原癌基因蛋白質(zhì)c-Myc及骨膜蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

陳 璐，喬建新，王鵬飛

腦膠質(zhì)瘤是大腦或脊髓膠質(zhì)細(xì)胞癌變產(chǎn)生的常見顱腦原發(fā)腫瘤，起源于神經(jīng)上皮，且大多數(shù)為惡性腫瘤，發(fā)病率占顱腦腫瘤的36%～63%[1-2]。腦膠質(zhì)瘤的惡性程度高，侵襲力強(qiáng)，目前對腦膠質(zhì)瘤的治療主張術(shù)后同步放療或者化療，但是手術(shù)治療風(fēng)險(xiǎn)高，難以完全清除，容易復(fù)發(fā)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，原癌基因蛋白質(zhì)c-Myc及骨膜蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)引起了諸多學(xué)者的注意，有研究發(fā)現(xiàn)在高級別膠質(zhì)瘤樣本中，骨膜蛋白呈高表達(dá)，c-Myc也發(fā)生表達(dá)異常，認(rèn)為二者的表達(dá)變化與膠質(zhì)瘤惡性程度的關(guān)系密切[3-4]。因此，本研究觀察c-Myc及骨膜蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，旨在為腦膠質(zhì)瘤的臨床診斷及預(yù)后評估提供參考?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2017年2月—2018年10月我院行腫瘤切除術(shù)的腦膠質(zhì)瘤82例作為研究組，其中男49例，女33例；年齡39～74(47.35±6.23)歲；病程1～24(12.16±5.84)個(gè)月。根據(jù)WHO膠質(zhì)瘤分級[5]分為：低級別組(Ⅰ～Ⅱ級，惡性程度低)32例、高級別組(Ⅲ～Ⅳ級，惡性程度高)50例。①納入標(biāo)準(zhǔn)：均為原發(fā)腦膠質(zhì)瘤，符合腦膠質(zhì)瘤的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且經(jīng)CT、MRI及術(shù)后病理檢查確診；術(shù)前未行放化療；均無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。②排除標(biāo)準(zhǔn)：有血液系統(tǒng)疾病者；有其他惡性腫瘤者；有臟器功能異常者；有免疫系統(tǒng)疾病或結(jié)締組織病變者。另選取同期于我院行顱內(nèi)減壓手術(shù)的腦外傷60例作為對照組，均經(jīng)CT和MRI等影像學(xué)檢查證實(shí)無任何腫瘤性疾病，其中男37例，女23例；年齡38～73(48.01±5.97)歲。研究組與對照組的基本資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)執(zhí)行。

1.2方法 c-Myc及骨膜蛋白均采用免疫組織化學(xué)染色法檢測[7]。將研究組腦膠質(zhì)瘤組織及對照組正常腦組織均使用4%甲醛固定24 h，石蠟包埋后保存至4 ℃冰箱中，制備厚度為3～4 μm的連續(xù)切片，嚴(yán)格按照說明書予以二甲苯脫蠟，然后置于蒸餾水中，抗原修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)，室溫孵育30 min，滴加一抗稀釋液，4 ℃過夜，甩除一抗，加入二抗，常溫孵育30～40 min后甩除二抗，在顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察下DAB顯色，注意保證每個(gè)切片顯色時(shí)間一致。DAB顯色劑與SP試劑盒均購自上海研生實(shí)業(yè)有限公司。免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果判定均由專業(yè)病理科醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行，c-Myc及骨膜蛋白免疫染色后主要定位于細(xì)胞核，出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，反之則為陰性。隨機(jī)選取5個(gè)視野，記錄視野中陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)，計(jì)算在1000個(gè)腫瘤細(xì)胞中染色陽性所占比例，根據(jù)其百分比判斷著色程度分級，共分為4個(gè)等級[8]：①陽性細(xì)胞率<10%為陰性；②陽性細(xì)胞率≥10%，且≤40%為弱陽性；③陽性細(xì)胞率>40%，且≤70%為中度陽性；④陽性細(xì)胞率>70%為強(qiáng)陽性。陽性率=(弱陽性+中度陽性+強(qiáng)陽性)/總例數(shù)×100%。

1.3觀察指標(biāo) 比較c-Myc及骨膜蛋白在兩組及不同級別腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的差異，分析c-Myc及骨膜蛋白與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1研究組和對照組c-Myc表達(dá)比較 研究組c-Myc表達(dá)陽性率高于對照組(P<0.01)。見表1。

表1 腦膠質(zhì)瘤組織和腦外傷正常腦組織兩組c-Myc表達(dá)比較[例(%)]

2.2研究組和對照組骨膜蛋白表達(dá)比較 研究組骨膜蛋白表達(dá)陽性率高于對照組(P<0.01)。見表2。

表2 腦膠質(zhì)瘤組織和腦外傷正常腦組織兩組骨膜蛋白表達(dá)比較[例(%)]

2.3不同級別腦膠質(zhì)瘤組織c-Myc表達(dá)比較 高級別組c-Myc表達(dá)陽性率高于低級別組(P<0.05)。見表3。

表3 不同級別腦膠質(zhì)瘤組織c-Myc表達(dá)比較[例(%)]

2.4不同級別腦膠質(zhì)瘤組織骨膜蛋白表達(dá)比較 高級別組骨膜蛋白表達(dá)陽性率高于低級別組(P<0.01)。見表4。

表4 不同級別腦膠質(zhì)瘤組織骨膜蛋白表達(dá)比較[例(%)]

2.5c-Myc、骨膜蛋白與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系 Pearson直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，c-Myc和骨膜蛋白與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移均呈顯著正相關(guān)(r=0.561和0.615，P=0.002和0.001)。見圖1。

3 討論

腦膠質(zhì)瘤屬于常見的腦部惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展與基因及細(xì)胞因子共同作用有關(guān)，故通過基因及細(xì)胞因子檢測，發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤早期診斷標(biāo)志物是目前的主要研究方向[9]。

c-Myc是體內(nèi)重要的原癌基因蛋白質(zhì)，其表達(dá)產(chǎn)物功能多樣，參與了細(xì)胞的調(diào)控、增殖、分化及代謝活動(dòng)，c-Myc在組織內(nèi)呈現(xiàn)不表達(dá)和低表達(dá)屬于正常范圍，但在過度表達(dá)時(shí)會(huì)誘導(dǎo)正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化甚至凋亡[10-11]。研究證實(shí)，c-Myc和骨膜蛋白具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，在胃癌、宮頸癌等腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，對腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重大影響[12]。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，c-Myc表達(dá)異常會(huì)破壞細(xì)胞內(nèi)的控制系統(tǒng)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失去控制，促進(jìn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和腫瘤的進(jìn)展[13]。故控制c-Myc基因編碼蛋白含量對維持細(xì)胞正常功能具有重要作用[14]。

骨膜蛋白是一種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，最早在小鼠成骨細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)，又稱為成骨細(xì)胞特異性因子-2[15-16]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，骨膜蛋白通過與腫瘤細(xì)胞受體相結(jié)合進(jìn)而調(diào)控腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，其高表達(dá)與胰腺癌、胃癌等腫瘤的侵襲性相關(guān)[17]。有學(xué)者認(rèn)為，骨膜蛋白對細(xì)胞的黏附和遷移至關(guān)重要，很可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，是一個(gè)能夠預(yù)測腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后的重要蛋白[18-19]?；诖耍疚谋容^腦膠質(zhì)瘤組織及腦外傷正常腦組織中c-Myc和骨膜蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果顯示研究組c-Myc和骨膜蛋白表達(dá)陽性率均高于對照組，說明c-Myc和骨膜蛋白在正常腦組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在腦膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)。本研究還發(fā)現(xiàn)，在不同級別腦膠質(zhì)瘤組織中，高級別組c-Myc和骨膜蛋白表達(dá)陽性率均高于低級別組，說明c-Myc和骨膜蛋白表達(dá)水平越高，腦膠質(zhì)瘤患者的病情越嚴(yán)重。另外，在相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)，c-Myc和骨膜蛋白與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)，說明c-Myc和骨膜蛋白表達(dá)水平越高，腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的可能性越大，這與既往報(bào)道結(jié)果相符合[20]。分析其中原因，可能是c-Myc的高表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞增殖失去控制，激活了與細(xì)胞增殖分化有關(guān)的基因，加速膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖；同時(shí)骨膜蛋白在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生和發(fā)展過程中能夠調(diào)控膠質(zhì)瘤的發(fā)展?fàn)顟B(tài)，參與膠質(zhì)瘤的間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，二者對腦膠質(zhì)瘤患者的早期診斷及預(yù)后評估具有重要意義。

綜上所述，c-Myc及骨膜蛋白在腦膠質(zhì)瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，并且與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，通過檢測c-Myc及骨膜蛋白表達(dá)水平，可為患者病情、預(yù)后評估提供參考。