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    甘草甜素調(diào)節(jié)U14宮頸癌小鼠免疫功能及誘導凋亡的作用

    2021-12-16 02:21:50娜,張
    食品工業(yè)科技 2021年23期
    關鍵詞:環(huán)磷酰胺脾臟甘草

    王 娜,張 霞

    (河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院婦科, 河北石家莊 050000)

    宮頸癌是發(fā)生于子宮的惡性腫瘤,高居女性癌癥死亡率的第2位,且全球每年新増病例約50萬,嚴重威脅女性健康[1]。化學治療是宮頸癌治療的重要方法之一,而現(xiàn)有的環(huán)磷酰胺、順鉑等化療藥物,長期使用會產(chǎn)生耐藥性,毒副作用嚴重,且治療效果也難以讓人滿意[2]。因此,新型宮頸癌治療藥物的開發(fā)迫在眉睫[3]。天然活性物質(zhì)由于療效確切及較低的毒副作用,在宮頸癌治療領域受到了研究者越來越多的關注。淫羊藿苷可以通過降低Toll樣受體4/髓樣分化因子 88/核因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)通路和 Wnt/β-連環(huán)蛋白(β-catenin)通路影響宮頸癌炎癥、凋亡、侵襲和腫瘤免疫,進而發(fā)揮治療宮頸癌作用[4]。藏紅花素通過激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信號通路誘導子宮頸癌SiHa細胞自噬死亡,抑制細胞侵襲[5]。辣木生物堿具有抑制Hela細胞增殖和誘導細胞凋亡的作用,其分子機制與阻斷Stat3信號通路的活化有關[6]。去甲氧基姜黃素也可以明顯降低HeLa細胞異種移植模型小鼠的腫瘤重量和體積,表明其可以抑制移植瘤的生長[7]。

    甘草甜素(Glycyrrhizin)為甘草的主要功效成分,作為甜味劑廣泛用于各類食品中,具有抗氧化、抗炎等作用[8]。近年來,甘草甜素的抗腫瘤作用也逐漸引起了人們的關注,其相關研究主要集中在口腔癌[9]、前列腺癌[10]、肝癌[11]等。研究發(fā)現(xiàn)[12],在宮頸癌CCa細胞中,甘草甜素可以介導Notch通路的下調(diào),誘導致宮頸癌細胞凋亡和細胞周期進程的中斷。在宮頸癌HeLa細胞中,甘草甜素能夠誘導活性氧(ROS)依賴的細胞凋亡,并使細胞周期阻滯于G0/G1期[13]。目前,甘草甜素抗宮頸癌的研究主要集中在體外作用方面,而體內(nèi)抗宮頸癌研究報道較少;同時,既往的研究已經(jīng)證實甘草甜素具有良好的調(diào)節(jié)免疫及誘導凋亡作用[14?15]。因此,本研究通過建立U14宮頸癌小鼠模型,探討甘草甜素是否具有抑制U14宮頸癌小鼠腫瘤生長的作用,同時闡明該作用與調(diào)節(jié)免疫功能、誘導凋亡的相關性,為今后應用于臨床提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    小鼠宮頸癌U14細胞系 購于上海賽默生物科技公司;雌性昆明種小鼠 60只,清潔級,體質(zhì)量20~22 g,購于北京維通利華公司[SCXK(京)2016-0011],在溫度為22~24 ℃、相對濕度為50%~60%條件下常規(guī)條件飼養(yǎng),自由飲水和飲食,12 h光照/12 h黑暗交替;甘草甜素(含量>95%) 西安朗德生物公司,批號20200516;環(huán)磷酰胺(含量>98%) 上海邁瑞爾化學公司,批號180115;白細胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及干擾素-γ(IFN-γ)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測試劑盒 泉州睿信生物公司;TUNEL檢測試劑盒 美國羅氏公司;SYBR Green實時熒光定量PCR檢測試劑盒 美國賽默飛世爾公司;二奎啉甲酸(BCA)試劑盒 北京天恩澤基因科技有限公司;PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)多克隆抗體 美國Abcam公司。

    RD-20Ⅲ型高速冷凍離心機 日本TomySeiko公司;HEPA Class CO2培養(yǎng)箱 美國Thermo Fisher公司;VICTOR-1429酶標儀 美國PerkinElmer公司;UV-2100型分光光度計 上海UNICO儀器有限公司;FM-500倒置數(shù)碼熒光顯微鏡 上海普丹儀器公司;Quan Studio 3型定量PCR儀 美國賽默飛世爾公司;Mini-Protean小垂直板電泳儀 美國Biored公司。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 造模、分組及給藥 常規(guī)培養(yǎng)U14細胞,生長至對數(shù)期后接種于小鼠腹腔,1周處死小鼠并收集腹水。離心,細胞沉淀用生理鹽水稀釋至2×107個/mL。取0.2 mL細胞懸液接種于右側(cè)腋窩處,7 d內(nèi)異種移植瘤出現(xiàn)表示U14宮頸癌小鼠模型建立成功[16]。將成模小鼠隨機分為模型組、甘草甜素低、中、高劑量組(25、50、100 mg/kg)及環(huán)磷酰胺組(25 mg/kg),每組10只,其中甘草甜素的給藥劑量參考了文獻[17]并結(jié)合預實驗結(jié)果而設定;未建模的10只小鼠設為正常組。于分組后次日開始灌胃給藥,1次/d,共21 d;正常組小鼠灌胃等體積的生理鹽水。在小鼠存活狀態(tài)下,用游標卡尺分別記錄各組小鼠(n=10)在給藥第7、14和21 d的右側(cè)腋窩處瘤體積(最大直徑)。最后一次給藥24 h后,通過摘眼球法分離血清,頸椎脫位處死所有動物,立即收集瘤組織、胸腺及脾臟樣本。

    1.2.2 抑瘤率、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)計算 取步驟“1.2.1”中分離的小鼠瘤組織、胸腺及脾臟樣本,精密稱重,分別計算抑瘤率、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)[16]。抑瘤率、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)的計算公式為:抑瘤率(%)=模型組瘤質(zhì)量-藥物處理組瘤質(zhì)量/模型組瘤質(zhì)量×100;胸腺指數(shù)(mg/g)=胸腺質(zhì)量/體質(zhì)量;脾臟指數(shù)(mg/g)=脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量。

    1.2.3 血清 IL-2、IFN-γ和 TNF-α含量檢測 取步驟“1.2.1”中分離的血清,使用ELISA檢測試劑盒檢測血清IL-2、IFN-γ和TNF-α含量,具體操作按說明書中的方法進行。

    1.2.4 腫瘤組織細胞凋亡指數(shù)檢測 參考文獻[18],用4%多聚甲醛固定腫瘤組織,經(jīng)石蠟包埋后,進行4 μm厚度切片。按照試劑盒說明書中的操作指南,通過TUNEL法檢測細胞凋亡指數(shù)。凋亡指數(shù)的計算公式為:凋亡指數(shù)(%)=凋亡細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100。

    1.2.5 腫瘤組織Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表達檢測 檢測方法參考文獻[19],采用Trizol法提取瘤組織RNA,定量后取2 μg RNA并將其反轉(zhuǎn)錄為cDNA。實時定量PCR反應體系為20 μL,反應條件為:95 ℃、10 s, 95 ℃、5 s, 60 ℃、20 s,共40個循環(huán)。各基因引物序列由上海生工合成。Caspase-3 引物序列:5’-GGA ACC ATC ATA CAT GGA AGC G-3’,5’-TCA CCA TGG CTC AGA AGC AC-3’;Bax引物序列:5’-AAC ATG GAG CTG CAG AGG AT-3’,5’-CAG TTG AAG TTG CCG TCA GA-3’;Bcl-2 引物序列:5’-GAG GAT TGT GGC CTT CTT TG-3’,5’-ACA GTT CCA CAA AGG CAT CC-3’;甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因(GAPDH)引物序列:5’-ATG GGG AAG GTG AAG GTC G-3’,5 ’-GGG GTC ATT GAT GGC AAC AAT A-3’。反應結(jié)束后,采用2?△△CT法計算目的基因相對表達量。

    1.2.6 腫瘤組織p-PI3K及p-AKT蛋白表達檢測檢測方法參考文獻[20],腫瘤組織經(jīng)研磨及冰上裂解后,提取總蛋白,用BCA試劑盒進行定量。各組取等量蛋白,煮沸10 min,進行10% SDS-PAGE電泳,當溴酚藍前沿至分離膠底部時,結(jié)束電泳。轉(zhuǎn)膜,用脫脂牛奶室溫封閉 2 h;加入抗 PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT多克隆抗體,稀釋倍數(shù)均為1:1000;4 ℃下孵育過夜。洗膜后,加入相應的二抗(1:2000),室溫繼續(xù)封閉2 h,電化學發(fā)光法顯色。顯影、拍照,通過Image J分析灰度值,并計算p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    采用SPSS 20.0軟件進行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學分析,所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差“±S”表示,采用單因素方差分析及t檢驗,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠瘤體積(最大直徑)、瘤質(zhì)量及抑瘤率的影響

    在給藥初期,各組小鼠進食等行為活動正常,精神狀態(tài)良好。在給藥后期,模型組小鼠右上肢活動受限,皮毛光澤度變差,反應遲鈍,精神狀態(tài)萎靡;甘草甜素各劑量組小鼠行為活動、精神狀態(tài)等情況均好于模型組;環(huán)磷酰胺組小鼠身體消瘦,飲水、飲食活動減少;正常組小鼠各方面均無異常。

    分別記錄給藥第7、14和21 d時的瘤體積(最大直徑),發(fā)現(xiàn)甘草甜素低、中劑量組在第14、21 d及甘草甜素高劑量組小鼠在第7、14、21 d時的瘤體積(最大直徑)均小于模型組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01);同時,甘草甜素各劑量組小鼠的瘤質(zhì)量與模型組比較,均明顯降低(P<0.05或P<0.01),其抑瘤率分別為15.68%、25.41%和38.38%。與模型組比較,環(huán)磷酰胺組小鼠在第7、14、21 d時的瘤體積(最大直徑)、瘤質(zhì)量均明顯降低(P<0.05或P<0.01),其抑瘤率為50.81%。結(jié)果見表1。以上結(jié)果表明甘草甜素具有抑制U14宮頸癌小鼠腫瘤生長的作用,雖然其抑瘤效果弱于陽性藥物環(huán)磷酰胺,但由于較低的毒副作用,仍具有潛在的應用前景。

    表1 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠瘤體積(最大直徑)、瘤質(zhì)量及抑瘤率的影響(±S,n=10)Table 1 Influence of glycyrrhiza on tumor volume (maximum diameter), tumor weight and tumor inhibition rate in U14 cervical cancer mice (±S, n=10)

    表1 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠瘤體積(最大直徑)、瘤質(zhì)量及抑瘤率的影響(±S,n=10)Table 1 Influence of glycyrrhiza on tumor volume (maximum diameter), tumor weight and tumor inhibition rate in U14 cervical cancer mice (±S, n=10)

    注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01;表4、表5同。

    組別 瘤體積(最大直徑)(mm) 瘤質(zhì)量(g) 抑瘤率(%)7 d 14 d 21 d正常組 — — — — —模型組 2.66±0.34 5.94±0.75 8.41±1.05 1.85±0.34 —甘草甜素低劑量組 2.47±0.43 5.23±0.70* 6.82±0.96* 1.56±0.21* 15.68甘草甜素中劑量組 2.31±0.39 5.02±0.54** 6.06±0.85** 1.38±0.23** 25.41甘草甜素高劑量組 2.06±0.28* 4.75±0.63** 5.39±0.63** 1.14±9.18** 38.38環(huán)磷酰胺組 1.98±0.24* 4.26±0.51** 4.48±0.72** 0.91±0.12** 50.81

    2.2 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響

    調(diào)節(jié)免疫功能是天然化合物治療癌癥的主要機制之一[21]。胸腺和脾臟均為機體內(nèi)重要的免疫器官,其指數(shù)可以作為機體免疫功能的重要參數(shù)。表2結(jié)果表明,與正常組比較,模型組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)降低(P<0.01);與模型組比較,甘草甜素低、中、高劑量組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)升高(P<0.05或P<0.01),而環(huán)磷酰胺由于具有一定的免疫抑制作用,該組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)降低(P<0.01)。在Lewis 肺癌小鼠模型中,消巖湯可以使模型小鼠的脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)升高,而環(huán)磷酰胺使脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)降低[22],與本研究的結(jié)論相符。以上結(jié)果提示,甘草甜素在一定程度上可以促進U14宮頸癌小鼠胸腺和脾臟的發(fā)育,提高免疫功能。

    表2 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響(±S,n=10)Table 2 Influence of glycyrrhiza on thymus index and spleen index in U14 cervical cancer mice (±S, n=10)

    表2 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響(±S,n=10)Table 2 Influence of glycyrrhiza on thymus index and spleen index in U14 cervical cancer mice (±S, n=10)

    注:與正常組比較,#P<0.05,##P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01;表3同。

    組別 胸腺指數(shù)(mg/10 g) 脾臟指數(shù)(mg/10 g)正常組 26.79±3.12 81.25±7.66模型組 15.17±2.43## 56.53±7.53##甘草甜素低劑量組 20.22±3.67** 64.82±8.51*甘草甜素中劑量組 23.74±2.72** 69.60±7.23**甘草甜素高劑量組 27.61±4.14** 72.48±8.65**環(huán)磷酰胺組 11.14±1.09** 38.79±4.02**

    表3 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠血清 IL-2、IFN-γ和TNF-α含量的影響(±S,n=10)Table 3 Influence of glycyrrhiza on serum IL-2, IFN-γ and TNF-α contents in U14 cervical cancer mice (±S, n=10)

    表3 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠血清 IL-2、IFN-γ和TNF-α含量的影響(±S,n=10)Table 3 Influence of glycyrrhiza on serum IL-2, IFN-γ and TNF-α contents in U14 cervical cancer mice (±S, n=10)

    組別 IL-2(ng/L) IFN-γ(ng/L) TNF-α(ng/L)正常組 6.15±0.79 2.58±0.32 130.41±16.33模型組 4.14±0.52## 2.08±0.34## 254.78±30.23##甘草甜素低劑量組 4.67±0.79* 2.52±0.35** 345.33±42.11**甘草甜素中劑量組 5.20±0.61** 2.71±0.46** 368.29±35.48**甘草甜素高劑量組 5.52±0.82** 3.13±0.26** 419.54±48.72**環(huán)磷酰胺組 4.78±0.57** 2.56±0.40** 386.61±37.35**

    2.3 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠血清IL-2、IFN-γ和TNF-α含量的影響

    IL-2、IFN-γ和TNF-α等細胞因子在機體的抗腫瘤免疫中具有重要作用,本實驗采用ELISA法檢測了各組小鼠血清IL-2、IFN-γ和TNF-α含量,結(jié)果如表3所示。與正常組比較,模型組小鼠血清IL-2、IFN-γ明顯降低,TNF-α含量明顯增高(P<0.01);與模型組比較,甘草甜素低、中、高劑量組及環(huán)磷酰胺組小鼠血清IL-2、IFN-γ和TNF-α含量均明顯增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。IL-2可以促進 T淋巴細胞的增殖,而IFN-γ具有強大的免疫調(diào)節(jié)作用和抗腫瘤、抗病毒作用[23]。TNF-α能夠激活NK細胞或CD8+T細胞等釋放IFN-γ,抑制腫瘤細胞的生長;TNF-α也可以通過促進腫瘤細胞增殖、血管再生、腫瘤細胞侵襲等作用加速腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,其抗腫瘤作用還存在爭議[24?25]。以上結(jié)果進一步表明,甘草甜素抑制U14宮頸癌小鼠腫瘤生長的作用與調(diào)節(jié)免疫功能有關。

    2.4 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織細胞凋亡指數(shù)的影響

    增殖與凋亡失衡會引起腫瘤,而誘導細胞凋亡是當前臨床常用抗腫瘤藥物的主要作用機理[26]。研究發(fā)現(xiàn)[27],甘草甜素能夠抑制人舌癌Cal-27細胞株的增殖,并促進其凋亡。本研究通過TUNEL染色法檢測甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織細胞凋亡指數(shù)的影響,結(jié)果如圖1所示。模型組、甘草甜素低、中、高劑量組及環(huán)磷酰胺組小鼠腫瘤細胞凋亡指數(shù)分別為(5.37%±0.85%)、(11.43%±1.54%)、(19.60%±2.12%)、(30.77%±4.48%)和(38.05%±5.19%),各給藥組與模型組比較,具有顯著性差異(P<0.01),提示甘草甜素具有誘導U14宮頸癌小鼠腫瘤組織細胞凋亡的作用。

    圖1 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織細胞凋亡指數(shù)的影響(400×)Fig.1 Influence of glycyrrhiza on tumor tissue apoptosis index in U14 cervical cancer mice (400×)

    2.5 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表達的影響

    Caspase家族由多種與細胞凋亡相關的蛋白酶構(gòu)成,在腫瘤細胞凋亡調(diào)控網(wǎng)絡中處于關鍵地位,而Caspase-3是最為核心的細胞凋亡執(zhí)行者;Bcl-2家族由Bax等促凋亡因子和Bcl-2等凋亡抑制因子構(gòu)成,廣泛參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[28]。高硯春等[29]發(fā)現(xiàn),甘草甜素具有抑制人乳腺癌細胞MDA-MB-231生長的作用,下調(diào)Bcl-2 mRNA表達、上調(diào)Caspase-3、BaxmRNA是其發(fā)揮抑制作用的主要機制。本研究采用實時定量PCR法檢測甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表達的影響,結(jié)果如表4所示。與模型組比較,甘草甜素低、中、高劑量組及環(huán)磷酰胺組小鼠腫瘤細胞Caspase-3及BaxmRNA表達增加(P<0.05或P<0.01),而Bcl-2 mRNA表達降低(P<0.05或P<0.01),進一步在分子水平證實甘草甜素具有誘導U14宮頸癌小鼠腫瘤組織細胞凋亡的作用。

    表4 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表達的影響(±S,n=10)Table 4 Influence of glycyrrhiza on tumor tissue Caspase-3,Bax and Bcl-2 mRNA levels in U14 cervical cancer mice (±S,n=10)

    表4 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表達的影響(±S,n=10)Table 4 Influence of glycyrrhiza on tumor tissue Caspase-3,Bax and Bcl-2 mRNA levels in U14 cervical cancer mice (±S,n=10)

    組別 Caspase-3 mRNA Bax mRNA Bcl-2 mRNA模型組 0.42±0.05 0.84±0.09 1.11±0.13甘草甜素低劑量組 0.61±0.08** 0.98±0.11* 0.95±0.08*甘草甜素中劑量組 0.63±0.06** 1.06±0.13** 0.81±0.12**甘草甜素高劑量組 0.77±0.07** 1.27±0.15** 0.83±0.11**環(huán)磷酰胺組 0.86±0.10** 1.40±0.14** 0.64±0.08**

    2.6 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織p-PI3K及p-AKT蛋白表達的影響

    調(diào)控腫瘤細胞的凋亡除了與相關基因聯(lián)系密切外,PI3K/AKT信號通路在惡性腫瘤細胞的凋亡進程中也扮演著重要角色[30]。AKT受PI3K的正反饋調(diào)控影響,是PI3K的下游蛋白,為蛋白激酶,其磷酸化水平越高,證明惡性腫瘤細胞的增殖能力及抗凋亡能力就越強[31]。本研究采用Western Blot法檢測了甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織p-PI3K及p-AKT蛋白表達的影響,結(jié)果如圖2及表5所示。與模型組比較,甘草甜素低、中、高劑量組及環(huán)磷酰胺組小鼠腫瘤組織p-PI3K及p-AKT蛋白表達水平降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),表明甘草甜素具有阻斷PI3K/AKT信號通路活化的作用。

    表5 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織p-PI3K及p-AKT蛋白表達的影響(± S,n=10)Table 5 Influence of glycyrrhiza on tumor tissue p-PI3K and p-AKT expressions in U14 cervical cancer mice (± S, n=10)

    表5 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織p-PI3K及p-AKT蛋白表達的影響(± S,n=10)Table 5 Influence of glycyrrhiza on tumor tissue p-PI3K and p-AKT expressions in U14 cervical cancer mice (± S, n=10)

    組別 p-PI3K/PI3K p-AKT/AKT模型組 1.24±0.23 1.65±0.24甘草甜素低劑量組 0.93±0.14** 1.46±0.21*甘草甜素中劑量組 0.51±0.08** 1.32±0.15**甘草甜素高劑量組 0.37±0.05** 0.89±0.10**環(huán)磷酰胺組 0.18±0.03** 0.34±0.04**

    圖2 甘草甜素對U14宮頸癌小鼠腫瘤組織p-PI3K及p-AKT蛋白表達的影響Fig.2 Influence of glycyrrhiza on tumor tissue p-PI3K and p-AKT expressions in U14 cervical cancer mice

    3 討論與結(jié)論

    多種藥物及食品中的有效成分均可以通過提高免疫力而發(fā)揮抗腫瘤作用。紅茶多酚能夠抑制H22荷瘤小鼠的腫瘤生長,其機制可能與提高抗氧化能力及增強機體的免疫調(diào)節(jié)活性有關[32]。黃酒多糖也能改善S180荷瘤小鼠的免疫功能,進而抑制腫瘤細胞增殖[33]。張夢欣等[34]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),甘草甜素也可以通過提高巨噬細胞百分比發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。本研究通過建立U14宮頸癌小鼠模型,灌胃給予不同劑量的甘草甜素后,發(fā)現(xiàn)甘草甜素可以升高胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),增加血清IL-2、IFN-γ和TNF-α含量,進一步證實甘草甜素的抑瘤作用同樣與改善免疫功能有關。

    誘導腫瘤細胞凋亡是天然活性物質(zhì)發(fā)揮抗腫瘤作用的重要途徑[35]。本研究發(fā)現(xiàn),甘草甜素各劑量組凋亡指數(shù)及Caspase-3、BaxmRNA表達均增加,Bcl-2 mRNA表達降低,表明甘草甜素具有誘導U14宮頸癌小鼠腫瘤組織細胞凋亡的作用。PI3K/AKT信號通路在腫瘤組織中異常激活,而阻斷PI3K/AKT信號通路的激活,可以加速腫瘤細胞發(fā)生凋亡,進而發(fā)揮抗腫瘤作用[36]。研究發(fā)現(xiàn),甘草甜素能夠通過抑制PI3K/AKT信號通路抑制骨關節(jié)炎的發(fā)展[37]。此外,甘草甜素促進人乳腺癌MCF-7細胞凋亡及細胞周期阻滯作用也與抑制PI3K/AKT信號通路有關[38]。本研究結(jié)構(gòu)同樣發(fā)現(xiàn),甘草甜素低、中、高劑量組小鼠腫瘤組織p-PI3K及p-AKT蛋白表達水平降低,進一步表明阻斷PI3K/AKT信號通路的活化進而誘導腫瘤細胞凋亡,是甘草甜素發(fā)揮抗腫瘤作用的潛在機制。

    綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)甘草甜素具有抑制U14宮頸癌小鼠腫瘤生長的作用,且證實該作用與改善免疫功能及誘導凋亡作用有關,其在宮頸癌治療領域有潛在的應用價值。

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