全自動血液分析儀在有核細胞分析檢測中研究進展

韓秀玲 李清源 天津市寶坻區(qū)婦產(chǎn)醫(yī)院檢驗科 （天津 301800）

內(nèi)容提要：血液檢測中“有核細胞”一般是指有細胞核的紅細胞，又稱為幼稚紅細胞。健康成年人外周血中紅細胞無有核細胞，但是在胎兒外周血、新生兒或幼兒血液中可少量出現(xiàn)，成年人外周血中出現(xiàn)有核細胞時多為病理狀態(tài)，多見于溶血性貧血、急性大量失血、嚴重的組織缺氧、急慢性白血病及惡性腫瘤中。同時，血液中的有核細胞多為晚幼紅細胞，亦可見幼紅細胞或更幼稚的紅細胞。數(shù)字細胞圖像分析技術(shù)是自動掃描技術(shù)與現(xiàn)代神經(jīng)網(wǎng)絡分析相互結(jié)合，能簡化細胞掃描過程，更加有效地對異常的細胞進行篩選與分類。全自動血液分析儀是有核細胞分析中常用的測定方法，具有特異性和準確性高的優(yōu)點，可用于臨床檢測細胞的數(shù)量和形狀，且操作簡便，能評估患者身體狀態(tài)，可指導臨床治療。因此，以有核細胞為起點，分析傳統(tǒng)血涂片檢驗在有核細胞中的缺點，探討全自動血液分析儀在有核細胞分析中的優(yōu)點及注意事項，為臨床有核細胞分析提供方法。

血液檢查中，所指的“有核細胞”一般是指骨髓中未完全成熟紅細胞，由于各種原因出現(xiàn)在外周血液中。新生兒外周血中可出現(xiàn)數(shù)量不等的有核細胞，且隨著年齡的增加逐漸在外周血中消失。趙艷等[1]研究表明，健康成人外周血中一般無有核細胞，一般只存在于人體出現(xiàn)某種病理狀態(tài)時，如：血液系統(tǒng)惡性腫瘤、身體缺氧、骨髓損傷、感染等，將會引起有核細胞的數(shù)量與形態(tài)發(fā)生變化。因此，加強有核細胞檢測、分析，對評估患者身體狀態(tài)具有重要的意義。傳統(tǒng)的血涂片檢驗是有核細胞常用的方法，并將其視為“金標準”，但是該方法效率低下、繁冗、耗時費力、精密度較差，無法進行標準化。全自動血液分析儀是一種全自動檢測方法，通過WNR、WNB等通道，利用熒光染色流式細胞進行緊缺的辨別，能避免額外試劑和附加成本，從而可精準的識別和技術(shù)有核細胞。此外，借助全自動血液分析儀能完成白細胞自動校正，避免其他細胞的干擾[2]。因此，本研究以有核細胞為起點，分析傳統(tǒng)血涂片檢驗在有核細胞中的優(yōu)缺點，探討全自動血液分析儀在有核細胞分析中的優(yōu)點及注意事項，綜述如下。

1.傳統(tǒng)血涂片檢驗優(yōu)缺點

目前，臨床上對于有核細胞分析儀檢測方法以血涂片檢驗為主，并將其視為“金標準”。李小云[3]研究表明，血液細胞形態(tài)學檢驗涉及內(nèi)容相對較多，包括紅細胞、白細胞、血小板及其他異常細胞形態(tài)學的基礎知識。①異常白細胞形態(tài)。中性粒細胞的毒性變化較為常見，多見于嚴重感染及中毒。密切觀察白細胞數(shù)量及中性粒細胞的毒性變化，對判斷感染程度、患者抵抗力及預后判斷具有重要價值。②中性粒細胞的其他異常變化。包括巨多分葉和中性粒細胞、棒狀小題、其他異常粒細胞。③異型粒細胞。多見于嚴重病毒感染、過敏及中毒。④涂抹細胞或籃狀細胞。多見于淋巴細胞白血病。從上述分析結(jié)果看出，血涂片在臨床疾病診斷、預后判斷中發(fā)揮了重要的作用，但是由于血片制備和染色不良，常使細胞鑒別難度較大，部分患者甚至會引起錯誤結(jié)論，如：血膜過厚細胞重疊縮小，血膜太薄白細胞集中在邊緣。分析原因：傳統(tǒng)的血涂片檢驗以人工進行觀察為主，雖然能反映有核細胞數(shù)量、形態(tài)，但是，檢測效率低下、繁冗、耗時費力、精密度較低，難以實現(xiàn)檢驗標準化，該結(jié)果對判斷往往存在主觀性、片面性，各實驗室結(jié)構(gòu)難以互認，導致臨床應用受到局限性。傳統(tǒng)的血涂片用于有核細胞分析中存在諸多不足，主要體現(xiàn)在以下4個方面：①檢驗門診血液學檢驗力量相對薄弱，對于異常細胞如：原始細胞、幼稚細胞等具有較高的漏檢率[4]；②血細胞自動分析儀的普遍下，再加上操作便捷性的影響，有核細胞檢驗的重要性背進一步淡化、忽視；③血涂片用于有核細胞中檢驗診斷缺乏其他參考信息，導致臨床使用受到限制；④外周血涂片難以對造血深層次了解。當前，臨床實驗室尚缺乏較為成熟和完整的可定量的質(zhì)控片，導致室內(nèi)與室間質(zhì)量控制難度較大。因此，積極探索有效的方法，加強有核細胞的檢驗，對指導臨床治療具有重要的意義[5]。

2.全自動血液分析儀在有核細胞分析中的優(yōu)缺點

由于有核細胞在健康人群中相對罕見，常被誤認為白細胞，不僅會對其他檢驗指標產(chǎn)生影響，亦可對臨床診斷產(chǎn)生偏差。根據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會（CLSI）建議，應根據(jù)質(zhì)量需求進行推片鏡檢，保證有核細胞的準確計數(shù)。近年來，隨著醫(yī)療檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展，全自動血液分析儀得到發(fā)展，能為有核細胞分析提供新的思路，具體如下。

2.1 全自動血液分析儀在有核細胞中的應用

全自動血液分析儀是一種新型的檢測儀器與設備，通過分析——用吸引探針吸引樣品檢測緊缺的量進入混均腔，且與稀釋液進入轉(zhuǎn)換器中，采用相同的轉(zhuǎn)換器根據(jù)順序分析白細胞計數(shù)、血紅蛋白、紅細胞計數(shù)、血小板計數(shù)及有核細胞的所有參數(shù)[6]。對有核細胞進行分析時，通過相應的溶血劑被加入測量室中，進一步稀釋和溶解紅細胞，并對樣品完成10min化學反應，且反應過程中保證有核細胞發(fā)生溶解，從而產(chǎn)生相應的化合物，完成有核細胞的定量分析。目前，全自動血液分析儀廣泛用于各級醫(yī)院中，檢驗準確的結(jié)果為臨床診斷提供非常大的方便，可指導臨床診療。

2.1.1 全自動血液分析儀用于有核細胞中優(yōu)點

全自動血液分析儀用于有核細胞中具有以下優(yōu)點：①獨立的血紅蛋白測量系統(tǒng)，特有的體積計量管直接定量技術(shù)，用于有核細胞中能消除干擾源，提高診斷準確性；②全新高密度微量血液處理技術(shù)，氰化高鐵血紅蛋白法、氰化物的SFT法及較大的觸摸屏；③粒子向?qū)Ъ夹g(shù)。儀器具有細胞粒子向?qū)Ъ夹g(shù)，能保證細胞粒子以直線運動產(chǎn)生真實脈沖，從而保證有核細胞的計數(shù)；④儀器具備先進的浮動界標算法，配合較為完善的血樣專家系統(tǒng)，能及時篩選出一次的有核細胞標本[7]；⑤細胞信號全數(shù)字化處理技術(shù)，具有成熟的液路設計，保證檢驗運行測量結(jié)果的準確性。同時，儀器具有雙向立體后旋流技術(shù)，用于有核細胞中能避免流體對檢驗結(jié)果產(chǎn)生影響。Lazcano等[8]對全自動血液分析儀DM96系統(tǒng)的有核細胞辨別能力的穩(wěn)定性進行綜合評價，并將血細胞分析儀、顯微鏡下結(jié)果進行比較，結(jié)果表明：全自動血液分析儀速度較人工快，中性粒細胞、淋巴細胞分類具有較好的相關性。同時，系統(tǒng)對血小板的形態(tài)及計數(shù)與血常規(guī)自動分析儀具有良好的相關性，能在一定程度上替代人工檢驗。馬學峰[9]對兩臺基于人工神經(jīng)網(wǎng)絡顯微鏡自動計數(shù)系統(tǒng)進行比較分析，結(jié)果表明：二者均能對紅細胞、白細胞、有核細胞進行分類，但是對病理細胞的分類相對較差。國內(nèi)學者[10]分別比較了XN-1000、FCM及鏡檢法的有核細胞檢驗結(jié)果，但是由于實驗中多數(shù)標本選擇異常細胞較為單一的溶血性貧血患者的EDTA-K2抗凝靜脈血，其中含有其他異常細胞數(shù)量較少，導致其形態(tài)學方面干擾相對較少，結(jié)果可靠性較為理想。

2.1.2 全自動血液分析儀用于有核細胞中準確性分析

孫亞杰[11]研究發(fā)現(xiàn)，外周血中出現(xiàn)有核細胞的患者主要來源于以下典型科室，即：血液科占47.4%、兒童10.3%、感染科6.4%、腎臟科5.1%、皮膚科為3.8%。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是多方面的，正常情況下新生兒或幼兒血液中存在有核細胞，而成人中出現(xiàn)有核細胞常與溶血性貧血、急慢性白血病和感染等有關。對于臨床上疑似為血液病或已確診為血液病患者，進行復查血細胞計數(shù)時應選擇有核細胞計數(shù)，避免發(fā)生漏診。對于標本外周血中白細胞極度減低時會對全自動血液分析儀檢驗精度產(chǎn)生一定的誤差。何文軍等[12]一項研究XN-1000和鏡檢法的計算方法，結(jié)果表明：有核細胞得到需要白細胞絕對計數(shù)值，上述原因會對有核細胞結(jié)果準確性產(chǎn)生影響。從本研究結(jié)果看出，全自動血液分析儀快速檢驗有核細胞能矯正其對白細胞計數(shù)的干擾，對于臨床疾病的鑒別和診斷具有重要的指導意義。

2.2 全自動血液分析儀在有核細胞中的缺點

盡管全自動血液分析儀用于有核細胞中具有明顯的優(yōu)勢，但是該檢驗方法使用時亦存在一定的局限性和不足。當體內(nèi)有核細胞數(shù)量偏高時，全自動血液分析儀的識別和自動校準與推片鏡檢結(jié)果產(chǎn)生一定的偏差，該方法檢驗師需要提高其對有核細胞識別能力，從而保證檢驗結(jié)果的準確性與可靠性。研究表明[13]，由于全自動血液分析儀利用電阻抗法對有核細胞進行檢驗分析，均存在分類不準確特點，尤其是對于中間型細胞群異常時的檢驗與結(jié)果存在出入。一項研究[14]以三分群ABX MRCRO S60血液分析儀與三分群CD1800型全自動血液分析儀對兒童血液標本進行檢驗，并同時采用手工染色鏡檢進行對比分析，結(jié)果表明：當血細胞分析儀檢測有核細胞時應進行人工鏡檢復查，防止幼稚細胞、異型淋巴細胞等病理性細胞的漏檢。此外，全自動血液分析儀用于有核細胞中亦存在一定的誤診率和漏診率。高飛[15]對有核細胞標本進行統(tǒng)計分析，所有標本均采用全自動血液分析儀檢驗，結(jié)果表明：標本復檢率為15.27%，陽性率為6.7%，假陰性率為1.86%。同時，全自動血液分析儀的使用不能將患者外周血形態(tài)異常的特征表達出來，導致容易漏掉重要的診斷信息。對于血象有變化的病例，尤其是全自動血液分析儀提示異常病例，如不進行鏡檢復查，誤診、漏診率較高。

2.3 全自動血液分析儀在有核細胞中注意事項

全自動血液分析儀用于有核細胞中雖然具有諸多局限性，但是臨床使用時亦存在諸多局限性。因此，為了提高有核細胞檢出率，標本檢驗時應注意以下事項：①當血細胞分析儀檢驗有核細胞時，且為10.0%以上時，應進行瑞特染色的人工鏡檢復查，防止幼稚細胞、異型淋巴細胞、嗜酸性細胞等病理性細胞的漏檢率；②為了降低全自動血液分析儀用于有核細胞中誤診率或漏診率，全自動血液分析儀使用時應創(chuàng)建一個理論-檢驗-疾病相互結(jié)合，緊密聯(lián)系的新體系，實踐過程中不斷發(fā)展完善和提高，以提高檢測準確度和精度；③全自動血液分析儀用于有核細胞中，應結(jié)合醫(yī)院情況建立自己相應的復檢規(guī)則，有效降低誤診率[16]；④檢查前應注意正常的生活飲食習慣，注意個人衛(wèi)生；檢查時應積極配合醫(yī)生，并常規(guī)完成玻片的清洗、控制染色的施加、染色液的濃度、室溫的高低及細胞的多少等，避免對檢查結(jié)果產(chǎn)生影響。

3.小結(jié)

綜上所述，有核細胞檢驗能為臨床疾病的診療提供參考依據(jù)，常規(guī)方法以血涂片檢驗為主，并將其視為“金標準”，但是檢驗所需時間較長，難以實現(xiàn)大樣本量的檢驗。而全自動血液分析儀是一種新型的檢驗方法，用于有核細胞能實現(xiàn)定量分析，其圖像能完整保存在數(shù)據(jù)庫中，便于臨床診療。但是，全自動血液分析儀臨床使用時亦存在一定的局限性，檢驗過程中必須保證標本合格，對于檢驗存在偏差時可聯(lián)合血涂片檢驗，提高有核細胞檢出率，指導臨床診療。