蘆根提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究

陳炎歡 劉賢釗 江志鵬 黃照榮 李美珍

摘 要：目的：初步建立蘆根提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：對(duì)9批次的蘆根提取物的感官、鑒別，理化、香豆酸、微生物和重金屬指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定與分析評(píng)價(jià)。結(jié)果：建議蘆根提取物中水分含量不得>7%，灰分含量不得>10%，粒度（過100目篩）≥90%，香豆酸含量（以干燥品計(jì)）≥0.01%，鉛含量不得>5.0 mg/kg，砷含量不得>2.0 mg/kg，汞含量不得>0.2 mg/kg，鎘含量不得>0.3 mg/kg，菌落總數(shù)不得>1 000 CFU/g，霉菌和酵母不得>100 CFU/g，大腸埃希氏菌和沙門氏菌不得檢出。結(jié)論：初步建立了蘆根提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：蘆根;提取物;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

Studies on Quality Standard of Rhizoma Phragmitis Extracts

CHEN Yanhuan， LIU Xianzhao， JIANG Zhipeng， HUANG Zhaorong， LI Meizhen*

（Infinitus （China） Co.， Ltd.， Jiangmen 529100， China）

Abstract： Objective： To establish the quality standard of rhizoma phragmitis extract. Methods： The sensory， identification， physicochemical， coumalic acid， microorganism and heavy metal indexes of 9 batches of rhizome phragmitis extract were determined and analyzed. Results： It is suggested that the water content in the rhizoma phragmitis extract shall not exceed 7%， the total ash content shall not exceed 10%， the particle size （through 100 mesh sieve） shall be greater than or equal to 90%， the coumalic acid content （based on dry product） shall be greater than or equal to 0.01%， lead content shall not exceed 5.0 mg/kg， arsenic content shall not exceed 2.0 mg/kg， mercury content shall not exceed 0.2 mg/kg， cadmium content shall not exceed 0.3 mg/kg， total bacterial count shall not exceed 1 000 CFU / g， mold and yeast content shall not exceed 100 CFU/g， Escherichia coli and Salmonella could not be detected. Conclusion： The evaluation system of the quantitative quality control standards for the rhizoma phragmitis extract was established.

Keywords： rhizoma phragmitis; extract; quality standard

蘆根是禾本科植物蘆葦（Phragmites communis Trin.）的新鮮或干燥根莖，性寒味甘，具有清熱瀉火、生津止嘔、除煩、利尿的功效[1-5]。蘆根提取物是蘆根藥材采用適宜的工藝制備而成，目前尚無官方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本研究對(duì)9批次的蘆根提取物的感官、鑒別，理化、香豆酸、微生物和重金屬指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定與分析評(píng)價(jià)，初步確立了蘆根提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為蘆根提取物質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與儀器

1.1 儀器

HP1200 型高效液相色譜儀（包括二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)Agilent公司），KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限

公司）。

1.2 試劑

對(duì)香豆酸（CAS號(hào)501-98-4，中國(guó)食品藥品檢定研究院）;甲醇為色譜純（德國(guó)Merck公司）;其他試劑均為分析純，水為純化水。

1.3 材料

蘆根提取物由適量蘆根藥材加8倍量水煎煮3次，合并濾液，70 ℃減壓濃縮，經(jīng)噴霧干燥而得。9批蘆根提取物來源于2個(gè)廠家，編號(hào)1-9。

2 試驗(yàn)方法

2.1 感官測(cè)定

取本品嗅其氣味、嘗其滋味;另取試樣適量置于白色瓷盤中觀察其色澤、外觀，并檢查有無異物。

2.2 藥材及樣品配制

2.2.1 對(duì)照藥材溶液配制

取蘆根對(duì)照藥材1.0 g，置于錐形瓶中，加入三氯甲烷10 mL，超聲（250 W，40 kHz）處理20 min，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 供試品溶液配制

取本品粉末約8.0 g，置于錐形瓶中，加入三氯甲烷10 mL，超聲（250 W，40 kHz）處理20 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄槿軇┎⒍ㄈ葜?.5 mL，即得。

2.3 薄層色譜測(cè)定

分別吸取蘆根對(duì)照品藥材溶液35 ?L，供試品溶液20～25 ?L，點(diǎn)于同一硅膠板上，以石油醚（60～

90 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（20∶10∶2，體積比）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在110 ℃加熱至斑點(diǎn)或條帶顯色清晰，置可見光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)上。

2.4 理化指標(biāo)測(cè)定

水分按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定》（GB 5009.3—2016）規(guī)定的第一法進(jìn)行測(cè)定?；曳职凑铡妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中灰分的測(cè)定》（GB 5009.4—2016）規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定。粒度按照《中華人民共和國(guó)藥典（2020版）》第四部通則粒度和粒度分布測(cè)定法第二法（篩分法）進(jìn)行測(cè)定，過100目篩。

2.5 對(duì)香豆酸的含量測(cè)定

2.5.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱取對(duì)香豆酸對(duì)照品約1 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得對(duì)照品溶液。

2.5.2 供試品溶液制備

精密稱取本品約1.0 g于50 mL小燒杯中，加水20 mL，加熱使溶解，取出，放至室溫，轉(zhuǎn)移至25 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，搖勻，用0.45 ?m的針式過濾器過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.6 色譜條件

色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（150 mm或250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，以0.2%甲酸溶液為流動(dòng)相B，按18∶82比例（體積比）進(jìn)行洗脫;波長(zhǎng)310 nm;柱溫30 ℃;流速1.0 mL/min;進(jìn)樣量10 μL;理論塔板數(shù)按對(duì)香豆酸計(jì)不低于5 000。

2.7 線性關(guān)系考察

精密稱取對(duì)香豆酸對(duì)照品1.411 mg置于50 mL容量瓶中，按2.5.1項(xiàng)下制備方法加甲醇溶解制成儲(chǔ)備液，再精密吸取該儲(chǔ)備液1.0 mL、2.0 mL、

4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL分別至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，按2.6項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定峰面積。

3 結(jié)果與分析

3.1 感官測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)觀察結(jié)果為：9批蘆根提取物為黃棕色至棕褐色干燥均勻粉末，色澤均勻，具有蘆根特有的氣味，無異味，無正常視力可見外來異物。

3.2 蘆根提取物薄層色譜測(cè)定結(jié)果

S為蘆根對(duì)照藥材。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

3.3 理化指標(biāo)測(cè)定

蘆根提取物水分、灰分、粒度測(cè)定結(jié)果，見表1。

3.4 線性關(guān)系考察

以對(duì)香豆酸對(duì)照品的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得回歸方程：Y=1.327 9X-0.093 6，R2=0.999 9。結(jié)果表明對(duì)香豆酸在2.802 3～28.022 5 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取2.5.1項(xiàng)下制備的對(duì)香豆酸對(duì)照品溶液（濃度11.209 0 ?g/mL），重復(fù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算峰面積及保留時(shí)間的RSD值，保留時(shí)間和峰面積的RSD值分別為0.04%和0.06%。不對(duì)稱度以對(duì)香豆酸計(jì)不高于1.2。理論塔板數(shù)，以對(duì)香豆酸計(jì)約12 000。表明儀器精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取蘆根提取物（批號(hào)CLUG-A-922656）按2.5.2項(xiàng)下制備的供試品溶液，按2.6項(xiàng)下色譜條件分別于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果供試品中對(duì)香豆酸峰面積的RSD為0.43%（n=6），表明本品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取蘆根提取物（批號(hào)CLUG-A-922656）同一天內(nèi)按2.5.2項(xiàng)下制備的6份供試品溶液，按2.6項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，對(duì)香豆酸平均含量為0.018%，RSD為1.88%。分離度大于1.5。表明該方法重復(fù)性良好。

3.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取蘆根提取物（批號(hào)CLUG-A-922656，對(duì)香豆酸含量為0.018%）約0.5 g于9個(gè)50 mL小燒杯中。另取對(duì)香豆酸對(duì)照品（純度99.3%）1.723 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容（此對(duì)照品溶液含對(duì)香豆酸17.109 4 ?g/mL），分別吸取該對(duì)照品溶液2.5 mL（以對(duì)香豆酸計(jì)42.773 5 ?g）、5.0 mL（以對(duì)香豆酸計(jì)85.547 0 ?g）、7.5 mL（以對(duì)香豆酸計(jì)128.320 4 ?g），分3組加入含樣品的9個(gè)50 mL小燒杯中，按2.5.2項(xiàng)下制成供回收率測(cè)定用供試品溶液，按2.6項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算對(duì)香豆酸的回收率，平均回收率為98.09%（95%～105%），RSD值為0.72%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

3.9 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶各10 ?L，

注入液相色譜儀，測(cè)定。根據(jù)所得對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖中對(duì)香豆酸峰面積計(jì)算供試品中待測(cè)組分對(duì)香豆酸含量。結(jié)果見表3，9批蘆根提取物中對(duì)香豆酸含量按干燥品計(jì)算分別不低于0.01%。

3.10 重金屬指標(biāo)測(cè)定

重金屬指標(biāo)按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中多元素的測(cè)定》（GB 5009.268—2016）第一法電感耦合等離子質(zhì)譜法（ICP-MS）規(guī)定的方法測(cè)定鉛、砷、鎘、汞含量。結(jié)果見表4。

3.11 微生物檢查

菌落總數(shù)的測(cè)定按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》（GB 4789.2—2016）規(guī)定的方法進(jìn)行;霉菌和酵母的測(cè)定按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（GB 4789.15—2016）規(guī)定的方法進(jìn)行;大腸埃希氏菌的測(cè)定按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)》（GB 4789.38—2012）規(guī)定的方法進(jìn)行。沙門氏菌的測(cè)定按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.4—2016）規(guī)定的方法進(jìn)行。結(jié)果見表5。

4 結(jié)論與討論

根據(jù)對(duì)蘆根提取物中的鑒別、水分、灰分、粒度、對(duì)香豆酸含量、重金屬和微生物測(cè)定結(jié)果，結(jié)合食品和藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定原則和相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以及產(chǎn)品特性、市場(chǎng)要求制定本標(biāo)準(zhǔn)初步制定了蘆根提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見表6。本研究初步建立的蘆根提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高了其質(zhì)量評(píng)價(jià)的客觀性與專屬性，為進(jìn)一步規(guī)范蘆根提取物生產(chǎn)、銷售行業(yè)提供了科學(xué)依據(jù)。

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