2;21:新海34號;22:新海27號;23:910u;24:7059;25:長絨;26:5917;27:吐82-6-17;28:吉扎31;29:NMGB-2;30:新海36號;31:海島棉3;32:K366;33:NMGB-10;34:C-6019;35:7051;36:H3549,下同

    圖3 引物CHS-05擴(kuò)增部分群體材料PCR產(chǎn)物電泳Fig.3 PCR product electrophoresis of primers CHS-05 amplified parts of the population material

    表8 引物CHS-04、CHS-05擴(kuò)增部分群體材料PCR條帶一致率Table 8 PCR band consistency rate of primers CHS-04 and CHS-05 amplified parts of the population materials

    3 討 論

    3.1 類黃酮代謝途徑與棉花枯萎病抗病基因的關(guān)聯(lián)

    目前已知的類黃酮化合物結(jié)構(gòu)有6 000多種,當(dāng)存在微生物侵染時(shí),類黃酮作為植保素在植物體內(nèi)積累以保護(hù)植物,可以阻止植株真菌孢子發(fā)芽[14]。查爾酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是類黃酮合成途徑中的第1個(gè)關(guān)鍵結(jié)構(gòu)酶,催化生成的查爾酮是多種類黃酮代謝途徑的前體,CHS超基因家族起源古老,而查爾酮合成酶是CHS基因家族的核心酶[15]。CHS基因涉及植物的花色、育性和逆境反應(yīng)等多種功能[16]。趙學(xué)榮等[17]從苦蕎中克隆獲得FtCHS1基因側(cè)翼序列PFtCHS1,4℃處理后苦蕎葉子中FtCHS1基因的表達(dá)量在24 h內(nèi)呈現(xiàn)“緩慢下降-急劇上升-驟然下降”的變化,PFtCHS1可響應(yīng)低溫脅迫。馬立功等[18]從向日葵耐病品種龍食葵2號中克隆出HaCHS,研究發(fā)現(xiàn)在低溫、創(chuàng)傷和JA誘導(dǎo)后HaCHS基因表達(dá)量顯著提高,推測HaCHS可能在植物逆境脅迫應(yīng)答中起作用。王爽[19]以抗病品種灰皮支黑豆和感病品種williams82為材料,用大豆胞囊線蟲3號生理小種進(jìn)行侵染脅迫,試驗(yàn)顯示抗病品種灰皮支黑豆中CHS5、CHS7、CHS8、CHS9基因5dpi時(shí)均明顯上調(diào)表達(dá),初步說明CHS基因在抗病品種抗性機(jī)制中的重要作用。黃啟秀[11]研究顯示,接種病菌后的CHS基因在海島棉枯萎病抗病材料中表達(dá)活躍,CHS基因在海島棉抗枯萎病中起著作用。

    3.2 SSR分子標(biāo)記技術(shù)在棉花抗病基因開發(fā)中的應(yīng)用

    SSR( Simple sequence repeat) 即簡單序列重復(fù),又稱微衛(wèi)星DNA,指的是一般1~6個(gè)核苷酸為重復(fù)單位串聯(lián)組成的簡短序列[20]。SSR分子標(biāo)記技術(shù)因其對模板DNA要求低,過程簡單,基因組覆蓋范圍廣,再現(xiàn)性好等諸多特點(diǎn)而應(yīng)用廣泛[21]。甄瑞等[22]以高抗黃萎病海島棉與高感黃萎病陸地棉品系的F2群體為材料,采用SSR分子標(biāo)記篩選得到海島棉黃萎病抗性基因連鎖分子標(biāo)記BNL3255208,位于第5號染色體的短臂上。杜威世等[23]以高抗黃萎病海島棉與高感黃萎病陸地棉品系的F2單株群體作為材料,利用SSR分子標(biāo)記檢測到1個(gè)黃萎病抗性的QTL位點(diǎn),位于SSR標(biāo)記位點(diǎn)BNL1414和BNL3556之間。陳勛基等[24]以高抗枯萎病陸地棉與海島棉感病品系的F2∶3群體為材料,利用SSR標(biāo)記構(gòu)建連鎖圖譜,共檢測到4個(gè)與棉花枯萎病相關(guān)QTL效應(yīng),分別位于3、15、23和26連鎖群上。朱永軍等[25]以高感枯萎病海島棉品種新海21號與高抗枯萎病海島棉品系HK237構(gòu)建的P1、P2、F1、F2、F2:3、BC1為材料,利用BSA法對2000對SSR引物進(jìn)行篩選并進(jìn)行遺傳連鎖分析,篩選得到分子標(biāo)價(jià)NAU3240與抗枯萎病基因位點(diǎn)之間緊密連鎖,兩者之間的遺傳距離為19 cm,該標(biāo)記位于棉花D11(Chr.21)染色體區(qū)域。試驗(yàn)采用傳統(tǒng)方法設(shè)計(jì)SSR標(biāo)記引物,所獲得的與海島棉枯萎病抗病基因相關(guān)聯(lián)SSR分子標(biāo)記是否與前人研究相同,還需對其所處基因連鎖群進(jìn)行進(jìn)一步定位比較后才能確定。

    4 結(jié) 論

    使用由海島棉枯萎病抗病相關(guān)基因設(shè)計(jì)出的40對SSR引物,對204份海島棉種質(zhì)資源進(jìn)行PCR擴(kuò)增,有2對引物擴(kuò)增出特異條帶,均來源于類黃酮代謝途徑CHS基因。引物CHS-04和CHS-05擴(kuò)增條帶與群體抗病性的高一致率,2對引物可以作為海島棉枯萎病抗性的分子標(biāo)記鑒定指標(biāo)。

    猜你喜歡
    海島棉感病枯萎病
    土壤pH和主要養(yǎng)分含量與山核桃干腐病的相關(guān)性研究
    5個(gè)歐亞種葡萄品種感染霜霉病后4種酶活性的變化
    轉(zhuǎn)Bt基因海島棉分子檢測及抗蟲性鑒定
    棉花陸海雜交親本及子代光合葉綠素?zé)晒鈪?shù)分析
    新疆海島棉生產(chǎn)現(xiàn)狀與發(fā)展建議
    非洲:控制香蕉枯萎病的新方法
    海島棉染色體片段代換系BC4F4產(chǎn)量及纖維品質(zhì)主成分分析
    葡萄白粉病與幾種酶活性的關(guān)系
    不同抗性甜瓜接種蔓枯病菌后若干生理指標(biāo)的變化
    中國瓜菜(2012年1期)2012-04-29 00:44:03
    銅、鋅元素對香蕉枯萎病的防治有顯著效果
    欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 校园春色视频在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲国产欧美人成| 精品久久久久久,| 午夜精品一区二区三区免费看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久99热这里只有精品18| 男人舔奶头视频| 一个人看的www免费观看视频| 国产精品一区二区免费欧美| 女人被狂操c到高潮| 日本a在线网址| 丰满人妻一区二区三区视频av| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 91麻豆精品激情在线观看国产| 一进一出抽搐gif免费好疼| 一个人看视频在线观看www免费| 国产综合懂色| x7x7x7水蜜桃| www.www免费av| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲综合色惰| 日本五十路高清| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产综合懂色| 能在线免费观看的黄片| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 精品久久久久久成人av| 美女 人体艺术 gogo| 免费观看的影片在线观看| 欧美一区二区亚洲| 久久久久久久久久黄片| 久久国产乱子免费精品| 国产免费一级a男人的天堂| 国产午夜精品论理片| 国产在线精品亚洲第一网站| 最新在线观看一区二区三区| 99riav亚洲国产免费| 天堂动漫精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产午夜福利久久久久久| 内射极品少妇av片p| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 性插视频无遮挡在线免费观看| 90打野战视频偷拍视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 丁香欧美五月| 好男人电影高清在线观看| 全区人妻精品视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 免费一级毛片在线播放高清视频| 男女那种视频在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 免费在线观看亚洲国产| 欧美乱妇无乱码| 日韩欧美免费精品| 99热只有精品国产| 久久人人精品亚洲av| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美日本视频| 99久久成人亚洲精品观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 深夜a级毛片| 日韩欧美 国产精品| 欧美精品啪啪一区二区三区| 一本精品99久久精品77| 麻豆av噜噜一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久精品国产清高在天天线| 1000部很黄的大片| 亚洲色图av天堂| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 一本精品99久久精品77| 一级av片app| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品久久视频播放| 极品教师在线免费播放| 国产精品一区二区三区四区久久| 色噜噜av男人的天堂激情| 成人国产一区最新在线观看| 欧美最新免费一区二区三区 | 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 色5月婷婷丁香| 亚洲在线观看片| 内地一区二区视频在线| xxxwww97欧美| av女优亚洲男人天堂| 一边摸一边抽搐一进一小说| 极品教师在线免费播放| 久久九九热精品免费| 露出奶头的视频| 精品午夜福利在线看| 国产高清激情床上av| 国产精品影院久久| 国产精品久久久久久久电影| 少妇熟女aⅴ在线视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| av黄色大香蕉| 老司机福利观看| 在线看三级毛片| 亚洲欧美日韩高清专用| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 免费观看人在逋| 有码 亚洲区| 久久久久久久久久黄片| 草草在线视频免费看| 午夜福利18| 亚洲精品一区av在线观看| 久久精品91蜜桃| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲无线观看免费| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产 一区 欧美 日韩| 色综合欧美亚洲国产小说| av女优亚洲男人天堂| 18美女黄网站色大片免费观看| 舔av片在线| 天堂动漫精品| www.色视频.com| 国产三级在线视频| 三级国产精品欧美在线观看| 在线a可以看的网站| 白带黄色成豆腐渣| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99久久精品一区二区三区| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 久久性视频一级片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 我要看日韩黄色一级片| a级毛片免费高清观看在线播放| 久久精品影院6| 99热只有精品国产| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲片人在线观看| av国产免费在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 最好的美女福利视频网| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 日韩人妻高清精品专区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产精品一区二区性色av| 亚洲国产高清在线一区二区三| 女同久久另类99精品国产91| 免费av不卡在线播放| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美+日韩+精品| 国产免费男女视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 午夜日韩欧美国产| 午夜视频国产福利| 中文字幕av在线有码专区| 可以在线观看毛片的网站| 脱女人内裤的视频| 欧美潮喷喷水| 午夜视频国产福利| 午夜日韩欧美国产| 在线观看舔阴道视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产熟女xx| 成人永久免费在线观看视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 一个人看视频在线观看www免费| 又紧又爽又黄一区二区| 国产黄片美女视频| 国产乱人伦免费视频| 激情在线观看视频在线高清| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本黄色视频三级网站网址| 国产午夜福利久久久久久| 色哟哟哟哟哟哟| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 中文字幕av成人在线电影| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 午夜免费成人在线视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 97人妻精品一区二区三区麻豆| av国产免费在线观看| 欧美bdsm另类| 一区二区三区四区激情视频 | 最近视频中文字幕2019在线8| 日韩av在线大香蕉| 国产淫片久久久久久久久 | 韩国av一区二区三区四区| 黄色日韩在线| 12—13女人毛片做爰片一| 美女大奶头视频| 我的女老师完整版在线观看| 天堂动漫精品| 深爱激情五月婷婷| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产淫片久久久久久久久 | 日韩欧美在线乱码| 黄色一级大片看看| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产一区二区在线观看日韩| 免费av毛片视频| 精品久久国产蜜桃| 亚洲七黄色美女视频| 成年人黄色毛片网站| 欧美黄色淫秽网站| 在线播放国产精品三级| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 动漫黄色视频在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 午夜a级毛片| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久久久久久精品吃奶| 1024手机看黄色片| 人妻久久中文字幕网| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 日韩欧美精品v在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲精品影视一区二区三区av| 成人av在线播放网站| 人妻久久中文字幕网| 成人永久免费在线观看视频| 欧美三级亚洲精品| 亚洲成人中文字幕在线播放| АⅤ资源中文在线天堂| 一个人免费在线观看电影| 好男人在线观看高清免费视频| 极品教师在线视频| 亚洲三级黄色毛片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产一区二区三区视频了| 亚洲精品日韩av片在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日本免费a在线| 精品欧美国产一区二区三| 首页视频小说图片口味搜索| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产伦一二天堂av在线观看| 九九在线视频观看精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 国产91精品成人一区二区三区| 极品教师在线免费播放| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久草成人影院| 国产欧美日韩精品一区二区| 精品福利观看| 国产av在哪里看| 精品午夜福利在线看| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美xxxx性猛交bbbb| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 日本黄大片高清| 国产一区二区在线观看日韩| 九九热线精品视视频播放| 男人的好看免费观看在线视频| 婷婷丁香在线五月| 中文资源天堂在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲精品色激情综合| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲av免费在线观看| 国产av不卡久久| 性色avwww在线观看| 99久国产av精品| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 制服丝袜大香蕉在线| 精品人妻熟女av久视频| 天堂影院成人在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 好男人电影高清在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 日本a在线网址| 国产中年淑女户外野战色| 国产成人a区在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 大型黄色视频在线免费观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产免费男女视频| 婷婷精品国产亚洲av| 国产私拍福利视频在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 欧美色视频一区免费| 高清在线国产一区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产av在哪里看| 久久久久久国产a免费观看| 午夜福利视频1000在线观看| 日本在线视频免费播放| 黄色配什么色好看| 精品人妻视频免费看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 在现免费观看毛片| av在线老鸭窝| 女同久久另类99精品国产91| 国产精品日韩av在线免费观看| 日韩高清综合在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品一区二区性色av| 久久久久久久久久黄片| 午夜老司机福利剧场| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 内射极品少妇av片p| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲最大成人av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 丁香六月欧美| 91久久精品电影网| 一二三四社区在线视频社区8| 久久久久九九精品影院| 亚洲第一电影网av| 国产乱人伦免费视频| eeuss影院久久| 日本a在线网址| 国产成人欧美在线观看| 91九色精品人成在线观看| 男人舔奶头视频| 久久精品综合一区二区三区| 久久久国产成人免费| 怎么达到女性高潮| 不卡一级毛片| 免费高清视频大片| 日韩高清综合在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲成av人片在线播放无| 两个人的视频大全免费| 十八禁网站免费在线| 亚洲av免费高清在线观看| 日本一本二区三区精品| 全区人妻精品视频| 美女黄网站色视频| 国产成人影院久久av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 午夜两性在线视频| 亚洲av免费在线观看| 在现免费观看毛片| 免费在线观看日本一区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 变态另类丝袜制服| 欧美色视频一区免费| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产三级中文精品| 欧美性感艳星| www.熟女人妻精品国产| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 嫩草影院精品99| 禁无遮挡网站| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 在线看三级毛片| 网址你懂的国产日韩在线| 久久精品影院6| 久久草成人影院| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 波多野结衣高清作品| bbb黄色大片| 99久久精品一区二区三区| 美女免费视频网站| 精品欧美国产一区二区三| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 日本 欧美在线| 日本在线视频免费播放| av天堂中文字幕网| 国产精品久久久久久精品电影| 一区二区三区免费毛片| 欧美国产日韩亚洲一区| 一个人看的www免费观看视频| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲avbb在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 超碰av人人做人人爽久久| 成年免费大片在线观看| 在线观看舔阴道视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 欧美色视频一区免费| 午夜精品一区二区三区免费看| 三级国产精品欧美在线观看| 九色成人免费人妻av| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美高清成人免费视频www| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲无线在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品98久久久久久宅男小说| eeuss影院久久| 国模一区二区三区四区视频| 在线播放国产精品三级| 身体一侧抽搐| 亚洲性夜色夜夜综合| 内地一区二区视频在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| www.www免费av| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲自偷自拍三级| 99久久精品国产亚洲精品| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲男人的天堂狠狠| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产三级在线视频| 中国美女看黄片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| av国产免费在线观看| bbb黄色大片| av福利片在线观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久久国产成人精品二区| 精品不卡国产一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 一区福利在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 悠悠久久av| 俺也久久电影网| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲欧美清纯卡通| 在线播放无遮挡| 高清在线国产一区| 在线看三级毛片| 伦理电影大哥的女人| 哪里可以看免费的av片| 欧美成人免费av一区二区三区| 悠悠久久av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲第一电影网av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一区二区三区免费毛片| 波多野结衣巨乳人妻| 国产欧美日韩一区二区三| 久久久久性生活片| 成人特级黄色片久久久久久久| 淫秽高清视频在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 成人国产一区最新在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲无线观看免费| 国产精品免费一区二区三区在线| aaaaa片日本免费| 久久精品91蜜桃| 岛国在线免费视频观看| 国产精品人妻久久久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品人妻1区二区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产爱豆传媒在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产毛片a区久久久久| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 免费黄网站久久成人精品 | 成人无遮挡网站| 成人美女网站在线观看视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日韩欧美国产在线观看| 午夜福利欧美成人| 欧美xxxx性猛交bbbb| 不卡一级毛片| 久久午夜福利片| 国产伦在线观看视频一区| 99热只有精品国产| 两人在一起打扑克的视频| 白带黄色成豆腐渣| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 色在线成人网| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 美女被艹到高潮喷水动态| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 麻豆国产97在线/欧美| 天堂影院成人在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲成av人片在线播放无| 香蕉av资源在线| 国产日本99.免费观看| 女同久久另类99精品国产91| 有码 亚洲区| 久久伊人香网站| 成年女人看的毛片在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 日韩欧美在线乱码| 精品久久国产蜜桃| 国产大屁股一区二区在线视频| 精品久久久久久,| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美区成人在线视频| 成人午夜高清在线视频| 少妇的逼水好多| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日本三级黄在线观看| 深夜a级毛片| 国产麻豆成人av免费视频| 国产极品精品免费视频能看的| 最近中文字幕高清免费大全6 | 三级毛片av免费| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 色5月婷婷丁香| 久久久久久国产a免费观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 极品教师在线视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲色图av天堂| 91在线精品国自产拍蜜月| 99久久99久久久精品蜜桃| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 在线播放国产精品三级| av欧美777| 成年女人毛片免费观看观看9| 免费看a级黄色片| 亚洲人成伊人成综合网2020| 身体一侧抽搐| 青草久久国产| 麻豆成人av在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 一个人免费在线观看的高清视频| 免费人成在线观看视频色| 国产高清视频在线观看网站| av黄色大香蕉| avwww免费| 亚洲久久久久久中文字幕| 精华霜和精华液先用哪个| 国产日本99.免费观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产成人aa在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 午夜精品在线福利| 欧美日韩黄片免| 男插女下体视频免费在线播放| 九九在线视频观看精品| 亚洲五月天丁香| av天堂中文字幕网| 欧美黑人巨大hd| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲黑人精品在线| 网址你懂的国产日韩在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国内精品一区二区在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品98久久久久久宅男小说| 欧美zozozo另类| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲av熟女| 欧美激情久久久久久爽电影| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 高清毛片免费观看视频网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 一边摸一边抽搐一进一小说| 网址你懂的国产日韩在线| 免费搜索国产男女视频| 国产乱人伦免费视频| 在线观看午夜福利视频| 小说图片视频综合网站| 一本久久中文字幕| 日本黄大片高清| 亚洲成av人片免费观看| 悠悠久久av| 精品人妻熟女av久视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久久国产成人精品二区| 少妇被粗大猛烈的视频| 中文字幕免费在线视频6| 日韩欧美一区二区三区在线观看| av黄色大香蕉| 波多野结衣高清作品| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日韩欧美在线乱码| 一个人免费在线观看电影| 国产精品国产高清国产av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 麻豆成人av在线观看| 久久性视频一级片| 精品人妻偷拍中文字幕| x7x7x7水蜜桃| 美女免费视频网站| 免费黄网站久久成人精品 | 精品日产1卡2卡| 99久久精品热视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产高清激情床上av| 在线播放国产精品三级| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产探花在线观看一区二区| 丰满乱子伦码专区|