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    瘧疾快速免疫診斷技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展

    2021-12-08 13:36:46王敬軍
    黑龍江醫(yī)藥 2021年6期
    關(guān)鍵詞:瘧原蟲(chóng)試紙瘧疾

    王敬軍

    天津市薊州區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,天津 301900

    瘧疾是因瘧原蟲(chóng)感染引起的蟲(chóng)媒傳染病,主要以蚊蟲(chóng)叮咬為媒介,或輸入攜帶瘧原蟲(chóng)者血液所致[1]。瘧疾呈周期性、反復(fù)發(fā)作,發(fā)作期間易導(dǎo)致水電解質(zhì)紊亂、微循環(huán)及血循環(huán)異常,持續(xù)反復(fù)發(fā)作則會(huì)導(dǎo)致貧血、脾腫大等,威脅患者生命安全。臨床需及時(shí)診斷,以盡早采取治療,做好防疫,避免瘧疾大范圍感染。瘧疾的臨床診斷包括表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、分子生物技術(shù)等多種方法,各有其優(yōu)勢(shì)??焖倜庖咴\斷技術(shù)用于診斷寄生蟲(chóng)感染的常用方法,具有快速、簡(jiǎn)便等多種優(yōu)勢(shì)[2]。本文就瘧疾的常規(guī)診斷方法及快速免疫診斷技術(shù)的應(yīng)用展開(kāi)一一敘述。

    1 常規(guī)診斷方法

    1.1 臨床表現(xiàn)

    從人體感染瘧原蟲(chóng)開(kāi)始主要分為潛伏期、發(fā)冷期、發(fā)熱期、出汗期四個(gè)階段。潛伏期是感染至發(fā)病時(shí)間,與感染瘧原蟲(chóng)類型及感染途徑相關(guān);發(fā)冷期先是四肢末端發(fā)涼,之后迅覺(jué)背部、全身發(fā)冷,可持續(xù)10 min,甚至1 h;寒戰(zhàn)停止后進(jìn)入發(fā)熱期,且寒戰(zhàn)程度越重,體溫越高,甚者可達(dá)到40℃,且持續(xù)數(shù)小時(shí),嚴(yán)重者劇烈頭痛、頑固性嘔吐,甚至抽搐或不省人事;發(fā)熱后期全身出汗,持續(xù)2~3 h體溫降至正常,精神輕快,進(jìn)入間歇期,患者可正常生活與工作[3-4]。因瘧疾臨床表現(xiàn)具有周圍性,臨床可根據(jù)患者表現(xiàn)做出初步診斷。但寒戰(zhàn)、發(fā)熱、出汗等表現(xiàn)為非典型癥狀,與傷寒、血吸蟲(chóng)病等癥狀相似,特異性較差,臨床需聯(lián)合其他方法明確診斷。

    1.2 鏡檢法

    鏡檢法則是采集患者外周血,制作長(zhǎng)厚和薄血膜血片,經(jīng)溶血染色處理后在顯微鏡下直接觀察是否含有瘧原蟲(chóng),進(jìn)而得到診斷結(jié)果[5]。鏡檢法在瘧疾診斷中應(yīng)用時(shí)間較長(zhǎng),也是唯一可鑒別瘧原蟲(chóng)類型的檢測(cè)技術(shù),是瘧疾診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。但鏡檢法對(duì)操作、染色、臨床經(jīng)驗(yàn)等要求較高,在基層實(shí)際應(yīng)用中受限,且費(fèi)時(shí)費(fèi)工,難以達(dá)到快速檢驗(yàn)效果[6]。

    1.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)

    PCR是一種核酸擴(kuò)增技術(shù),可提高反復(fù)擴(kuò)增瘧原蟲(chóng)特異性基因片段,并增強(qiáng)分析信號(hào),以擴(kuò)增DNA片段,以便于臨床檢出,在瘧疾診斷中具有較高的敏感性及特異性,且能夠預(yù)防樣品污染,減少操作過(guò)程中DNA的降解及喪失[7-8]。但該技術(shù)對(duì)操作水平及實(shí)驗(yàn)條件要求高,成本投入也較大,臨床難以推廣應(yīng)用。

    2 快速免疫診斷技術(shù)

    免疫診斷是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)、理論、方法測(cè)定免疫狀態(tài)、診斷各類疾病的技術(shù),免疫診斷試劑盒廣泛應(yīng)用于醫(yī)院、體檢中心、血站等多種醫(yī)療服務(wù)機(jī)構(gòu),在疾病篩查診斷中應(yīng)用價(jià)值高。免疫診斷試劑在診斷試劑盒中品種最多,廣泛應(yīng)用于醫(yī)院、血站、體檢中心。目前所用的瘧疾快速免疫診斷技術(shù)為免疫膠體金技術(shù)(ICS),是一種以膠體金為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的新型免疫標(biāo)記技術(shù),無(wú)需進(jìn)行標(biāo)記物結(jié)合及自由標(biāo)記物分離,避免加樣、洗滌等繁瑣步驟,臨床操作快速、簡(jiǎn)便,無(wú)需特殊儀器及培訓(xùn),利于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)[9]。

    2.1 分子基礎(chǔ)

    ICS及時(shí)在瘧疾中的快速診斷主要為抗原檢測(cè),其中主要靶抗原為瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白-Ⅱ(HRP-Ⅱ)、瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶(pLDH)和瘧原蟲(chóng)谷氨酸脫氫酶(pGDH)。HRP-Ⅱ是瘧原蟲(chóng)消化血紅蛋白的產(chǎn)物,屬于血溶性抗原,包含大量組氨酸,在瘧疾患者血、尿中均可檢出,在惡性瘧疾及日瘧診斷中特異性高[10]。pLDH為瘧原蟲(chóng)體內(nèi)代謝酶,pGDH是瘧原蟲(chóng)生成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的代謝物,均具有種屬特異性,其酶催化作用、免疫化學(xué)特點(diǎn)、理化特點(diǎn)等與人體其他生物組織差異大,在瘧疾診斷中特異性高[11]。同時(shí),人體紅細(xì)胞內(nèi)無(wú)谷氨酸脫氫酶(GDH),故pGDH可作為瘧原蟲(chóng)感染標(biāo)志物,也是瘧疾藥物治療的靶酶。

    2.2 臨床應(yīng)用

    隨著瘧疾快速免疫診斷技術(shù)的發(fā)展,瘧疾快速診斷試紙(RDT)大量應(yīng)用于瘧疾診斷中,檢測(cè)時(shí)無(wú)需其他特殊設(shè)備、試劑等,根據(jù)說(shuō)明書(shū)操作即可在短時(shí)間內(nèi)得到診斷結(jié)果,易掌握,診斷結(jié)果特異性高,且較為直觀、快速。李明等[12]研究發(fā)現(xiàn),瘧原蟲(chóng)快速診斷試紙(RDT)在瘧疾診斷中的敏感性遠(yuǎn)高于鏡檢法及巢式PCR。同時(shí),試劑盒穩(wěn)定性高,易于攜帶,適用于基層醫(yī)院及現(xiàn)場(chǎng)診斷,推廣價(jià)值高。金嘉杰等[13]調(diào)查發(fā)現(xiàn),RDT試紙廣泛應(yīng)用于江蘇基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)。進(jìn)一步證明瘧疾快速免疫診斷技術(shù)在基層醫(yī)院的推廣應(yīng)用價(jià)值。但錢穩(wěn)吉等[14]調(diào)查發(fā)現(xiàn),RDT試紙?jiān)诨鶎优R床醫(yī)師中的使用評(píng)價(jià)低于疾控人員及檢驗(yàn)人員,臨床需對(duì)基層醫(yī)療人員進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)指導(dǎo),以確保RDT試紙的規(guī)范使用。

    2.3 局限性

    快速免疫診斷技術(shù)雖具有快速、簡(jiǎn)便、直觀等多種優(yōu)點(diǎn),但鏡檢法仍是目前診斷瘧疾的金標(biāo)準(zhǔn)。現(xiàn)階段臨床應(yīng)用的各種RDT試紙是針對(duì)日瘧和惡性瘧的指導(dǎo),難以有效鑒別卵形瘧、三日瘧、未知瘧[15]。同時(shí),不同類型RDT試紙?zhí)禺愋?、靈敏性不同,HRP-Ⅱ的基因多態(tài)性也會(huì)對(duì)RDT試紙檢測(cè)結(jié)果造成影響,且若患者伴有免疫系統(tǒng)疾病也會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。因此,臨床在檢測(cè)難以明確的瘧疾時(shí)需聯(lián)合其他檢測(cè)方法,以提高瘧疾診斷準(zhǔn)確性。莫嘉延等[16]研究發(fā)現(xiàn),在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)中采取RDT與鏡檢串聯(lián)檢驗(yàn)結(jié)果更加可靠,特異度、靈敏度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均高于RDT與鏡檢單獨(dú)檢測(cè),使用范圍更加廣泛。

    3 小結(jié)

    瘧疾作為蟲(chóng)媒傳染病,發(fā)病率及死亡率均逐年降低,但境外輸入病例仍持續(xù)發(fā)生,臨床不可忽視瘧疾的防控。瘧疾快速免疫診斷技術(shù)是基礎(chǔ)醫(yī)療機(jī)構(gòu)瘧疾篩查診斷的常用方法,具有快速、簡(jiǎn)便、直觀、可靠等多種優(yōu)點(diǎn)。但該技術(shù)仍有一定假陽(yáng)性、假陰性的發(fā)生,且難以有效鑒別瘧原蟲(chóng)類型,臨床需聯(lián)合鏡檢等技術(shù),以明確診斷。同時(shí),目前進(jìn)口試劑盒在一定程度上限制瘧疾快速免疫診斷技術(shù)的推廣,臨床還需加強(qiáng)相關(guān)試劑盒的研發(fā),以進(jìn)一步降低試劑盒價(jià)格,推動(dòng)瘧疾快速免疫診斷技術(shù)發(fā)展及基層推廣。

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