SLC7A11蛋白在肝內(nèi)膽管細胞癌組織中的表達及臨床意義

王建國 陶耀業(yè) 陳成 徐驍*

肝內(nèi)膽管細胞癌的發(fā)病率逐年上升，侵襲性與耐藥性均較強，復(fù)發(fā)率較高。目前，手術(shù)切除是肝內(nèi)膽管細胞癌的主要治療方式［1］，化療、局部治療的療效仍不夠理想［2］。近年來，肝內(nèi)膽管細胞癌發(fā)生、發(fā)展過程中的關(guān)鍵生物標(biāo)志物為其臨床診療開辟了更為有效的研究靶點［3］。研究表明，溶質(zhì)載體家族7 成員11（Recombinant Solute Carrier Family 7，Member 11，SLC7A11）蛋白在膠質(zhì)瘤、胰腺癌等多種惡性腫瘤中過表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)［4-6］。SLC7A11和SLC3A2 共同組成胱氨酸轉(zhuǎn)運蛋白系統(tǒng) Xc-，轉(zhuǎn)運細胞外的胱氨酸至細胞內(nèi)，并將其轉(zhuǎn)化為半胱氨酸，促進谷胱甘肽的合成，在應(yīng)激條件下促使細胞維持氧化還原平衡，抑制脂質(zhì)過氧化誘導(dǎo)的鐵死亡［7-8］。鐵死亡作為一種新的細胞死亡機制，已成為腫瘤領(lǐng)域的研究熱點，但鐵死亡在膽管癌中的作用尚不明確。本研究采用免疫組化法檢測SLC7A11 蛋白在肝內(nèi)膽管細胞癌組織中的表達情況，并分析其表達與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，初步探索SLC7A11 蛋白與膽管癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2013 年1 月至2019 年6 月浙江大學(xué)

醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院的膽管癌手術(shù)切除標(biāo)本113 例，所有標(biāo)本均獲得病理明確診斷。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 腫瘤組織標(biāo)本離體后采用10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋保存。制作4 μm 厚的石蠟切片，之后進行烤片、二甲苯脫蠟，梯度乙醇溶液脫水。0.1 mmol/L 枸櫞酸鹽緩沖液高壓抗原修復(fù)，山羊血清封閉30 min，一抗4 ℃冰箱過夜，二抗孵育30 min，顯微鏡下觀察，采用DAB 顯色，中性樹膠封片。使用已知陽性片作為陽性對照，陰性對照采用PBS 溶液。

1.3 結(jié)果判定 SLC7A11 均以細胞內(nèi)出現(xiàn)淡黃色至棕褐色為陽性信號。每個組織標(biāo)本在高倍鏡下隨機選取5個視野，根據(jù)陽性細胞比例和染色強度計算分值。陽性細胞數(shù)（%），≤10%為1 分，＞10%～50%為2 分，＞50%～80%為3 分，＞80%為4 分。染色程度評分，陰性為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3分。上述兩項評分的乘積為最終評分，分值＜6 分為低表達，≥6 分為高表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以n表示，組間比較采用χ2檢驗；預(yù)后分析應(yīng)用Kaplan-Meier 生存曲線。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝內(nèi)膽管細胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達情況 見圖1。

圖1 SLC7A11蛋白 在肝內(nèi)膽管細胞癌組織中表達陰性及陽性的免疫組化染色（×20）

2.2 SLC7A11 蛋白表達與肝內(nèi)膽管細胞癌臨床病理特征的關(guān)系 SLC7A11 蛋白的表達與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、分化程度、CA-199、CEA 等均不相關(guān)（P＞0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。見表1。

表1 膽管癌組織中SLC7A11蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 SLC7A11 蛋白表達與膽管癌患者預(yù)后的相關(guān)性 SLC7A11 蛋白低表達組與高表達組無瘤生存期比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.004），SLC7A11 蛋白低表達組和高表達組肝內(nèi)膽管細胞癌患者的總體生存時間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.034）。見圖2。

圖2 SLC7A11蛋白低表達與高表達的生存分析

3 討論

膽管癌在臨床上缺乏有效治療策略且極易產(chǎn)生耐藥，是一種具有高致死率的惡性腫瘤［9］。近年來，鐵死亡研究為膽管癌的治療提供了新思路。鐵死亡是一種具有鐵離子依賴性的細胞氧化性死亡，而谷胱甘肽是細胞內(nèi)最重要的抗氧化劑，可抑制鐵死亡發(fā)生［10］。SLC7A11 蛋白介導(dǎo)的胱氨酸攝取，是細胞內(nèi)谷胱甘肽合成的重要途徑，腫瘤細胞中SLC7A11 蛋白高表達可抑制活性氧誘導(dǎo)的鐵死亡，而下調(diào)SLC7A11 蛋白的表達會減弱細胞的抗氧化能力，提高細胞對鐵死亡的敏感性［11-12］。SLC7A11 可通過調(diào)控鐵死亡促進腫瘤發(fā)展［13］，通過調(diào)節(jié)β-catenin 通路，減弱腫瘤細胞與細胞外基質(zhì)的黏附，進而促進食管癌細胞轉(zhuǎn)移［14］。SLC7A11 高表達可激活PI3K/Akt 通路，進而促進胰腺癌細胞的遷移侵襲能力［15］。由此可見，SLC7A11 蛋白的表達水平與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，肝內(nèi)膽管細胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說明 SLC7A11 在肝內(nèi)膽管細胞癌的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。

治療抵抗是膽管癌總體生存率低的重要因素。研究證實，SLC7A11 能夠促進癌細胞的治療抵抗。YANG等［16］研究報道，SLC7A11 的過表達可增強胰腺癌細胞對順鉑、吉西他濱等化療藥物的耐藥性，而靶向SLC7A11 的鐵死亡誘導(dǎo)劑erastin 可以逆轉(zhuǎn)ABCB1 介導(dǎo)的卵巢癌多西紫杉醇耐藥［17］。本研究肝內(nèi)膽管細胞癌標(biāo)本中SLC7A11 蛋白低表達組的總體生存時間和無瘤生存期均顯著高于高表達組，表明肝內(nèi)膽管細胞癌中的SLC7A11 蛋白可能介導(dǎo)了肝內(nèi)膽管細胞癌的化療耐藥。另外，還發(fā)現(xiàn)SLC7A11 在肝內(nèi)膽管癌組織中的表達與患者不良預(yù)后密切相關(guān)，說明SLC7A11 介導(dǎo)的鐵死亡可能是膽管癌進展的關(guān)鍵分子。

綜上所述，肝內(nèi)膽管細胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān)，提示SLC7A11 異常表達可能在肝內(nèi)膽管細胞癌的侵襲、轉(zhuǎn)移、化療耐藥過程中起著關(guān)鍵作用，有望為膽管癌治療提供新的靶點。