荔枝草中一個(gè)新的倍半萜

陳小英 劉章彬 蔣小華 霍華珍 李典鵬 于洋

摘 要：? 為了研究荔枝草全草中的倍半萜類化學(xué)成分，該文運(yùn)用大孔吸附樹脂D101、MCI、硅膠和反相HPLC等色譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行分離純化，根據(jù)HR-ESI-MS、NMR波譜數(shù)據(jù)鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明：從荔枝草全草95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位中分離得到3個(gè)桉葉烷型倍半萜類化合物，分別鑒定為8-ethoxy-eudebeiolide B （1）、salplebeone D （2）、salplebeone A （3）。其中，化合物1為新化合物。

關(guān)鍵詞： 荔枝草， 倍半萜， 8-ethoxy-eudebeiolide B， salplebeone D， salplebeone A

中圖分類號(hào)：? Q946.91

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：? A

文章編號(hào)：? 1000-3142（2021）11-1850-05

A new sesquiterpenoid from Salvia plebeia

CHEN Xiaoying1，2， LIU Zhangbin2， JIANG Xiaohua2， HUO Huazhen2， LI Dianpeng2， YU Yang2*

（ 1. College of Pharmacy， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning 530200， China; 2. Guangxi Key Laboratory of Functional Phytochemicals Research and Utilization， Guangxi Institute of Botany， Guangxi Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences， Guilin 541006， Guangxi， China ）

Abstract：? Three eudesmane-type sesquiterpenoids were isolated from the ethyl acetate layer of 95% ethanol extract of the whole plants of Salvia plebeia by various chromatographic methods， including macroporous resin D101， MCI， silica gel， and reversed-phase HPLC. Their structures were elucidated as 8-ethoxy-eudebeiolide B （1）， salplebeone D （2）， and salplebeone A （3） by using HR-ESI-MS and NMR data， in which Compound 1 is a new compound.

Key words： Salvia plebeia， sesquiterpenoids， 8-ethoxy-eudebeiolide B， salplebeone D， salplebeone A

荔枝草為唇形科鼠尾草屬植物荔枝草（Salvia plebeia）的全草，別名癩子草、癩蛤蟆草等，在我國(guó)廣泛分布于除新疆、甘肅、青海、西藏外的其他?。▍^(qū)）。全草入藥，在民間用于治療流感、咽喉腫痛、吐血、哮喘、尿道炎等癥（中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編委會(huì)，1977）。藥理研究表明荔枝草提取物具有多種生物活性，包括抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒和止咳祛痰平喘等作用（馬瑜紅等，2008;張紅霞，2010;楊澤華等，2015;郭秋言等，2018;姜敏等，2019）。化學(xué)成分研究主要集中在黃酮、苯丙素、揮發(fā)油、萜類化合物（劉慧清等，2013;Jin et al.， 2015;王繼鋒等，2018），尤其是近年來研究人員從荔枝草中分離得到一些具有抗腫瘤和抗炎活性的倍半萜類化合物（Dai et al.， 2014;Jang et al.， 2016;Zhang et al.， 2017;Ma et al.， 2017，2018;Zou et al.， 2018），使荔枝草中倍半萜類化合物的研究日益受到重視。為更深入研究荔枝草化學(xué)成分，闡明其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究從荔枝草95%乙醇提取物中分離得到3個(gè)桉葉烷型倍半萜類化合物，分別鑒定為8-ethoxy-eudebeiolide B （1）、salplebeone D （2）、salplebeone A （3）。其中，化合物1為新化合物。

1 材料與方法

1.1 材料

荔枝草于2017年12月至2018年2月采摘于河南省，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)中國(guó)科學(xué)院廣西植物研究所唐輝研究員鑒定為唇形科鼠尾草屬荔枝草（Salvia plebeia）。標(biāo)本（編號(hào)20180625-1）保存于廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 儀器

全自動(dòng)數(shù)字旋光儀Autopol IV-T（美國(guó)魯?shù)婪蚬荆?紫外可見分光光度計(jì)UH 5300（日立高新技術(shù)公司）;傅里葉變換紅外光譜儀Nicolet-6700（美國(guó)Thermo公司）;Avance 500 MHz核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司）;LC-MS-IT-TOF液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本Shimadzu公司）;半制備液相色譜儀（北京賽譜銳思公司）;YMC-Pack ODS-A制備HPLC色譜柱（250 mm × 10 mm， S-5 μm， 日本YMC公司）;D101大孔吸附樹脂（天津市海光化工有限公司）;MCI gel CHP20P（日本三菱化學(xué)控股株式會(huì)社）;薄層色譜硅膠GF254及柱層析硅膠（青島海洋化工有限公司）;高效液相半制備分離所用試劑為色譜純，其他試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純凈水。

1.3 提取和分離

將干燥的荔枝草（全草）30 kg粉碎后，室溫下用95%乙醇浸泡提取3次，每次7 d，提取液過濾，減壓濃縮得到浸膏2 090 g，將浸膏分散于溫水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，減壓濃縮得到浸膏909 g。萃取浸膏經(jīng)大孔吸附樹脂柱色譜分離，以純水，30%、50%、80%、95%乙醇溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，得到5個(gè)相應(yīng)部分（A-E）。D（359.4 g）部分經(jīng)MCI柱色譜分離，以水-甲醇（100∶0-0∶100）進(jìn)行梯度洗脫，得到6個(gè)部分D1-D6。D4（11.7 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，以石油醚-丙酮（100∶0-0∶100）梯度洗脫，利用TLC檢測(cè)合并得到12個(gè)部分（D4-1～D4-12）。D4-4（1.0 g）經(jīng)反相半制備HPLC（40% CH3CN）分離純化得到化合物1（1 mg）。D4-6（2.7 g）經(jīng)反相半制備HPLC（25% CH3CN）分離純化得到化合物2（14 mg）。D4-7（3.0 g）經(jīng)反相半制備HPLC（30% CH3CN）分離純化得到化合物3（11 mg）。

2 結(jié)果與分析

從荔枝草95%乙醇提取物中分離得到3個(gè)桉葉烷型倍半萜類化合物，其中，化合物1為新化合物（圖1），結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果如下。

表性的甲基氫信號(hào)δH 1.85 （3H， d， J=1.0 Hz）、1.38 （3H， s）、1.21 （3H， d， J=6.8 Hz）。DEPTQ譜顯示其含有17個(gè)碳信號(hào)，包括4個(gè)甲基，3個(gè)亞甲基，4個(gè)次甲基（包括2個(gè)烯碳信號(hào)），6個(gè)季碳（包括1個(gè)酮羰基、1個(gè)酯羰基、2個(gè)烯碳信號(hào)）。其中，2個(gè)羰基碳信號(hào)與4個(gè)烯碳信號(hào)組成了1個(gè)α，β-不飽和酮（δC 160.9， 126.7， 202.8）與1個(gè)α，β-不飽和酮-γ-內(nèi)酯（δC 160.0， 126.1， 173.4）結(jié)構(gòu)單元，結(jié)合以上數(shù)據(jù)可推測(cè)該化合物為桉葉烷型倍半萜內(nèi)酯（Jang et al.， 2016）?；衔?的波譜數(shù)據(jù)與eudebeiolide B（Jang et al.， 2016）相似，主要差異僅是在化合物1的NMR譜中多1個(gè)乙氧基的共振信號(hào)[δH 3.41， m; 3.33， m; 1.19 （3H， d， J=7.0 Hz）; δC 59.9和15.8]，表明化合物1中的乙氧基替換了eudebeiolide B中的羥基。此推斷得到2D-NMR圖譜解析的進(jìn)一步驗(yàn)證，在1H-1H COSY譜中，H-2′/H-1′a和H-2′/H-1′b相關(guān)（圖2：A）表明乙氧基的存在。在HMBC譜中，H-1′a和H-1′b都與C-8 （δC 107.6）相關(guān)（圖2：A）表明乙氧基連接在C-8上。在NOESY譜中，H-4/H-14、H-6α/H-14、H-6α/H-1′b、H-9α/H-14相關(guān)（圖2：B）則提示H-4、H-14、8-OCH2CH3處于α方向，而H-5/H-6β、H-5/H-15、H-6β/H-15相關(guān)（圖2：B）則提示H-5、H-15處于β方向。因此，化合物1的結(jié)構(gòu)確定為8-ethoxy-eudebeiolide B，是一個(gè)新化合物。化合物1的1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。

化合物2 淡黃色油狀物，HR-ESI-MS m/z： 261.109 6 [M + H]+（計(jì)算相對(duì)分子質(zhì)量C15H17O4，261.112 1）。1H-NMR （CDCl3， 500 MHz） δ： 6.10 （1H， s， H-9）， 6.09 （1H， m， H-3）， 4.02 （1H， s， H-1）， 3.07 （1H， dd， J=16.8， 4.1 Hz， H-6β）， 2.95 （1H， m， H-5）， 2.55 （1H， m， H-6α）， 2.06 （3H， t， J=1.3 Hz， H-15）， 1.92 （3H， d， J=1.5 Hz， H-13）， 0.91 （3H， s， H-14）。13C-NMR （CDCl3， 125 MHz） δ： 79.4 （C-1）， 197.9 （C-2）， 125.5 （C-3）， 161.7 （C-4）， 45.9 （C-5）， 22.2 （C-6）， 145.8 （C-7）， 148.8 （C-8）， 113.8 （C-9）， 46.0 （C-10）， 122.4 （C-11）， 170.9 （C-12）， 8.9 （C-13）， 13.7 （C-14）， 22.1 （C-15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Ma et al.， 2018）基本一致，故鑒定為salplebeone D。

化合物3 淡黃色油狀物，HR-ESI-MS m/z： 303.115 9 [M + H]+（計(jì)算相對(duì)分子質(zhì)量C17H19O5，303.122 7）。1H-NMR （CDCl3， 500 MHz） δ： 6.05 （1H， m， H-3）， 5.72 （1H， s， H-9）， 5.26 （1H， s， H-1）， 3.08 （1H， dd， J=17.8， 4.2 Hz， H-6β）， 3.06 （1H， m， H-5）， 2.56 （1H， m， H-6α）， 2.24 （3H， s， H-2′）， 2.04 （3H， t， J=1.3 Hz， H-15）， 1.93 （3H， d， J=1.7 Hz， H-13）， 1.07 （3H， s， H-14）。13C-NMR （CDCl3， 125 MHz） δ：79.9 （C-1）， 191.4 （C-2）， 127.2 （C-3）， 159.2 （C-4）， 46.2 （C-5）， 22.1 （C-6）， 145.4 （C-7）， 149.3 （C-8）， 112.0 （C-9）， 43.7 （C-10）， 122.9 （C-11）， 170.6 （C-12）， 8.9 （C-13）， 15.2 （C-14）， 21.9 （C-15）， 170.3 （C-1′）， 20.8 （C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Ma et al.， 2017）基本一致，故鑒定為salplebeone A。

3 討論與結(jié)論

荔枝草在我國(guó)分布廣泛，資源豐富，在產(chǎn)品開發(fā)方面具有較好的發(fā)展前景（朱吉人等，2017）。該植物的藥理研究主要集中在其提取物方面（王繼鋒等，2018），對(duì)單體化合物的藥理研究較少，隨著對(duì)荔枝草化學(xué)成分和藥理活性的深入研究，越來越多的倍半萜類化合物及其藥理活性被發(fā)現(xiàn)。本研究通過對(duì)荔枝草95%乙醇提取物中的倍半萜類化學(xué)成分進(jìn)行深入研究，從中獲得3個(gè)桉葉烷型倍半萜類化合物。其中，化合物1為新化合物。這3個(gè)化合物均為C-8、C-12位成環(huán)的桉葉烷型倍半萜內(nèi)酯。

已有研究表明桉葉烷型倍半萜類化合物具有抗腫瘤（Ma et al.， 2017，2018）、抗炎（Dai et al.， 2014;Jang et al.， 2017;Zou et al.， 2018）等生物活性。其中，化合物2對(duì)白血病細(xì)胞株pfeiffer增殖有抑制作用（Ma et al.， 2018）。在10 μg·mL-1濃度下，化合物3對(duì)白血病細(xì)胞株K562、U937、oci-ly1增殖抑制率小于50%（Ma et al.， 2017）。通過對(duì)荔枝草中倍半萜類化合物的深入研究，豐富了該植物的化學(xué)成分，為進(jìn)一步開發(fā)利用該植物提供了科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯 何永艷）