麻仁丸對(duì)便秘大鼠結(jié)腸NOS1 表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

趙兵，孔鵬飛，吳至久，唐學(xué)貴

（川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肛腸科，四川 南充 637000）

0 引言

慢傳輸性便秘(STC)是肛腸科的一種常見疾病，屬于功能性便秘，育齡婦女及老年人好發(fā)[1]。長(zhǎng)期便秘會(huì)引起或加重多種疾病的發(fā)生，如：心腦血管意外、結(jié)直腸疾病、肛門疾病等，嚴(yán)重危害人們的身心健康，為此，尋求安全有效的治療方法尤為重要。麻仁丸作為臨床上常用的通便藥物，在治療便秘的過程中取得較好的療效。我們?yōu)樘剿鞅忝氐陌l(fā)病機(jī)制及麻仁丸的通便機(jī)理，特設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究麻仁丸對(duì)便秘大鼠結(jié)腸NOS1 表達(dá)的影響，進(jìn)而探討便秘的發(fā)病及麻仁丸的通便作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

選取SD 大鼠36 只作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，雌雄各半。試驗(yàn)藥物包括復(fù)方地芬諾酯和麻仁丸，試劑包括大鼠NOS1 一抗免疫組化試劑和兔SP 檢測(cè)試劑盒，

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組

36 只SD 大鼠，隨機(jī)分為3 組：空白組、便秘模型組、麻仁丸治療組。

1.2.2 動(dòng)物造模及標(biāo)本采集

根據(jù)課題組前期造模方法建立大鼠慢傳輸型便秘模型，空白組大鼠正常喂食，不造模型，不做治療，模型組只造模型，不做藥物治療，麻仁丸組大鼠造模后按3.0 g/kg 用藥量配制成4mL 混懸液灌胃，3 天1 個(gè)療程，療程間間隔1 天，共2 個(gè)療程[2]。模型建立完成，集體處死大鼠，取結(jié)腸6～8mm，放入多聚甲醛固定。

1.2.3 免疫組化檢測(cè)

組織塊固定包埋切片，按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)，用高分辨率圖像分析儀Image-Proplus6.0 測(cè)定各視野的平均光密度（density mean, MD）值[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠結(jié)腸NOS1 免疫組化結(jié)果

陽性表達(dá)主要位于肌間神經(jīng)叢的神經(jīng)元細(xì)胞，呈棕紅色?？瞻捉M陽性表達(dá)分布均勻；與空白組相比，模型組陽性表達(dá)較空白組升高。與模型組相比，麻仁丸組陽性表達(dá)降低，麻仁丸組與空白組相比，陽性表達(dá)增高。見圖1-3。

圖1 空白組結(jié)腸 NOS1×400

2.2 各組大鼠近端結(jié)腸NOS1 表達(dá)平均光密度值（MD）

空白組分別和便秘組、麻仁丸組相比，其MD 值低于其他兩組（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；麻仁丸組和便秘模型組相比，其MD 值低于便秘模型組（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 各組大鼠結(jié)腸免疫組化NOS1 表達(dá)平均光密度值（MD）比較（±s）

表1 各組大鼠結(jié)腸免疫組化NOS1 表達(dá)平均光密度值（MD）比較（±s）

注：*與空白組比較，P<0.05；# 與便秘模型組比較，P<0.05。

分組 例數(shù) NOS1空白對(duì)照組 12 0.095±0.013便秘模型組 12 0.346±0.021*麻仁丸治療組 12 0.205±0.015#

圖2 便秘組結(jié)腸 NOS1×400

圖3 麻仁丸組結(jié)腸NOS1×400

3 討論

STC 是一種功能性便秘，主要治療藥物包括瀉劑和促進(jìn)腸道蠕動(dòng)藥。STC 屬于中醫(yī)便秘的范疇，病因包括飲食不節(jié)、情志不舒、勞倦過度等，其病位在大腸，與肺,脾,肝,腎相關(guān)[4]。STC 是慢性便秘最常見的一種類型，當(dāng)藥物治療效果不佳時(shí)，外科手術(shù)也是STC 治療的重要方法[5]。相比于西醫(yī)治療，中藥治療便秘具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，臨床療效良好。麻仁丸作為一種常用潤(rùn)下劑，有潤(rùn)腸通便之效，適用于治療便秘。方中麻仁為君藥，起潤(rùn)腸通便之功效；大黃、杏仁、芍藥共同起到通便、降氣、養(yǎng)陰之功，為臣藥；枳實(shí)、厚樸起行氣破結(jié)的功效；蜂蜜則潤(rùn)燥滑腸。楊格等研究得出，麻仁丸能使老年下肢骨折患者發(fā)生便秘的幾率降低，值得臨床推廣[6]。付峰研究認(rèn)為中藥麻仁丸能顯著減輕便秘型腸易激綜合征患兒的腹部癥狀和便秘程度[7]。

NO 是生物體中重要的信使分子，參與細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)。人們常常通過對(duì)一氧化氮合酶（NOS）的研究來反映NO的變化情況。STC 的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，NO 是否參與便秘的發(fā)病是近年來的研究熱點(diǎn)。趙仕彭等[8]通過建立便秘模型，經(jīng)免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)便秘大鼠結(jié)腸NOS 含量升高。譚麗等[9]通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)NOS 在STC 大鼠結(jié)腸表達(dá)增高，可能在大鼠便秘發(fā)病中起重要作用。C Cortesini 等[10]研究認(rèn)為一氧化氮合酶陽性神經(jīng)元細(xì)胞表達(dá)升高，能抑制腸道收縮，導(dǎo)致便秘的發(fā)病。R Tomita 等[11]研究認(rèn)為STC 患者結(jié)腸一氧化氮表達(dá)增高，提示一氧化氮可能參與便秘的發(fā)病。盧建珍等研究認(rèn)為宣肺通便方治療功能性便秘療效顯著，其機(jī)制可能是借助肺-腸軸，通過下調(diào)NO 水平達(dá)到治療便秘的作用[12]。闕任燁等[13]研究得出便秘患者與健康人相比，血清NO、TNOS、iNOS 含量顯著增高，經(jīng)治療后明顯降低。

通過本研究發(fā)現(xiàn)：NOS1 陽性表達(dá)主要位于肌間神經(jīng)叢的神經(jīng)元細(xì)胞，便秘組表達(dá)明顯增高，而經(jīng)麻仁丸治療后，便秘組大鼠結(jié)腸NOS1 表達(dá)明顯降低。這與前述相關(guān)研究結(jié)果相一致。由此，我們推斷，NOS1 在結(jié)腸的表達(dá)增高，可能影響腸神經(jīng)傳導(dǎo)而導(dǎo)致便秘的發(fā)病，而麻仁丸的通便作用，可能與降低NOS1 在大鼠結(jié)腸的表達(dá)有關(guān)，通過修復(fù)腸神經(jīng)傳導(dǎo)功能達(dá)到治療便秘的作用。