罕見抗-Tja合并自身抗體致疑難配血分析

許露萍 尹俊皓 王若涵

P血型為血型集合GLOB中的罕見表型，其中個體缺乏P，P1和PK抗原，其中P和PK是公共抗原，在這些個體的血清中通常會出現(xiàn)針對這些抗原的抗體，稱為抗Tja[1]，由于為隱性遺傳，在人群中的比例低[2]，屬于稀有血型。在日常配血工作中，我們發(fā)現(xiàn)1例由于血清中存在抗-Tja合并自身抗體引起的交叉配血困難標(biāo)本，現(xiàn)報道如下。

材料與方法

1 一般資料 患者賈某，男，53歲，因泌尿系結(jié)石住院，擇期手術(shù)，既往體檢，無輸血史，術(shù)前Hb：67 g/L，擬術(shù)前輸血糾正貧血，申請輸血。在配血過程中發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體篩查3個細(xì)胞均陽性, 凝集強度無強弱之分,與多位同型獻(xiàn)血者配血，主次側(cè)均不相合。

2 試劑與儀器 Ortho AutoVue Innova自動配血儀、微柱孵育器（OBHB-32型）、微柱凝膠卡離心機（01-BV-8260型）由奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易公司提供、低速離心機（JW-1012型）由嘉文儀器裝備有限公司提供;電熱恒溫震蕩水槽（DKZ-2）由上海一恒科技有限公司提供。

ABO正反定型及RhD血型定型試劑卡（批號ABR203H）、抗人球蛋白（抗-IgG，C3b/C3d）檢測卡（微柱凝集法）（批號AHC162F）、人ABO血型反定型用3%紅細(xì)胞試劑盒（微柱凝集法）（批號A382Z）由奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易公司提供；抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒（批號20207038）由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供；紅細(xì)胞血型抗體鑒定細(xì)胞譜細(xì)胞（批號732019）、抗-Tja血清由廣州市血液中心提供。

3 實驗方法

3.1 血型鑒定：患者ABO、RhD血型鑒定采用血型血清學(xué)方法，參照輸血技術(shù)操作規(guī)程[3]進(jìn)行。

3.2 直抗試驗：患者紅細(xì)胞與抗人球蛋白（抗-IgG，C3b/C3d）檢測卡反應(yīng)，具體方法參照輸血技術(shù)操作規(guī)程[3]進(jìn)行。

3.3 抗體篩查試驗：患者血清與抗體篩選紅細(xì)胞反應(yīng)，判斷是否存在不規(guī)則抗體，參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第4版[4]進(jìn)行。

3.4 吸收放散實驗：使用ZZAP試劑處理自身DAT陽性紅細(xì)胞，用處理后的紅細(xì)胞做血漿的自身抗體吸收試驗，具體方法參照全國臨床檢驗操作過程第4版進(jìn)行[4]，去除血漿中的自身抗體。

3.5 抗體鑒定：患者血清與抗體鑒定譜細(xì)胞反應(yīng)，并比較血清56 ℃滅活前后和2-Me處理前后的結(jié)果，判斷血清中抗體的特異性。

結(jié) 果

1 血型鑒定試驗 患者ABO、RhD血型為O型RhD陽性，與A、B和O細(xì)胞鹽水立即離心均強凝集，置37 ℃ 溫浴10 min離心觀察均發(fā)生全部溶血，ABO、RhD血型結(jié)果見表1。

表1 患者ABO、RhD血型鑒定結(jié)果

2 自身抗體、DAT和不規(guī)則抗體篩查試驗 患者DAT結(jié)果為陽性；患者EDTA抗凝劑血漿、原血清和37 ℃溫浴10 min血清分別與抗體篩選紅細(xì)胞反應(yīng)，自身抗體對照均陽性，結(jié)果見表2。

表2 不同樣本與抗體篩選紅細(xì)胞凝集反應(yīng)結(jié)果

3 吸收試驗 通過吸收試驗，吸收血漿中的自身抗體后，自身抗體檢測為陰性，不規(guī)則抗體篩查試驗陽性。

4 抗體鑒定試驗 患者血清與1-11號抗體鑒定譜細(xì)胞反應(yīng)及自身細(xì)胞反應(yīng)，比較血清56 ℃滅活前后和2-Me處理前后的結(jié)果，判斷血清中抗體的特異性，結(jié)果見表3。

表3 血清與抗體鑒定譜細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果

5 P血型鑒定 患者紅細(xì)胞與抗-Tja血清呈陰性反應(yīng)，O型對照細(xì)胞與抗-Tja血清呈陽性反應(yīng)，說明患者血型為血清中含抗-Tja的P表型。

6 交叉配血結(jié)果 選擇科室所有庫存O型血液與該患者進(jìn)行交叉配血，未能找到主次側(cè)相合的血液。

討 論

臨床上交叉配血不合的原因眾多，在進(jìn)行血液篩查的每個環(huán)節(jié)都可能導(dǎo)致配血不合。在輸血前的血液檢測中，不規(guī)則抗體篩選陽性是導(dǎo)致不合的常見現(xiàn)象[5]。對于不規(guī)則抗體篩查陽性的患者，輸血前最好能進(jìn)行抗體鑒定，但是國內(nèi)大多醫(yī)院未能開展抗體鑒定，配血常常由當(dāng)?shù)刂行难編兔ν瓿蒣6]。

P血型系統(tǒng)是Landsteiner和Levine在用人紅細(xì)胞注射家兔來觀察多態(tài)性時發(fā)現(xiàn)的又一血型系統(tǒng)，是第3個被發(fā)現(xiàn)的人類紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，包括P、PK、P1三種抗原[7]。極少數(shù)人的紅細(xì)胞上缺乏P1、P和PK抗原，則稱為P表型，這是一種十分罕見的表型[2]。P表型個體的血清中天然存在抗-PP1PK，也稱為抗-Tja，該抗體具有一定的臨床意義，可凝集除P表型之外的所有表型紅細(xì)胞，并能結(jié)合補體造成溶血，能引起嚴(yán)重的輸血反應(yīng)[8]。P血型抗原特異性決定簇是多糖，其生物合成分為紅細(xì)胞糖苷酯(產(chǎn)生PK、P抗原) 和類紅細(xì)胞糖苷酯（產(chǎn)生P1抗原) 兩條途徑。在P基因作用下，將N-乙酰-D半乳糖加到三己糖神經(jīng)酰胺上，將PK轉(zhuǎn)變?yōu)镻。在歐洲每百萬人群中有5.8例，而在中國香港人篩選了100萬人群才發(fā)現(xiàn)1例。這種P表現(xiàn)型的特征是在其血清內(nèi)發(fā)現(xiàn)有強溶血性IgM抗體，具有抗-P1+P+PK特異性，這種抗-Tja既可以是IgM型的（鹽水介質(zhì)中發(fā)生溶血），也可以是IgG型的（在去除補體作用后抗人球蛋白介質(zhì)中出現(xiàn)凝集）[9]。

在實施疑難配血操作前要經(jīng)過鑒定ABO血型、不規(guī)則抗體篩查等一系列操作，然后再進(jìn)行交叉配血，繼而有效保證安全輸血[10]。自身抗體合并同種抗體病例，常常造成臨床輸血過程中抗體篩查陽性及交叉配血不相合[11]。我科采用吸收試驗去除自身抗體，排除自身抗體對抗體鑒定的干擾后，進(jìn)一步進(jìn)行抗體鑒定?；颊邽镺型，37 ℃溫浴后反定型出現(xiàn)溶血反應(yīng)，抗體鑒定格局顯示其除與P表型紅細(xì)胞不反應(yīng)外，與所有譜細(xì)胞反應(yīng)，表明含有具高頻抗原的抗體，與P表型不反應(yīng)可判定其是該血型集合中的抗體?；颊哐?6℃滅活前與抗體鑒定譜細(xì)胞有凝集反應(yīng)，37 ℃水浴后出現(xiàn)溶血反應(yīng)，而滅活補體后不出現(xiàn)溶血反應(yīng)，證明血清中的抗體有補體活性。此外，該血清經(jīng)2-Me處理后IAT呈陽性，顯示具有IgG性質(zhì)抗體，表明該抗體是IgM和IgG混合型。這些均符合抗-PP1PK的抗體特性，而患者紅細(xì)胞與抗-PP1PK血清均無反應(yīng)。同時因其血清中能檢出抗-PP1PK抗體，證明患者為P表型[12]?；颊哐逯写嬖诳?Tja合并自身抗體，交叉配血試驗受抗-Tja合并自身抗體影響，與多名供血者進(jìn)行交叉配血均不相合，未能找到PP1PK抗原陰性的同型懸浮紅細(xì)胞。根據(jù)輸血技術(shù)規(guī)范規(guī)定，對于稀有血型患者，應(yīng)采用自身輸血、同型輸血或配合型輸血。2011年，中國稀有血型網(wǎng)站開通（http：//www.chinarareblood.cn/）[13]，通過信息共享，為高頻抗原抗體患者解決輸血難題已可進(jìn)行跨區(qū)域乃至國際合作[14]，為臨床稀有血型患者的輸血提供更有效的安全保障。

面對譜細(xì)胞全陽性的格局，需要運用多樣的血清學(xué)方法，對照高頻抗原抗體的特點，推測可能的抗體類別。因?qū)嶒炇覘l件限制，未能運用分子生物學(xué)技術(shù)對其進(jìn)行基因分型鑒定和測序。目前的研究認(rèn)為抗-Tja可以導(dǎo)致妊娠早期女性的習(xí)慣性流產(chǎn)[15]，可追蹤調(diào)查該患者家族史，進(jìn)一步研究其抗-Tja基因的遺傳特點。

（特別鳴謝廣州血液中心血型參比室老師對本次試驗的支持與幫助!）

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突