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    美膚散對(duì)黃褐斑模型小鼠SOD、MDA、TYR、LF和黑色素細(xì)胞的影響

    2021-12-08 11:15:54王彩霞
    中國(guó)老年學(xué)雜志 2021年23期
    關(guān)鍵詞:美膚黃褐斑黑色素

    王彩霞

    (寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,寧夏 銀川 750004)

    黃褐斑又稱“肝斑”“黧黑斑”,是一種好發(fā)于女性顏面部且治療困難的色素增多性皮膚病〔1〕。皮損為黃褐色或深褐色斑片,常對(duì)稱分布于面頰部、顴部,呈蝴蝶形,或累及口、鼻、前額和頦部呈不規(guī)則形狀〔2〕。本病病程長(zhǎng),病情頑固,屬難治性皮膚病,對(duì)患者生理、心理、精神等方面造成嚴(yán)重影響〔3〕。其主要致病因素為內(nèi)分泌紊亂、日曬、情緒、遺傳、化妝品及長(zhǎng)期口服避孕藥等,其他危險(xiǎn)因素包括甲狀腺疾病、光毒性藥物、抗癲癇藥物等〔4〕。美膚散為自擬方是寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬回醫(yī)(中醫(yī))院中醫(yī)美容科外敷治療黃褐斑的經(jīng)驗(yàn)用方,臨床應(yīng)用療效顯著。本研究主要探討美膚散對(duì)黃褐斑的治療作用及機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1藥物 美膚散組成為丹參、當(dāng)歸、白附子、僵蠶、黃芪等(均由寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬回醫(yī)中醫(yī)院中藥房提供)。將上述中藥材清洗干凈,烘干后按照重量配比混合在一起,然后將混合的中草藥研磨成粉末,并將粉末過(guò)150~300目篩,收集過(guò)篩后的粉末并攪拌均勻,再用鈷60照射滅菌,得到美膚散中藥面膜粉,將其密封保存待用。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)將美膚散用市售純牛奶調(diào)配成1.2 g/ml美膚散混懸液,供小鼠外敷使用。黃體酮注射液:每支10 mg/ml(山西晉新雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司),維生素C注射液(徐州萊恩藥業(yè)有限公司),濃度:0.5 g/2 ml。

    1.2動(dòng)物 C57BL/6J小鼠40只,清潔級(jí),雌性,體重(20±2)g,均由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

    1.3試劑 超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脂褐質(zhì)(LF)、考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒(均購(gòu)于南京建成生物工程研究所),酪氨酸酶(TYR)測(cè)定試劑盒(由南京建成生物工程有限公司代購(gòu))。鼠抗人單克隆抗體HMB45即用型試劑盒(購(gòu)于福建邁新公司)。

    1.4儀器 EB-160/FE紫外燈(美國(guó)spectronics公司),DY89-Ⅱ電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(上海將來(lái)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司),DK-420S型三用恒溫水箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司),TDL-5-A型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠),F(xiàn)L45熒光分光光度計(jì)(美國(guó)PE公司),722分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠),ELx808全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)佰騰)。

    1.5動(dòng)物分組與造模 將小鼠按數(shù)字分組法分為空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(維生素C組)、美膚散組,每組10只。采用黃體酮注射液聯(lián)合中波紫外線照射的方法進(jìn)行造模。實(shí)驗(yàn)前24 h,各組小鼠均用8%硫化鈉(Na2S)水溶液脫去小鼠背部短毛(面積約2.0 cm×2.0 cm),脫毛后用溫水清洗干凈,實(shí)驗(yàn)期間每周脫毛1次。除空白組外,其余各組均以波長(zhǎng)為280~320 nm的中波紫外線(UVB)每日照射小鼠背部皮膚1次,照射時(shí)間為1 h,光源距離小鼠20 cm,連續(xù)照射30 d。同時(shí),除空白組外,其余各組均肌肉注射黃體酮注射液20 mg/(kg·d),而空白組肌肉注射滅菌注射用水2 ml/(kg·d)。各組均注射于小鼠大腿根部,每日1次,兩腿交替進(jìn)行,連續(xù)30 d。

    1.6給藥方法 造模同時(shí),美膚散組外敷美膚散混懸液,陽(yáng)性對(duì)照組外涂維生素C水溶液,空白組及模型組外涂滅菌注射用水。以上治療每日1次,每次30 min,連續(xù)給藥30 d。

    1.7生化指標(biāo)檢測(cè) 于第30天末次給藥2 h后將所有小鼠斷頸處死,迅速取其經(jīng)紫外線照射部位皮膚0.5 g左右,冰浴中制成10%組織勻漿,再將10%勻漿離心,取上清液,并嚴(yán)格按照試劑盒提供的方法,測(cè)定皮膚和肝臟組織中SOD活性及MDA、酪氨酸酶(TYR)、LF水平。

    1.8皮膚黑色素細(xì)胞的病理形態(tài)學(xué)觀察 分別取小鼠照射部位皮膚組織1塊(1 cm×1 cm),用10%甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋切片后,再經(jīng)脫蠟至水、抗原修復(fù),用HMB45(黑素瘤)為第一抗體,采用免疫組化技術(shù)顯示表皮中的黑素顆粒,觀察黑色素細(xì)胞在表皮中的分布及分泌功能情況。

    1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

    2 結(jié) 果

    2.1美膚散皮膚組織中黑色素細(xì)胞數(shù)、TYR、MDA、LF及 SOD 活性的影響 與空白組比較,模型組皮膚組織中黑色素細(xì)胞數(shù)目、TYR、MDA及LF含量均顯著增加,SOD顯著降低(P<0.01),提示造模成功;與模型組比較,美膚散組明顯減少黑色素細(xì)胞數(shù)目,明顯降低皮膚中TYR、MDA及LF含量(P<0.01),同時(shí)提高皮膚中 SOD 活性(P<0.05),見(jiàn)表1。

    表1 各組黑色素細(xì)胞數(shù)、TYR、MDA、LF含量及SOD活性的影響

    2.2美膚散對(duì)黃褐斑肝臟組織中TYR、MDA、LF及 SOD 活性的影響 與空白組比較,模型組小鼠肝臟組織中TYR、MDA及LF含量均顯著增加;SOD顯著降低(P<0.001);與模型組比較,美膚散組明顯降低皮膚中TYR、MDA及LF含量(P<0.01),同時(shí)顯著提高皮膚中 SOD 活性(P<0.05),見(jiàn)表1。

    3 討 論

    黃褐斑是一種臨床上常見(jiàn)的慢性面部色素代謝障礙性皮膚病〔5〕。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為,黃褐斑是由人體黑色素生成異常導(dǎo)致,其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,可能的相關(guān)因素也較多,目前認(rèn)為人體內(nèi)分泌失調(diào)、紫外線照射、遺傳因素是其主要因素〔4〕。而氧化與抗氧化之間的平衡失調(diào),是黃褐斑公認(rèn)的主要誘因〔6〕。當(dāng)機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化增強(qiáng),氧自由基生成過(guò)量時(shí),體內(nèi)的SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)等抗氧化物質(zhì)就會(huì)增加,從而清除多余的氧自由基,使機(jī)體內(nèi)氧化與抗氧化處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)〔7〕。黃褐斑患者體內(nèi)氧化應(yīng)激系統(tǒng)大多出現(xiàn)障礙,氧自由基生成過(guò)多和抗氧化酶活性降低均可造成生物膜的脂質(zhì)過(guò)氧化,使膜的結(jié)構(gòu)和功能受損而引發(fā)黃褐斑〔8〕。因此,抗氧化也是黃褐斑治療的重要機(jī)制之一。

    黑色素生成過(guò)多是黃褐斑形成的根本原因〔4〕。黑色素主要由人體皮膚表皮基底層的黑色素細(xì)胞產(chǎn)生,其含量和分布決定了皮膚的顏色〔9〕。但黑色素在基底層的異常蓄積會(huì)造成色素沉著過(guò)度從而引起黃褐斑、雀斑和老年斑等,嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量〔10〕。研究表明,TYR在黑色素生物合成中扮演著重要角色,它是一種含銅的多酚氧化酶,廣泛存在于微生物、動(dòng)植物及人體中,是酪氨酸和多巴向黑色素轉(zhuǎn)變過(guò)程中的關(guān)鍵酶、限速酶,它的活性大小決定著黑色素合成的數(shù)量〔11,12〕。因此,通過(guò)抑制TYR活性,即可阻斷黑色素生物合成反應(yīng)鏈,有效防止黑色素的過(guò)度沉積,從而起到抑制黃褐斑的作用〔13,14〕。

    美膚散為自擬方,是根據(jù)黃褐斑的皮損特點(diǎn),選用具有活血養(yǎng)血、祛斑化瘀、美容養(yǎng)顏、補(bǔ)血消斑功效的中藥組成的復(fù)方。本方由丹參、當(dāng)歸、白附子、僵蠶、黃芪等中藥組成。其中丹參活血祛瘀,養(yǎng)血涼血〔15〕;當(dāng)歸養(yǎng)血活血,潤(rùn)澤亮膚〔16〕;白附子解毒散結(jié),增白淡斑〔17〕。僵蠶疏風(fēng)散熱,駐顏祛斑;黃芪補(bǔ)氣益血,美白潤(rùn)膚〔18〕。將上述藥物打磨配置后應(yīng)用于黃褐斑患者,療效顯著。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,美膚散局部外敷可降低黃褐斑模型小鼠皮膚和肝臟組織中TYR、MDA及LF含量,增強(qiáng)SOD活性,同時(shí)可以明顯減少黃褐斑小鼠皮膚組織中黑色素細(xì)胞數(shù)目。提示美膚散對(duì)黃褐斑模型小鼠具有較好的治療作用,其作用機(jī)制可能與抑制黑色素細(xì)胞的增殖和TYR的活性,增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力有關(guān)。

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