湖羊腹腔鏡輸精技術(shù)

高 峰，李心海*，王 巖

(1.徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 徐州 221000；2.江蘇漢羊牧業(yè)生態(tài)科技有限公司，江蘇 徐州 221000)

湖羊是江浙地區(qū)常見和養(yǎng)殖較為廣泛的綿羊品種，繁殖性能優(yōu)良，是太湖平原重要的家畜之一。湖羊的養(yǎng)殖優(yōu)勢比較明顯，具有全年均可發(fā)情、每胎多羔、泌乳性能優(yōu)良、生長發(fā)育速度快、耐熱耐濕、適合舍飼等優(yōu)良性狀，且肉質(zhì)細膩，裘皮美觀，深受消費者的歡迎，是1種適宜廣泛舍飼的優(yōu)良品種，也是羊品種改良的優(yōu)質(zhì)資源[1～5]。腹腔鏡輸精技術(shù)是近幾年興起的1項較為先進的繁殖技術(shù)。相比陰道輸精和子宮頸口輸精，該技術(shù)能夠在一定程度上減少精子在母體子宮中的運行時間，提高精子的利用率，如果配合同期發(fā)情技術(shù)，可大幅度提高母羊的受胎率。為了進一步發(fā)揮湖羊的優(yōu)良特性，加快湖羊繁殖新技術(shù)的推廣，筆者于2020年10月至2021年7月對湖羊的同期發(fā)情技術(shù)、腹腔鏡輸精技術(shù)進行研究總結(jié)，現(xiàn)介紹如下，供同行參考。

1 材料

1.1 試驗羊選擇年齡在1～2歲齡的經(jīng)產(chǎn)母湖羊，要求體重50 kg左右、膘情良好、無生殖系統(tǒng)疾病。選擇體格健壯、性欲旺盛、體重60 kg左右、無生殖系統(tǒng)疾病的公羊(或者做過陰莖扭轉(zhuǎn)術(shù)的公羊)。所有試驗羊均提前驅(qū)蟲、健胃、注射疫苗，避免產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。公、母羊分開飼養(yǎng)，全舍飼，自由采食和飲水。精飼料選擇全價顆粒料，粗飼料選擇苜蓿、花生秧、秸稈等青貯飼料。

1.2 藥品及器材(1)羊用陰道栓(CIDR)，南非ZOETIS公司生產(chǎn)，規(guī)格：20支/包，含孕酮0.3 g/支；獸用孕馬血清(PMSG)，寧波三生生物科技有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：1 000 IU/瓶，批號：110914564；氯前列烯醇(PGF2α)，寧波三生生物科技有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：2 mL/瓶，批號：110912207，4 ℃條件保存。(2)體視顯微鏡1架，子宮內(nèi)輸精槍1套，腹腔鏡手術(shù)臺1臺。

2 操作方法

2.1 同期發(fā)情筆者經(jīng)過多種藥物、劑量的配合試驗，最終選擇母羊年齡在1～2歲齡左右，CIDR+PMSG+PGF2α法進行同期發(fā)情操作，其中PMSG使用劑量為200～240 IU。具體操作步驟如下：(1)陰道栓的選擇：目前使用的陰道栓有海綿栓和硅膠栓2種。海綿栓一般使用3 cm左右的圓柱形，吸附孕酮后穿上長15～20 cm的線即可使用[6]。海綿栓價格便宜，但容易出現(xiàn)掉栓和粘附陰道的現(xiàn)象。硅膠栓一般采用高分子食品級硅膠材料制成，整體成型，內(nèi)置孕酮，前端呈Y型，后端有牽引線以便取栓。硅膠栓通過前端Y形分叉可以將栓體牢固在陰道內(nèi)，不易掉栓，而且硅膠栓Y型前端設(shè)置的小孔可以將孕酮緩慢釋放，保證激素的有效使用，不容易造成陰道發(fā)炎的現(xiàn)象，不足之處是成本較高，為了確保放栓效果，可以在放栓的第9 d換栓1次。(2)埋栓：先將母羊保定，母羊外陰部用消毒液進行擦拭消毒，將陰道栓前端分叉合攏壓入到栓槍內(nèi)腔，在栓槍前端涂上少許凡士林，將陰道栓放置到陰道深部直至不能深入為止，此時牽引線外露，為避免母羊互相舔咬導(dǎo)致掉栓，可以將牽引線剪短。(3)埋栓之日記為第1 d，埋栓13 d。第13 d肌肉注射PMSG 200～240 IU，第14 d取栓并肌肉注射PGF2α 0.1 mg。撤栓后分別于0～24 h、25～48 h、49～72 h進行發(fā)情鑒定。

2.2 發(fā)情鑒定發(fā)情鑒定采用公羊試情法，用試情布包住外生殖器。試情布一般采用質(zhì)地較為柔軟的棉布，保護公羊外生殖器，使用完及時清洗、日光曝曬后備用。撤栓后用試情公羊每天早、晚各試情1次，并觀察記錄母羊發(fā)情狀態(tài)。如果母羊被公羊爬跨后出現(xiàn)身體站立不動、接受爬跨、外陰部紅腫、流出黏液、尾巴搖動、頻頻排尿等現(xiàn)象即認(rèn)定為有發(fā)情表現(xiàn)。

2.3 腹腔鏡輸精

2.3.1 輸精前準(zhǔn)備工作(1)母羊的處理：輸精前母羊空腹禁食24～36 h(可以適當(dāng)飲水)。手術(shù)前將母羊倒立保定于胚胎移植架上，前后肢分別固定[7,8]。胚胎移植架的傾斜角度不宜超過45°，太高容易造成胃內(nèi)物質(zhì)倒流。乳房下部的手術(shù)部位先用剪刀剪毛，再用毛巾蘸取肥皂水濕潤后剃刀刮毛，碘酒消毒皮膚后酒精脫碘。輸精前肌肉注射(或靜脈注射)速眠靈0.1 mL麻醉(由于每只羊的耐受性不同，手術(shù)過程中如羊蘇醒掙扎，可以補注0.1 mL)。(2)手術(shù)室處理：手術(shù)室要求干凈、無塵，配備足夠照明用電，保證光線明亮，地面硬化易于清理，定期用新潔爾滅噴霧消毒。室內(nèi)最好配有空調(diào)，溫度保持在25 ℃左右。手術(shù)前用紫外燈照射1～2 h。手術(shù)臺采用自制的可以單面升降的胚胎移植架，整體采用鋼管焊接，承重部位用帆布帶連接，手術(shù)前用噴霧消毒。(3)器械消毒：手術(shù)器械用0.1%新潔爾滅浸泡20～30 min，生理鹽水沖洗后用消毒過的紗布擦干備用。每次使用完后要消毒處理，以免交叉感染。手術(shù)使用的創(chuàng)巾、紗布以及玻璃儀器清洗后用牛皮紙包好放到高壓滅菌鍋中消毒。(4)手術(shù)人員消毒：手術(shù)人員穿著手術(shù)服，戴手術(shù)帽，手臂用肥皂清洗后酒精消毒。手指甲剪短磨光，不留污物。手掌用肥皂清洗后酒精消毒，佩戴手套。(5)精液處理：鮮精收集后要檢查精子活力，使用等溫精液稀釋液將檢測合格的精液進行3～4倍稀釋。一般鮮精取1.5 mL左右，經(jīng)過稀釋后每只母羊輸精0.2 mL。如果沒有專用稀釋液，可以采用加入維生素B12的等溫生理鹽水作為稀釋液，效果也不錯。

2.3.2 腹腔鏡輸精操作穿刺部位一般選擇在母羊乳頭下方14 cm左右，腹中線兩側(cè)各穿刺1孔，見圖1乳頭下方黑點所在位置[9,10]。在左側(cè)乳頭下方14 cm左右，偏離腹中線左側(cè)3～4 cm 處插入孔徑0.7 cm 的套管針，刺穿皮膚深度2 cm，將套管送入腹腔(注意不要將套管針頭刺入太深，以免刺穿其他內(nèi)臟)。通過套管往腹腔內(nèi)部充入適量氣體，然后關(guān)閉氣閥，其目的是壓迫內(nèi)臟向前，暴露卵巢和子宮角。向腹腔伸入帶有冷光源的內(nèi)窺鏡，觀察卵巢上排卵點和紅體狀態(tài)以及數(shù)量。此時，在右側(cè)相同位置處插入套管針，拔針后通過套管插入輸精槍。用輸精槍輕輕挑起卵巢，以便觀察排卵點和紅體。如果卵巢上有多個紅體和排卵點時即可輸精，若沒有排卵點和紅體則不必輸精。找到子宮角分叉處，在一側(cè)子宮角距離分叉1/3 處，輸精槍前端針頭刺入到子宮角內(nèi)，應(yīng)感覺到有阻力，緩慢注射1/2精液量，然后拔出針頭，將剩余精液注入到另一側(cè)子宮角相應(yīng)位置，完成輸精。腹腔鏡輸精過程中要注意以下問題：(1)手術(shù)過程中注意母羊頭頸部彎曲程度不能過高，防止氣管不通暢。輸精操作后30 min左右母羊會逐漸蘇醒，也可以注射鹿醒靈0.2 mL解除麻醉。(2)用輸精槍尋找卵巢和子宮角時注意動作要輕。若操作不當(dāng)，輸精槍針頭很容易刺破子宮附近的動脈造成大出血?？梢圆捎脹]有針頭的輸精槍或者長鉗先進行尋找，然后再輸精。輸精槍針頭不要觸碰卵巢，以免造成卵泡破裂。(3)輸精槍輸精位置要選擇靠近子宮角基部1/3 處，最好在子宮角中線處。不要選擇在子宮角皺褶處，容易造成脫針。(4)輸精時要依靠手腕的擺動力量將針頭完全扎入到子宮角內(nèi)，手臂不要動，以免動作過大造成其他不必要的損傷。輸精時動作要與羊腹部內(nèi)臟運動相一致，以免驚擾母羊。(5)輸精過程中要隨時注意觀察輸精位置有無精液外流。如有外流說明輸入不順暢，可能扎到皺褶中或子宮角壁上，可以拔出后重新輸入。腹腔鏡輸精手法需要多次操練，熟練掌握后幾分鐘即可完成輸精操作。

實際操作中也可以將子宮角取出體外，在相應(yīng)位置進行輸精，輸精完成后用生理鹽水沖洗子宮角，在腹腔導(dǎo)入頭孢曲松鈉1 g，防止發(fā)炎和子宮粘連，最后采用可吸收線進行2層縫合，將腹膜、肌肉一起縫合，皮膚單獨進行縫合?？p合后，連續(xù)3 d肌肉注射頭孢曲松鈉1 g/次，2次/d。腹腔外輸精操作難度較小，但是子宮角暴露在外，開口相對較大，有一定手術(shù)風(fēng)險，對母羊損傷較大。

1、2：穿刺部位圖1 腹腔鏡輸精穿刺部位

2.3.3 母羊輸精后護理腹腔鏡體內(nèi)輸精對母羊造成的創(chuàng)傷很小，所以一般不需要縫合，僅用碘伏擦拭傷口即可。處理后的母羊可以集中入欄，與沒有輸精的母羊分群飼喂。輸精后不要立即飼喂，一般間隔幾個小時后飼喂，而且不宜飼喂過飽，以免對傷口產(chǎn)生壓迫，造成傷口外凸。每天隨時觀察，上、下午各用碘伏消毒1次傷口。如果發(fā)現(xiàn)傷口外凸，則需進行手術(shù)縫合后消炎處理。

3 小結(jié)

通過對腹腔鏡輸精技術(shù)的研究探索，總體而言，腹腔鏡輸精技術(shù)相比傳統(tǒng)輸精方式克服了母羊子宮頸彎曲程度高、皺褶多、精子難以通過的生理特點，縮短了精子在母羊生殖道運行的距離和時間，節(jié)省了精液的使用量。另外，腹腔鏡輸精過程中能夠直接觀察到卵巢排卵點和紅體的狀態(tài)，便于輸精操作。該技術(shù)與同期發(fā)情技術(shù)結(jié)合使用，能夠極大限度地利用種公羊的種用價值，使優(yōu)良基因得以快速擴繁。此外，腹腔鏡輸精技術(shù)對母羊傷害極小，與同期發(fā)情技術(shù)配合使用，有助于同期配種、同期產(chǎn)羔，縮短空懷期，降低養(yǎng)殖成本，利于管理和防疫，有助于湖羊工廠化養(yǎng)殖的實現(xiàn)。不足之處是腹腔鏡輸精需要的設(shè)備投入較大，對操作人員技術(shù)水平要求較高，需要加強人員的技術(shù)培訓(xùn)。從長遠來看，這項技術(shù)的發(fā)展前景較大，也將會取代傳統(tǒng)輸精方法，更加高效地服務(wù)于家畜品種的繁殖和改良。