miR-103a-3p靶向CEMIP基因調(diào)控肺癌細(xì)胞增殖與凋亡的分子機(jī)制

張麗萍 楊靜 段學(xué)波 王慎臨 吳萍

(寧夏人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，寧夏 銀川 750001)

肺癌發(fā)病率較高且患者5年生存率極低，早期診斷、藥物治療等均是影響肺癌患者死亡的重要原因〔1〕。由于肺癌早期臨床癥狀不明顯導(dǎo)致大部分患者就診時(shí)已處于肺癌晚期，晚期患者錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)導(dǎo)致生存率降低〔2〕。因而肺癌早期診斷及評(píng)估預(yù)后的有效指標(biāo)成為當(dāng)前研究亟待解決的問題。研究表明微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)在膠質(zhì)瘤發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮抑癌作用，上調(diào)miR-103a-3p表達(dá)可抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的惡性進(jìn)展〔3〕。miR-103a-3p在膀胱癌細(xì)胞中呈低表達(dá)，miR-103a-3p過表達(dá)可抑制膀胱癌細(xì)胞增殖進(jìn)而減緩癌癥進(jìn)展〔4〕。研究報(bào)道指出miR-103a-3p在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)揮抗腫瘤作用，但關(guān)于其具體作用機(jī)制尚未明確〔5〕。然而，miR-103a-3p在肺癌發(fā)生及發(fā)展過程中具體作用機(jī)制的研究相對(duì)較少。通過靶基因預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)CEMIP基因可能是miR-103a-3p的靶基因，研究表明CEMIP在卵巢癌細(xì)胞中呈高表達(dá)，并可通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌發(fā)生及發(fā)展〔6〕。Miao等〔7〕研究表明抑制CEMIP表達(dá)可抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤增殖、遷移及侵襲。胰腺癌患者血清中CEMIP表達(dá)水平顯著升高，其可作為臨床診斷胰腺癌的重要輔助指標(biāo)〔8〕。然而，關(guān)于miR-103a-3p是否通過調(diào)控CEMIP基因表達(dá)進(jìn)而參與肺癌發(fā)生及發(fā)展過程仍未可知。因此，本研究探討miR-103a-3p及CEMIP在肺癌細(xì)胞增殖及凋亡中的作用。

1 材料與方法

1.1材料與試劑 人正常肺上皮細(xì)胞BEAS-2B與肺癌細(xì)胞H1299、A549、SPC-A-1均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所；RPMI1640培養(yǎng)基均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢艾美捷科技有限公司；細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒與碘化丙啶(PI)均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；RIPA蛋白裂解液購(gòu)自上海翊圣生物科技有限公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司；Trizol試劑購(gòu)自北京天根生化科技有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)試劑盒均購(gòu)自德國(guó)Roche公司；Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；miR-103a-3p mimics、miR-103a-3p抑制劑(anti-miR-103a-3p)、si-CEMIP及其陰性對(duì)照均購(gòu)自廣州銳博生物科技有限公司；雙熒光素酶報(bào)告基因鑒定試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗購(gòu)自美國(guó)R&D公司；兔抗鼠細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)依賴性激酶(CDK)4、CyclinD1一抗均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；兔抗人B細(xì)胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)多克隆抗體及CEMIP一抗均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及分組 取出凍存的BEAS-2B、H1299、A549、SPC-A-1細(xì)胞，37℃水浴鍋內(nèi)復(fù)蘇細(xì)胞，4℃條件下，1 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，棄上清，加入含有10%FBS及雙抗溶液(青霉素-鏈霉素混合溶液)的RPMI1640培養(yǎng)基，放入溫度37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%、相對(duì)濕度95%的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合度達(dá)到80%時(shí)，棄舊培養(yǎng)基，用預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌細(xì)胞，加入0.2%胰蛋白酶消化細(xì)胞，5 min后加入含有10%FBS及雙抗溶液(青霉素-鏈霉素混合溶液)的RPMI1640培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)，待細(xì)胞穩(wěn)定傳代2～3代后收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前1 h將培養(yǎng)基更換為Opti-MEM減血清培養(yǎng)基，參照Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒進(jìn)行轉(zhuǎn)染，將miR-103a-3p mimics、miR-103a-3p抑制劑(anti-miR-103a-3p)、si-CEMIP及其陰性對(duì)照分別轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞，命名為miR-con組、miR-103a-3p組、anti-miR-103a-3p組、anti-miR-NC組、si-con組、si-CEMIP組。同時(shí)將miR-103a-3p mimics與pcDNA共轉(zhuǎn)染入肺癌A549細(xì)胞，miR-103a-3p mimics與pcDNA-CEMIP共轉(zhuǎn)染入肺癌A549細(xì)胞，命名為miR-103a-3p+pcDNA組、miR-103a-3p+pcDNA-CEMIP組。轉(zhuǎn)染后置于溫度37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%、相對(duì)濕度95%的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染6 h后更換為含有10%FBS及雙抗溶液(青霉素-鏈霉素混合溶液)的RPMI1640培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2qRT-PCR 采用Trizol法提取細(xì)胞總RNA，微量核酸蛋白分析儀測(cè)定RNA濃度，RNA濃度為100～500 ng/μl，A260/A280(吸光度值)在1.9～2.1為合格樣本，參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，置于-20℃冰箱保存。利用qRT-PCR試劑盒進(jìn)行qRT-PCR，配制體系共20 μl，其主要包括10 μl的SYBR Premix，1 μl的cDNA樣本，上下游引物各0.5 μl，ddH2O補(bǔ)足體系至20 μl。每個(gè)樣本均設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，反應(yīng)條件為95℃ 5 min，95℃變性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循環(huán)35次。以2-ΔΔCt法計(jì)算miR-103a-3p和CEMIP的mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3Western印跡 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人正常肺上皮細(xì)胞BEAS-2B與肺癌細(xì)胞H1299、A549、SPC-A-1及轉(zhuǎn)染后各組A549細(xì)胞，4℃，1 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，加入RIPA蛋白裂解液裂解細(xì)胞30 min提取細(xì)胞總蛋白，BCA法定量蛋白，配制分離膠(12%)與濃縮膠(5%)，取適量蛋白樣品加入上樣緩沖液(比例為1∶4)，充分混勻后上樣(蛋白量20 μg)，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白，反應(yīng)條件為起始電壓80 V，樣品指示劑進(jìn)入分離膠電壓調(diào)整為120 V，反應(yīng)結(jié)束后將分離的蛋白凝膠轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜，轉(zhuǎn)膜反應(yīng)條件為電壓80 V，時(shí)間為90 min，溫度為4℃，Tis-HCI緩沖液(TBST)洗滌蛋白凝膠，加入5%脫脂牛奶封閉1 h，TBST洗滌后加入蛋白一抗(稀釋倍數(shù)1∶500)，4℃條件下孵育24 h，TBST洗滌后加入二抗(稀釋倍數(shù)1∶5 000)，室溫孵育1 h，加入增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑(ECL)顯影，放入凝膠成像系統(tǒng)分析蛋白表達(dá)情況。

1.2.4MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖 分別收集轉(zhuǎn)染后各組肺癌A549細(xì)胞，接種于96孔板，每組均設(shè)置3次重復(fù)，調(diào)整細(xì)胞密度(1×105個(gè)細(xì)胞/ml)，放入溫度37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%、相對(duì)濕度95%的培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)24 h、48 h、72 h、96 h后加入MTT溶液(20 μl)，室溫孵育4 h后吸取上清，向每孔加入150 μl二甲基亞砜(DMSO)溶液，室溫孵育25 min，置于酶標(biāo)儀內(nèi)檢測(cè)波長(zhǎng)為490 nm處各孔吸光度值。

1.2.5流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 收集轉(zhuǎn)染48 h后各組A549細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度(1×106個(gè)細(xì)胞/ml)，采用預(yù)冷的PBS清洗2次×5 min，加入100 μl結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞，依次加入5 μl Annexin V-FITC與5 μl PI，充分混勻后避光孵育10 min，上機(jī)前各流式管內(nèi)加入400 μl結(jié)合緩沖液，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組A549細(xì)胞凋亡情況。

1.2.6雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定 利用靶基因預(yù)測(cè)庫(kù)預(yù)測(cè)miR-103a-3p與CEMIP的3′UTR存在結(jié)合位點(diǎn)，構(gòu)建熒光素酶報(bào)告載體，將含有miR-103a-3p結(jié)合位點(diǎn)的CEMIP 3′UTR片段插入熒光素酶報(bào)告基因載體構(gòu)建野生型WT-CEMIP載體，將結(jié)合位點(diǎn)突變后的CEMIP 3′UTR片段插入熒光素酶報(bào)告基因載體構(gòu)建突變型MUT-CEMIP載體，將上述兩種載體分別與miR-103a-3p mimics或陰性對(duì)照共轉(zhuǎn)染至肺癌A549細(xì)胞，放入溫度37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%、相對(duì)濕度95%的培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)48 h后使用熒光素酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)熒光素酶活性變化。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1miR-103a-3p和CEMIP在人肺癌細(xì)胞和人正常肺上皮細(xì)胞中的表達(dá) 人正常肺上皮細(xì)胞BEAS-2B中miR-103a-3p的表達(dá)水平顯著高于人肺癌細(xì)胞H1299、A549、SPC-A-1(P<0.05)，其中肺癌A549細(xì)胞中miR-103a-3p的表達(dá)水平相對(duì)其他肺癌細(xì)胞顯著降低(P<0.05)，與BEAS-2B細(xì)胞比較，人肺癌細(xì)胞H1299、A549、SPC-A-1中CEMIP的mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)，其中肺癌A549細(xì)胞中CEMIP的mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著高于其他肺癌細(xì)胞(P<0.05)。見圖1、表1。因此后續(xù)研究中以肺癌A549細(xì)胞為研究對(duì)象。

圖1 Western印跡檢測(cè)CEMIP蛋白表達(dá)

表1 各組miR-103a-3p和CEMIP表達(dá)水平比較

2.2上調(diào) miR-103a-3p表達(dá)對(duì)人肺癌細(xì)胞A549增殖的影響 通過將miR-103a-3p mimics轉(zhuǎn)染至肺癌A549細(xì)胞，qRT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示，miR-103a-3p組肺癌A549細(xì)胞中miR-103a-3p的表達(dá)水平顯著高于miR-con組(P<0.05)，表明轉(zhuǎn)染成功。與miR-con組比較，miR-103a-3p組肺癌A549細(xì)胞在轉(zhuǎn)染48 h、72 h、96 h后細(xì)胞增殖活性明顯降低(P<0.05)。miR-103a-3p組肺癌A549細(xì)胞中CDK4、CyclinD1的蛋白表達(dá)水平相較于miR-con組顯著降低(P<0.05)，見圖2、表2。表明上調(diào)miR-103a-3p表達(dá)可通過下調(diào)CDK4、CyclinD1的蛋白表達(dá)進(jìn)而抑制肺癌細(xì)胞增殖。

圖2 Western印跡檢測(cè)人肺癌細(xì)胞A549增殖相關(guān)蛋白和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)

表2 上調(diào)miR-103a-3p表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響

2.3上調(diào)miR-103a-3p表達(dá)對(duì)人肺癌細(xì)胞A549凋亡的影響 轉(zhuǎn)染miR-103a-3p mimics后肺癌A549細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.05)，Bcl-2表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.05)，Bax表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05)，見圖3，圖4，表3。表明上調(diào)miR-103a-3p表達(dá)后可通過下調(diào)Bcl-2表達(dá)及上調(diào)Bax表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡。

圖3 檢測(cè)人肺癌細(xì)胞A549凋亡率

圖4 Western印跡檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)

表3 上調(diào)miR-103a-3p表達(dá)對(duì)人肺癌細(xì)胞A549凋亡的影響

2.4miR-103a-3p靶向調(diào)控CEMIP蛋白表達(dá) 利用靶基因預(yù)測(cè)網(wǎng)站鑒定miR-103a-3p的靶基因及其在CEMIP基因的3′UTR中的結(jié)合位點(diǎn)，見圖5。雙熒光素酶活性測(cè)定結(jié)果顯示，在含有miR-103a-3p與CEMIP基因的3′UTR結(jié)合位點(diǎn)的WT-CEMIP野生型質(zhì)粒細(xì)胞中，與miR-con組比較，miR-103a-3p組熒光素酶活性顯著降低(P<0.05)，在含有結(jié)合位點(diǎn)突變基因的MUT-CEMIP突變型質(zhì)粒細(xì)胞中，miR-103a-3p組熒光素酶活性與miR-con組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。表明miR-103a-3p可調(diào)控CEMIP的活性。與miR-103a-3p組(EMIP蛋白(0.32±0.04)比較，miR-con組(0.76±0.08)顯著升高(P<0.05)，與anti-miR-103a-3p組CEMIP蛋白(0.97±0.07)比較，anti-miR-con組(0.79±0.06)顯著下降(P<0.05)，見圖6。表明miR-103a-3p可負(fù)向調(diào)控靶基因CEMIP表達(dá)。

圖5 CEMIP的3′UTR中含有與miR-103a-3p互補(bǔ)的核苷酸序列

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)

1～4：miR-con組，miR-103a-3p組，anti-miR-con組，anti-miR-103a-3p組圖6 Western印跡檢測(cè)各組CEMIP表達(dá)水平

2.5沉默CEMIP抑制人肺癌細(xì)胞A549增殖和誘導(dǎo)凋亡 轉(zhuǎn)染si-CEMIP后肺癌A549細(xì)胞CEMIP的蛋白表達(dá)水平較si-con組顯著降低(P<0.05)，表明成功干擾肺癌A549細(xì)胞CEMIP的高表達(dá)。沉默CEMIP后肺癌A549細(xì)胞增殖活性顯著降低(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.05)，CDK4、CyclinD1、Bcl-2表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.05)，Bax表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05)，見圖7、表5。表明沉默CEMIP可通過下調(diào)CDK4、CyclinD1、Bcl-2表達(dá)及上調(diào)Bax表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡并抑制細(xì)胞增殖。

表5 沉默CEMIP抑制人肺癌細(xì)胞A549增殖和誘導(dǎo)凋亡

2.6CEMIP過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了上調(diào)miR-103a-3p抑制人肺癌細(xì)胞A549增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用 與miR-103a-3p+pcDNA組比較，miR-103a-3p+pcDNA-CEMIP組肺癌A549 48 h后細(xì)胞增殖活性顯著增強(qiáng)(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率顯著降低(P<0.05)，CDK4、CyclinD1、Bcl-2表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05)，Bax表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.05)，見表6、圖8。表明CEMIP過表達(dá)可逆轉(zhuǎn)miR-103a-3p過表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的抑制作用及凋亡的促進(jìn)作用。

1，2：si-con組，si-CEMIP組圖7 Western印跡檢測(cè)人肺癌細(xì)胞A549增殖相關(guān)蛋白表達(dá)

表6 CEMIP過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了上調(diào)miR-103a-3p抑制人肺癌細(xì)胞A549增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用

1，2：miR-103a-3p+pcNDA組，miR-103a-3p+pcNDA-CEMIP組圖8 檢測(cè)人肺癌細(xì)胞A549中CEMIP、CDK4、CyclinD1、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)

3 討 論

肺癌是一種呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，已嚴(yán)重影響人類生命安全，但肺癌發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明〔9〕。miRNA作為單鏈非編碼RNA分子，其在動(dòng)植物、細(xì)菌等微生物基因組內(nèi)廣泛存在，并可通過調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)而發(fā)揮促進(jìn)或抑制疾病進(jìn)展作用〔10〕。已有研究表明部分miRNA表達(dá)異常與肺癌發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)〔11〕。但仍有部分miRNA與肺癌發(fā)病機(jī)制的關(guān)系尚未完全闡明，因此需進(jìn)一步探討miRNA表達(dá)與肺癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系為進(jìn)一步闡明肺癌發(fā)病機(jī)制及提高臨床治療效果提供一定依據(jù)。

miR-103a-3p在肝癌細(xì)胞中呈低表達(dá)，miR-103a-3p過表達(dá)后可能通過靶向調(diào)控鋅指蛋白(FEZF)1/細(xì)胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)表達(dá)進(jìn)而明顯抑制肝癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯于G0/G1期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡〔12〕。乳腺癌組織及細(xì)胞中miR-103a-3p的表達(dá)水平明顯降低，上調(diào)miR-103a-3p表達(dá)可通過抑制PDK4表達(dá)而降低細(xì)胞糖酵解水平進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖〔13〕。但相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)miR-103a-3p在胰腺癌細(xì)胞中表達(dá)水平升高，抑制miR-103a-3p表達(dá)可抑制癌細(xì)胞增殖，同時(shí)另有研究報(bào)道指出miR-103a-3p在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)并可通過激活Wnt信號(hào)通路進(jìn)而促進(jìn)癌癥進(jìn)展〔14,15〕。以上研究結(jié)果表明miR-103a-3p在不同組織中表達(dá)方式不同，可能發(fā)揮促癌作用，又可發(fā)揮抑癌基因作用，從而調(diào)控腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程。已有研究表明miR-103a-3p在肺癌組織中表達(dá)水平降低，并可抑制肺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲〔16〕。本研究結(jié)果說明miR-103a-3p在肺癌發(fā)生過程中可能發(fā)揮抑癌基因作用；miR-103a-3p過表達(dá)可抑制肺癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡進(jìn)而減緩肺癌惡性進(jìn)展過程。細(xì)胞周期異常是引發(fā)腫瘤的重要原因之一，CDK4與CyclinD1是調(diào)控細(xì)胞周期的重要因子，CyclinD1過度表達(dá)而促使其與CDK4結(jié)合形成復(fù)合物增多，誘導(dǎo)細(xì)胞周期進(jìn)入G1/S期刺激細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)而促使細(xì)胞周期異?！?7〕。本研究結(jié)果說明miR-103a-3p過表達(dá)可通過降低CDK4、CyclinD1表達(dá)而誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯于G0/G1期進(jìn)而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。提示miR-103a-3p可通過影響細(xì)胞周期調(diào)控因子表達(dá)而抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖失衡是誘導(dǎo)腫瘤進(jìn)展的重要原因之一，Bcl-2與Bax在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用，抑制Bcl-2表達(dá)而上調(diào)Bax表達(dá)可誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡〔18,19〕。本研究結(jié)果提示miR-103a-3p可通過上調(diào)Bax表達(dá)及下調(diào)Bcl-2表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡。

CEMIP在結(jié)直腸癌中表達(dá)水平升高，長(zhǎng)鏈非編碼RNA CASC19可通過調(diào)控miR-140-5p/CEMIP軸進(jìn)而調(diào)控結(jié)直腸癌進(jìn)展過程〔20〕。CEMIP過表達(dá)可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞遷移及侵襲進(jìn)而其惡性發(fā)展進(jìn)程〔21〕。沉默CEMIP可通過抑制Wnt /β-連環(huán)蛋白/Snail信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及抑制EMT轉(zhuǎn)換進(jìn)程進(jìn)而抑制結(jié)腸直腸癌發(fā)展〔22,23〕。本研究結(jié)果表明不同肺癌細(xì)胞系中CEMIP的表達(dá)水平較正常肺上皮細(xì)胞明顯升高，提示CEMIP在肺癌生過程中可能發(fā)揮促癌作用；沉默CEMIP表達(dá)后可通過下調(diào)CDK4、CyclinD1、Bcl-2表達(dá)及上調(diào)Bax表達(dá)進(jìn)而抑制肺癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡；miR-103a-3p可通過抑制CEMIP表達(dá)及調(diào)控肺癌細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)而抑制肺癌發(fā)生及發(fā)展過程。