小檗堿對肝硬化大鼠肝功能的保護(hù)及炎癥抑制作用

竇芊， 李贏， 王園園， 趙巍峰

（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院感染科，河南新鄉(xiāng) 453000）

肝硬化是慢性肝病發(fā)展至晚期的一種肝纖維化疾病，以肝功能損傷、門脈高壓等為主要臨床表現(xiàn)，并累及多系統(tǒng)，逐漸并發(fā)肝性腦病、繼發(fā)性感染、上消化道出血、水電解質(zhì)紊亂、肝腹水及癌變等嚴(yán)重并發(fā)癥[1-2]。目前，臨床治療肝硬化主要有對癥消除病因、保肝、營養(yǎng)支持等保守治療方式以及肝移植。但保守治療僅能阻滯肝纖維化進(jìn)程；而肝移植雖然效果明顯，但成本高昂、供肝數(shù)量有限，且涉及倫理問題，限制了其臨床應(yīng)用[3]。因此，亟待探尋臨床綜合收益較高的肝硬化治療方式。中藥單體是研究的熱點(diǎn)之一。小檗堿（berberine），又名黃連素，是從毛莨科植物黃連、蕓香科植物黃檗、小檗科植物小檗等植物中得到的季胺型異喹啉類生物堿，具有抗炎、抗菌、抗病毒等藥理活性[4-9]。已有研究證實(shí)，小檗堿對肝硬化大鼠肝臟、腸黏膜具有保護(hù)作用[10]。本研究通過建立肝硬化大鼠模型，進(jìn)一步觀察小檗堿對其肝功能的影響，并探討其相關(guān)機(jī)制，以期為臨床該病治療提供參考，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物60只SPF級SD雄性大鼠，6周齡，體質(zhì)量（170±20）g，購自北京抗創(chuàng)聯(lián)生物制藥技術(shù)研究有限公司，使用許可證號：SYXK（京）2020-0046。顆粒飼料，自由飲食、飲水，適宜溫、濕度，自然光照，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 藥物、試劑與儀器小檗堿（純度＞98%，成都瑞芬思生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：CAS 2086-83-1）。轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）∕Smads信號通路特異性激活劑SRI-011381[純度為99.78%，MedChemexpress安諾倫（北京）生物科技有限公司產(chǎn)品]；四氯化碳（CCl4）溶液（上海研生生化試劑有限公司）；白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（上海晶抗生物工程有限公司）；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、白蛋白（ALB）試劑盒（德國默克集團(tuán)）；Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、透明質(zhì)酸（HA）試劑盒（北方生物技術(shù)研究所）；兔抗α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）多克隆抗體，兔抗TGF-β1、Smad4、Smad7單克隆抗體（美國Santa Cruz公司）；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白（IgG）抗體（上海聯(lián)邁生物工程有限公司）。Cobas8000全自動生化分析儀（瑞士羅氏集團(tuán)）；Multiskan Sky全波長酶標(biāo)儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）；GC-1500γ放射免疫計(jì)數(shù)器（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）；RM2265病理切片機(jī)（德國徠卡微系統(tǒng)有限公司）；DSX100光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯株式會社）。

1.3 模型建立與分組從60只大鼠中隨機(jī)抽取10只不作處理，設(shè)為正常組，其余50只建立肝硬化模型。造模方法[11]：第1周用苯巴比妥鈉溶液（0.35 g∕L）作為飲用水進(jìn)行誘導(dǎo)，第2、3周分別采用40%、50%CCl4菜籽油溶液（分別量取40、50 mL CCl4溶液，用菜籽油定容至100 mL）行皮下多點(diǎn)注射，第4~14周用60%CCl4菜籽油溶液（量取60 mL CCl4溶液，用菜籽油定容至100 mL）行皮下多點(diǎn)注射，每只每次3 mL∕kg，2次∕周，且第2~14周采用10%食用酒精作為唯一飲用水。第14周結(jié)束后，大鼠表現(xiàn)為毛發(fā)稀疏、無光澤、干枯，食欲下降，活動量減少，反應(yīng)遲鈍，有黑便排出，且與正常組指標(biāo)對照有明顯差異，可判斷建模成功[12]。建模成功大鼠共40只，將其隨機(jī)分為肝硬化組、激活劑組、小檗堿組、激活劑＋小檗堿組，每組10只。

1.4 干預(yù)方式確定建模成功后開始干預(yù)。激活劑組：SRI-011381（30 mg∕kg）與生理鹽水混合后灌胃，1次∕d，連續(xù)2周[13]；小檗堿組：小檗堿（200 mg∕kg）與生理鹽水混合后灌胃，1次∕d，連續(xù)2周[10]；激活劑＋小檗堿組：SRI-011381合小檗堿灌胃，用法及用量同激活劑組、小檗堿組。正常組、模型組：等體積生理鹽水灌胃。

1.5 組織取材末次給藥后禁食不禁水24 h，用戊巴比妥鈉50 mg∕kg腹腔注射麻醉，經(jīng)腹主動脈取血10 mL，靜置30 min，以3 500 r∕min離心（離心半徑=10 cm）15 min，分離血清保存于-80℃?zhèn)溆?。分離大鼠肝臟，取肝左葉，一部分固定于40 g∕L多聚甲醛中留待免疫組織化學(xué)染色及蘇木素-伊紅（HE）染色，其余保存于-80℃用于蛋白免疫印跡（Western Blot）實(shí)驗(yàn)。

1.6 觀察指標(biāo)與方法

1.6.1 血清肝功能指標(biāo)測定取冷凍保存血清，分別采用賴氏法、乳酸脫氫酶速率法、溴甲酚綠法測定血清AST、ALT、ALB水平，嚴(yán)格按照試劑盒及全自動生化分析儀使用說明書要求設(shè)計(jì)操作流程。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取均值。

1.6.2 血清炎癥因子指標(biāo)測定取冷凍保存血清，采用ELISA法測定血清IL-6、TNF-α水平，嚴(yán)格按照大鼠IL-6、TNF-αELISA試劑盒說明書操作。應(yīng)用酶標(biāo)儀于570 nm波長處測定吸光度值，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度和吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算IL-6、TNF-α含量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取均值。

1.6.3 血清肝纖維化程度指標(biāo)測定取冷凍保存血清，采用放射免疫法測定血清Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平。嚴(yán)格按照試劑盒及γ放射免疫計(jì)數(shù)器說明書要求設(shè)計(jì)操作流程。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取均值。

1.6.4 免疫組織化學(xué)染色測定肝臟組織α-SMA表達(dá)取固定于40 g∕L多聚甲醛中的肝臟組織，在恒冷箱冰凍切片機(jī)中行連續(xù)冠狀切片，厚度10μm，常規(guī)脫蠟至水。放置于檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液，于微波爐中溫火8 min至沸騰，停火8 min再次溫火沸騰8 min行抗原修復(fù)，自然冷卻，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌5 min×3次；切片置于3%過氧化氫溶液中室溫避光孵育30 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS洗滌5 min×3次；滴加3%牛血清白蛋白（BSA），37℃封閉30 min；自封閉液中取出切片，稍干后滴加兔抗α-SMA多克隆抗體（1∶200稀釋），4℃孵育過夜；切片于PBS中搖床洗滌，5 min×3次，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（1∶200稀釋），室溫孵育1 h；PBS洗滌切片5 min×3次，滴加DAB顯色液至顯微鏡下可觀察到棕褐色顆粒；蘇木素復(fù)染5 min，自來水沖洗并經(jīng)分化液分化2 s，自來水沖洗，蘇木素返藍(lán)60 s，自來水沖洗；常規(guī)脫水、封片，顯微鏡下觀察，隨機(jī)選取5個不相鄰視野，以IPP 6.0軟件對陽性區(qū)域積分光密度（IOD）值進(jìn)行分析。IOD值越大，表明α-SMA表達(dá)越高。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取平均值。

1.6.5 HE染色觀察肝臟病理變化取固定于40 g∕L多聚甲醛溶液中的肝臟組織，蒸餾水沖洗，常規(guī)脫水、透明、石蠟，于包埋機(jī)包埋，將包埋組織置于冰箱中冷凍，冷卻后制作成厚度為4μm的連續(xù)切片。42℃展片，82℃烘烤3 h，常規(guī)脫蠟至水，蘇木素染色5 min，自來水沖洗去除多余蘇木素染色。隨后，返藍(lán)10 min，脫水、透明、封片，風(fēng)干24 h，光學(xué)顯微鏡觀察肝臟組織病理變化。

1.6.6 Western Blot法測定肝臟組織TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表達(dá)取冷凍保存肝臟組織40 mg，充分勻漿后移至離心管；裂解液提取蛋白，二喹啉甲酸（BCA）試劑盒定量后配平；取40μg樣本混合等量上樣緩沖液，100℃金屬浴煮5 min，以12 000 r∕min離心（離心半徑8 cm）15 min；取上清，恒壓下電泳后以濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上，封閉液封閉2 h；加入兔抗TGF-β1（1∶100稀釋）、Smad4（1∶50稀釋）、Smad7（1∶50稀釋）一抗，4℃搖床孵育過夜，TBST洗膜3次；加入山羊抗兔IgG二抗（1∶1 000稀釋），室溫孵育2 h，TBST洗膜3次；加入電化學(xué)發(fā)光（ECL）顯色劑于暗室中曝光，凝膠成像系統(tǒng)分析。以TGF-β1、Smad4、Smad7灰度值與內(nèi)參GAPDH灰度值的比值表示各目的蛋白表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取均值。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多樣本資料比較應(yīng)用單因素方差分析。Levene檢驗(yàn)方差齊時，以單因素方差分析比較均值，以LSD-t檢驗(yàn)行兩兩比較。Levene檢驗(yàn)方差不齊時，以Welch檢驗(yàn)比較總體均值，以Dunnett’s T3檢驗(yàn)兩兩比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肝功能指標(biāo)比較表1結(jié)果顯示：血清AST、ALT、ALB水平組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與正常組比較，肝硬化組血清AST、ALT水平升高，ALB水平降低（P＜0.05）；與肝硬化組比較，激活劑組血清AST、ALT水平升高，ALB水平降低（P＜0.05）；與激活劑組比較，小檗堿組血清AST、ALT水平降低，ALB水平升高（P＜0.05）；與小檗堿組比較，激活劑＋小檗堿組血清AST、ALT水平升高，ALB水平降低（P＜0.05）。

表1 各組大鼠血清AST、ALT、ALB水平比較Table 1 Comparison of serum AST，ALT and ALB levels of rats in various groups （±s）

表1 各組大鼠血清AST、ALT、ALB水平比較Table 1 Comparison of serum AST，ALT and ALB levels of rats in various groups （±s）

①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與肝硬化組比較；③P＜0.05，與激活劑組比較；④P＜0.05，與小檗堿組比較

組別正常組肝硬化組激活劑組小檗堿組激活劑＋小檗堿組F值P值A(chǔ)LB（g·L-1）35.20±4.12 23.65±3.91①18.82±2.25①②30.30±4.10①②③27.11±2.30①②③④32.872＜0.001鼠數(shù)（只）10 10 10 10 10 AST（U·L-1）70.54±8.93 177.30±19.75①208.41±23.57①②112.52±20.28①②③145.82±26.62①②③④67.838＜0.001 ALT（U·L-1）36.60±5.59 76.65±8.51①92.24±10.33①②50.37±6.60①②③63.39±8.55①②③④72.404＜0.001

2.2 各組大鼠血清炎癥因子水平比較表2結(jié)果顯示：血清IL-6、TNF-α水平組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與正常組比較，肝硬化組血清IL-6、TNF-α水平升高（P＜0.05）；與肝硬化組比較，激活劑組血清IL-6、TNF-α水平升高（P＜0.05）；與激活劑組比較，小檗堿組血清IL-6、TNF-α水平降低（P＜0.05）；與小檗堿組比較，激活劑＋小檗堿組血清IL-6、TNF-α水平升高（P＜0.05）。

表2 各組大鼠血清IL-6、TNF-α水平比較Table 2 Comparison of serum IL-6 and TNF-αlevels of rats in various groups （±s，pg·mL-1）

表2 各組大鼠血清IL-6、TNF-α水平比較Table 2 Comparison of serum IL-6 and TNF-αlevels of rats in various groups （±s，pg·mL-1）

①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與肝硬化組比較；③P＜0.05，與激活劑組比較；④P＜0.05，與小檗堿組比較

TNF-α 18.57±2.61 66.71±8.52①79.95±9.33①②32.80±4.97①②③51.13±6.80①②③④129.588＜0.001組別正常組肝硬化組激活劑組小檗堿組激活劑＋小檗堿組F值P值鼠數(shù)（只）10 10 10 10 10 IL-6 70.21±9.45 209.56±23.92①251.40±32.96①②116.93±18.50①②③170.30±21.14①②③④102.316＜0.001

2.3 各組大鼠肝纖維化程度比較表3結(jié)果顯示：血清Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與正常組比較，肝硬化組血清Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平升高（P＜0.05）；與肝硬化組比較，激活劑組血清Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平升高（P＜0.05）；與激活劑組比較，小檗堿組血清Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平降低（P＜0.05）；與小檗堿組比較，激活劑＋小檗堿組血清Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平升高（P＜0.05）。

表3 各組大鼠血清Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平比較Table 3 Comparison of serumⅣ-C，PCⅢand HA levels of rats in various groups （±s，ng·mL-1）

表3 各組大鼠血清Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平比較Table 3 Comparison of serumⅣ-C，PCⅢand HA levels of rats in various groups （±s，ng·mL-1）

①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與肝硬化組比較；③P＜0.05，與激活劑組比較；④P＜0.05，與小檗堿組比較

組別正常組肝硬化組激活劑組小檗堿組激活劑＋小檗堿組F值P值HA 5.17±0.63 24.30±3.82①31.42±4.95①②12.54±2.38①②③17.65±2.09①②③④104.518＜0.001鼠數(shù)（只）10 10 10 10 10Ⅳ-C 2.01±0.36 14.95±1.82①19.33±2.14①②6.23±0.72①②③10.02±1.86①②③④196.167＜0.001 PCⅢ1.26±0.22 6.51±0.75①8.97±1.04①②3.15±0.43①②③4.90±0.55①②③④203.291＜0.001

2.4 各組大鼠肝臟組織α-SMA免疫組織化學(xué)染色結(jié)果比較圖1、表4結(jié)果顯示：正常組肝組織中僅可觀察到少量棕色顆粒；肝硬化組與激活劑組匯管區(qū)與胞漿中可觀察到陽性顆粒顯著增多；與肝硬化組及激活劑組比較，小檗堿組、激活劑＋小檗堿組陽性顆粒顯著減少。IOD值半定量分析結(jié)果顯示：IOD值組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與正常組比較，肝硬化組IOD值升高（P＜0.05）；與肝硬化組比較，激活劑組IOD值升高（P＜0.05）；與激活劑組比較，小檗堿組IOD值升高降低（P＜0.05）；與小檗堿組比較，激活劑＋小檗堿組IOD值升高（P＜0.05）。

表4 各組大鼠肝組織α-SMA的IOD值比較Table 4 Comparison of IOD value ofα-SMA in liver tissues of rats in various groups （±s）

表4 各組大鼠肝組織α-SMA的IOD值比較Table 4 Comparison of IOD value ofα-SMA in liver tissues of rats in various groups （±s）

①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與肝硬化組比較；③P＜0.05，與激活劑組比較；④P＜0.05，與小檗堿組比較

IOD值0.85±0.12 8.36±0.85①10.22±1.34①②3.11±0.52①②③5.30±0.71①②③④218.512＜0.001組別正常組肝硬化組激活劑組小檗堿組激活劑＋小檗堿組F值P值鼠數(shù)（只）10 10 10 10 10

圖1 各組大鼠肝組織α-SMA陽性表達(dá)分布比較（免疫組織化學(xué)染色法，×200）Figure 1 Comparison of positive expression distribution ofα-SMA in liver tissues of rats in various groups（by Immunohistochemical staining，×200）

2.5 各組大鼠肝臟組織病理變化比較圖2結(jié)果顯示：正常組肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，未觀察到壞死、變性等病理改變，肝竇無淤血，肝板走行清晰、整齊，匯管區(qū)無明顯炎性細(xì)胞浸潤、纖維性擴(kuò)展；肝硬化組與激活劑組肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，部分發(fā)生腫脹及壞死，并可觀察到散在的空泡樣脂肪變性，匯管區(qū)及中央靜脈區(qū)纖維性擴(kuò)展，伴有炎性細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)-中央靜脈、匯管區(qū)-匯管區(qū)形成粗大橋接纖維間隔及假小葉；小檗堿組肝細(xì)胞形態(tài)基本規(guī)則，部分腫脹、壞死，肝索略模糊，小葉結(jié)構(gòu)尚存，匯管區(qū)基本形成橋接纖維間隔，少量炎性細(xì)胞浸潤，病理變化及纖維化程度較肝硬化組、激活劑組明顯改善；激活劑＋小檗堿組病理變化及纖維化程度較肝硬化組、激活劑組有所改善，但不及小檗堿組。

圖2 各組大鼠肝臟組織病理變化比較（HE染色法，×200）Figure 2 Comparison of pathological changes of liver tissues of rats in various groups（by HE staining，×200）

2.6 各組大鼠肝臟組織TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表達(dá)比較表5、圖3結(jié)果顯示：TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表達(dá)量組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與正常組比較，肝硬化組TGF-β1、Smad4蛋白表達(dá)量升高，Smad7蛋白表達(dá)量降低（P＜0.05）；與肝硬化組比較，激活劑組TGF-β1、Smad4蛋白表達(dá)量升高，Smad7蛋白表達(dá)量降低（P＜0.05）；與激活劑組比較，小檗堿組TGF-β1、Smad4蛋白表達(dá)量降低，Smad7蛋白表達(dá)量升高（P＜0.05）；與小檗堿組比較，激活劑＋小檗堿組TGF-β1、Smad4蛋白表達(dá)量升高，Smad7蛋白表達(dá)量降低（P＜0.05）。

表5 各組大鼠肝臟組織TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表達(dá)比較Table 5 Comparison of protein expression of TGF-β1，Smad4 and Smad7 in liver tissues in various groups（±s）

表5 各組大鼠肝臟組織TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表達(dá)比較Table 5 Comparison of protein expression of TGF-β1，Smad4 and Smad7 in liver tissues in various groups（±s）

①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與肝硬化組比較；③P＜0.05，與激活劑組比較；④P＜0.05，與小檗堿組比較

組別正常組肝硬化組激活劑組小檗堿組激活劑＋小檗堿組F值P值Smad7 0.59±0.06 0.20±0.03①0.13±0.02①②0.40±0.05①②③0.31±0.04①②③④180.167＜0.001鼠數(shù)（只）10 10 10 10 10 TGF-β1 0.16±0.02 0.71±0.08①0.92±0.08①②0.31±0.04①②③0.57±0.06①②③④252.255＜0.001 Smad4 0.18±0.03 0.60±0.07①0.86±0.09①②0.27±0.03①②③0.42±0.05①②③④213.526＜0.001

圖3 各組大鼠肝組織TGF-β1、Smad4、Smad7的Western Blot電泳條帶圖Figure 3 Western Blot diagram of TGF-β1，Smad4，Smad7 protein expression in liver tissues of rats in various groups

3 討論

肝硬化是一種或多種病因?qū)е碌囊环N彌漫性、進(jìn)行性慢性炎癥肝損傷，以肝細(xì)胞大量變性、壞死及凋亡，殘留肝細(xì)胞形成再生結(jié)節(jié)，結(jié)締組織彌漫性增生、形成纖維隔等為主要病理改變，進(jìn)而形成假小葉并破壞肝小葉結(jié)構(gòu)，肝臟變形、變硬，逐漸發(fā)展為肝硬化[14]。盡管臨床已意識到早期干預(yù)肝硬化的必要性，但由于其病因復(fù)雜，尚缺少除肝移植以外的有效治療方式[15]。肝纖維化是多種慢性肝病共同的病理特征，且是向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)途徑。因此，積極開發(fā)抑制肝纖維化及炎性反應(yīng)藥物是臨床干預(yù)肝硬化的主要思路。

肝臟纖維化過程中生成大量膠原，形成PCⅢ，可反映Ⅲ型膠原合成情況，Ⅳ-C是基底膜的主要成分，檢測兩者血清含量已成為判斷肝硬化的重要指標(biāo)。HA是一種由間質(zhì)細(xì)胞合成的高分子多糖，參與蛋白聚糖多糖體的形成，具有維持組織體積、形態(tài)及抗壓縮、抗張力等作用，常作為肝臟疾病肝纖維化程度的血清標(biāo)志物，其與PCⅢ、Ⅳ-C的升高提示細(xì)胞外基質(zhì)的降解減少或沉積增加。α-SMA蛋白主要分布于肌成纖維細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞中，肝臟組織中僅活化的肝星狀細(xì)胞可表達(dá)該蛋白，因此其被視為肝星狀細(xì)胞激活的標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示：與正常組比較，肝硬化組血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值升高，ALB水平降低（P＜0.05）；與肝硬化組比較，激活劑組血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值升高，ALB水平降低（P＜0.05）；與激活劑組比較，小檗堿組血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值降低，ALB水平升高（P＜0.05）；與小檗堿組比較，激活劑＋小檗堿組血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值升高，ALB水平降低（P＜0.05）。HE染色結(jié)果亦顯示，相較于肝硬化組，小檗堿組肝組織病理變化有所減輕。提示小檗堿可保護(hù)肝硬化大鼠肝功能，抑制炎性反應(yīng)，促進(jìn)膠原降解，抑制肝纖維化。

TGF-β可誘導(dǎo)多種細(xì)胞基質(zhì)膠原蛋白表達(dá)，且是重要的促纖維化生長因子，可導(dǎo)致肝、肺、腎等多種器官纖維化。TGF-β1是目前最重要的致肝纖維化細(xì)胞因子，其通過自分泌、旁分泌等調(diào)控方式刺激肝星狀細(xì)胞基質(zhì)蛋白質(zhì)過度合成、沉積，引發(fā)纖維化與器官衰竭。Smads位于TGF-β信號通路下游，其中Smad4是信號中轉(zhuǎn)分子，雖不直接與受體發(fā)生作用，但可通過結(jié)合DNA調(diào)控相關(guān)因子的表達(dá)。Smad7是TGF-β信號通路的抑制元件，可特異并競爭性結(jié)合TGF-β受體復(fù)合物，阻斷其對細(xì)胞質(zhì)中Smads蛋白的激活作用，進(jìn)而抑制該細(xì)胞通路傳導(dǎo)[16]。Yang等[17]研究顯示，阻斷TGF-β1∕Smads信號通路可有效改善硫代乙酰胺注射液所致的大鼠肝纖維化，抑制人肝星狀細(xì)胞LX-2中膠原I、α-SMA表達(dá)，提示TGF-β1∕Smads信號通路在治療肝硬化中的潛力。SRI-011381是TGF-β1∕Smads信號通路的特異性激活劑，可通過強(qiáng)化TGF-β1信號傳導(dǎo)提升該通路活性。本研究結(jié)果顯示，與正常組比較，肝硬化組TGF-β1、Smad4蛋白表達(dá)量升高，Smad7蛋白表達(dá)量降低（P＜0.05）；與肝硬化組比較，激活劑組TGF-β1、Smad4蛋白表達(dá)量升高，Smad7蛋白表達(dá)量降低（P＜0.05）；與激活劑組比較，小檗堿組TGF-β1、Smad4蛋白表達(dá)量降低，Smad7蛋白表達(dá)量升高（P＜0.05）；與小檗堿組比較，激活劑＋小檗堿組TGF-β1、Smad4蛋白表達(dá)量升高，Smad7蛋白表達(dá)量降低（P＜0.05）。提示SRI-011381的使用可導(dǎo)致肝硬化病程加重，且在一定程度上減弱小檗堿的效果，推測小檗堿對肝硬化大鼠的治療作用可能是通過抑制TGF-β1∕Smads信號通路來實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，小檗堿可抑制肝硬化大鼠炎性反應(yīng)，促進(jìn)肝臟膠原降解，降低肝纖維化程度，保護(hù)肝功能，其作用機(jī)制與抑制TGF-β1∕Smads信號通路有關(guān)。