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    火龍果莖多糖提取方法比較

    2021-12-08 08:54:56李國勝白新鵬
    熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年11期
    關(guān)鍵詞:液料火龍果熱水

    李國勝 白新鵬

    (海南大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院/熱帶多糖資源利用教育部工程研究中心 海南海口 570228)

    火龍果屬仙人掌科(Cactaceae)多年生攀緣植物,又名紅龍果、青龍果、仙蜜果等[1]?;瘕埞o富含多種礦物質(zhì)、植物甾醇、植物多糖、維生素E 以及黃酮類化合物等[2],果莖中膳食纖維、黃酮類化合物含量豐富,是保健食品的重要加工原料。在多種化學(xué)成分中植物多糖的含量較高,達(dá)到7%左右[3]?;瘕埞o具有生長迅速、分枝能力較強(qiáng)等特點(diǎn),在火龍果種植過程中,為加快其生長并保持果實(shí)品質(zhì),一般僅保留一條主莖,需要不斷修剪分枝,產(chǎn)生了大量廢莖,可以作為火龍果莖多糖提取資源,變廢為寶[4]。

    多糖的提取方法主要有內(nèi)部沸騰法、酶提法、微波輔助法、超聲波輔助法、熱水浸提法及超高壓提取法等[5-8]。熱水提取法相比其它方法更簡便快捷、提取率高,為工業(yè)化提取火龍果莖多糖提供了新途徑[9]。馬若影等[10]研究表明,利用亞臨界水提取法來進(jìn)行實(shí)驗(yàn),最佳提取條件為提取溫度140℃,提取時間25 min,料液比1∶50(g/mL)。超聲波輔助法的原理是對植物細(xì)胞壁造成破壞,主要是采用機(jī)械效應(yīng)以及超聲波的空化對植物的細(xì)胞壁造成影響,這樣可以使細(xì)胞內(nèi)活性物質(zhì)的溶出效率大大提升,進(jìn)而可以加快提取的速度[11]。目前我國對火龍果莖的研究報(bào)道比較少,火龍果莖加工產(chǎn)業(yè)幾乎還處于空白階段,因此火龍果莖的開發(fā)前景非常廣闊。該研究以火龍果莖為原材料,分別使用熱水提取法、亞臨界水提取法及超聲波輔助法來提取火龍果莖多糖,并對影響多糖提取率的各種因素進(jìn)行相關(guān)分析;同時對不同方法制得的多糖樣品進(jìn)行色澤、中性糖含量、紅外光譜等理化指標(biāo)對比,綜合比較3種方法制取多糖的優(yōu)劣,為火龍果莖的綜合開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試材

    紅心火龍果莖由海南省東方市北緯十八度果業(yè)有限公司于2019年6月提供。

    1.1.2 試劑

    葡萄糖(A.R.)、濃硫酸(A.R.)、苯酚(A.R.)、鹽酸(A.R.)、廣州化學(xué)試劑廠,無水乙醇(A.R.)西隴科學(xué)股份有限公司。

    1.1.3 儀器

    FDU-2100 型冷凍干燥機(jī)(上海愛朗儀器有限公司),F(xiàn)W-177 型中草藥粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司),GL-20G-Ⅱ型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠),HT-250FC型亞臨界水提取裝置(上海霍桐實(shí)驗(yàn)儀器有限公司),752-N 型可見紫外分光光度計(jì)(上海精密儀器科學(xué)有限公司),EV-321 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(北京萊伯泰科儀器股份有限公司),KQ-800KDE 超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 提取方法

    1.2.1.1 熱水提取法

    將火龍果莖粉碎,過40目篩,得到固體粉末,稱量2 g 加入提取瓶,混合一定比例蒸餾水并攪拌,熱水提取一定時間,離心取上清液濃縮,醇沉,離心分離,冷凍干燥得多糖粗品。

    1.2.1.2 亞臨界水提取法

    火龍果莖干燥后粉碎,濕潤吸水,加適量水并調(diào)節(jié)pH,在一定溫度和時間下進(jìn)行提取,提取液離心分離,取上清液濃縮,醇沉靜置24 h,離心分離,冷凍干燥得粗多糖。

    1.2.1.3 超聲輔助提取法

    將紅心火龍果莖粉碎、過40目篩、得到粉末,稱量2 g,加入蒸餾水,均勻攪拌,進(jìn)行超聲輔助提取,超聲處理考慮條件為:超聲時間、處理功率、提取溫度、料液比。離心,濃縮,混合乙醇(95%),低溫240 min 進(jìn)行醇沉。離心分離,洗滌,冷凍干燥,得多糖粗品。

    1.2.2 火龍果莖多糖的測定

    準(zhǔn)備火龍果莖多糖5 mg,加水定容到50 mL,該溶液的濃度為0.1 mg/mL,然后對其進(jìn)行吸光度的測定,利用葡萄糖溶液獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線,再代入吸光度計(jì)算得到火龍果莖多糖的含量。

    火龍果莖多糖提取率=[(C×V)/W]×100%

    式中,C為樣品溶液中多糖濃度(mg/mL),V為樣品溶液體積(mL),W為火龍果莖粉質(zhì)量(mg)。

    1.2.3 色澤判定

    肉眼觀察,對色澤進(jìn)行描述并記錄。

    1.2.4 中性糖含量測定

    用硫酸-苯酚法[11]得到多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=48.557 1X+0.006 1,R2=0.993 7。移取 2 mg/mL多糖供試液10 mL,加入5 mL 5%十六烷基三甲基溴化銨溶液,攪拌均勻后,40℃靜置5 h,離心,取上清液定容到50 mL,得到中性多糖供試液。準(zhǔn)確量取0.1 mL 中性多糖供試液,混合1.0 mL 5.0%苯酚溶液,緩慢加入5.0 mL 濃硫酸,混勻,沸水浴15 min左右,靜置至室溫,在490 nm最大吸收峰處測定其吸光度,得出含量。

    1.2.5 紅外光譜分析

    取用不同方法制得的干燥火龍果莖多糖樣品約2 mg與溴化鉀粉末約200 mg,于瑪瑙研缽中,在干燥的情況下混勻,研磨均勻后置于壓片機(jī)內(nèi)壓制成片,采用傅里葉光譜儀TENSOR27 對多糖組分進(jìn)行分析。使樣品在4 000~400 cm-1波長內(nèi)進(jìn)行掃描,得到紅外光譜圖。

    1.2.6 數(shù)據(jù)分析

    采用Excel 2010 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和作圖,所有試驗(yàn)重復(fù)3 次,取平均值。并使用Omnic 8.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與整理。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 熱水提取法

    2.1.1 提取溫度

    將液料比設(shè)置為25∶1(mL/g),加熱的時間為3 h,分別放置于75、80、85、90℃下進(jìn)行提取。提取率如圖1 所示。由圖1 可知,隨著溫度的提高,多糖提取率先大幅增加,而后緩慢下降。由此可知,當(dāng)提取溫度80℃時,多糖的提取率達(dá)到最大值2.78%。

    圖1 提取溫度與提取率的關(guān)系

    2.1.2 提取時間

    液料比設(shè)定為 25∶1 (mL/g),提取溫度為80℃,然后設(shè)定提取時間分別為0.5、1、2 和3 h,由此觀察提取時間對提取率的影響,從而確定最佳的提取時間,結(jié)果詳見圖2。由圖2 可知,當(dāng)溫度不變時,隨著提取時間的延長,提取率逐漸提高,1~2 h 提取率增加的速度最快,由1.4%提高到2.99%,而2~3 h 提取率緩慢上升,在3 h 時達(dá)到最大值3.11%,綜合考慮時間成本,選擇最佳提取時間為3 h。

    圖2 提取時間與提取率的關(guān)系

    2.1.3 液料比

    提取時間3 h,溫度80℃的條件下,分別以15∶1、20∶1、25∶1 及30∶1(mL/g)進(jìn)行液料的比例設(shè)置。從圖3可以看出,隨著液料比的增加,在15∶1~25∶1(mL/g),曲線呈現(xiàn)上升趨勢,說明火龍果莖多糖的提取率在此范圍內(nèi)逐漸增加,而后提取率下降。因此最佳液料比例為25∶1(mL/g),此時提取率最高,達(dá)4.12%。

    圖3 液料比與提取率的關(guān)系

    根據(jù)上述單因素試驗(yàn),使用熱水提取法時,提取最佳條件為3 h、80℃、液料比例25∶1(mL/g),提取率達(dá)到最高為4.12%。

    2.2 亞臨界水提取法

    2.2.1 提取時間

    固定料液比為1∶40(g/mL)、140℃、pH 5,分析不同提取時間對提取率的影響,得到最優(yōu)提取時間,結(jié)果如圖4。由圖4 可看出,最適的提取時間是25 min,此時提取率達(dá)到20.53%。而提取時間更久反而得率下降,原因可能是隨著提取時間的增加,導(dǎo)致細(xì)胞破碎度逐漸增大,過多碎片阻礙多糖溶出,導(dǎo)致提取率下降[12]。

    圖4 提取時間與提取率的關(guān)系

    2.2.2 提取溫度

    當(dāng)條件為1∶40(g/mL)、pH 5、25 min,提取溫度分別160、140、120、110℃,分析在不同溫度對提取率的影響,結(jié)果如圖5。由圖5 可知,在110~140℃,多糖提取率隨提取溫度升高而明顯增加,當(dāng)溫度為140℃時,多糖提取率達(dá)到最大20.53%。但當(dāng)溫度達(dá)到160℃時,多糖提取率下降,這說明適當(dāng)?shù)纳邷囟瓤商岣叨嗵翘崛÷剩沁^高的溫度可通過褐變反應(yīng)致使多糖降解[13]。所以,最佳提取溫度為140℃。

    圖5 提取溫度與提取率的關(guān)系

    2.2.3 液料比

    固定條件為140℃、pH 5、25 min,液料比例為50∶1、40∶1、30∶1、20∶1(mL/g) 時,對多糖提取率的影響,結(jié)果如圖6 所示。從圖6 可知,多糖提取率隨著液料比的增加先提高后降低,在液料比為40∶1(mL/g)時,提取率達(dá)到了20.53%的峰值,這可能是因?yàn)橐毫媳鹊脑黾涌梢约铀偃ルx子水向細(xì)胞中擴(kuò)散并增強(qiáng)其對多糖的吸附性[14]。隨著液料比的繼續(xù)增加,多糖提取率下降,過量的去離子水會使多糖溶解達(dá)到飽和狀態(tài),導(dǎo)致提取率降低[15]。所以,選擇液料比40∶1(mL/g) 為最佳條件。

    圖6 液料比與提取率的關(guān)系

    2.2.4 pH

    當(dāng)液料比為1∶40(g/mL),提取溫度140℃,提取時間25 min,探究不同pH 對提取率的影響,結(jié)果見圖7。從圖7 可以看出,pH 5 時,提取率達(dá)到最大值。當(dāng)pH 持續(xù)增加時,提取率有所下降。因此選擇pH 5為最適條件。

    圖7 pH值與提取率的關(guān)系

    采用亞臨界水提取法,以提取時間、提取溫度、液料比以及pH 值作為影響因素,最優(yōu)工藝為提取時間25 min、提取溫度140℃、液料比例40∶1(mL/g)、pH 5時,提取率達(dá)到最佳20.53%。

    2.3 超聲輔助提取法

    2.3.1 超聲時間

    將條件固定為60℃、1∶20(g/mL)、240 W,超聲時間分別為4、9、14、19 min,分析不同超聲時間對提取率的影響,結(jié)果見圖8。從圖8 可知,當(dāng)提取時間為9 min時,提取率最高為2.18%。

    圖8 提取時間與提取率的關(guān)系

    2.3.2 液料比

    將條件固定為60℃,240 W、9 min,探究不同液料比對提取率造成的影響,結(jié)果見圖9。從圖9可以看出,多糖提取率隨著液料比的增加呈先升后降的趨勢,液料比為20∶1(mL/g)時,提取率達(dá)到最大值。因此,選用的液料比為20∶1(mL/g)。

    圖9 液料比與提取率的關(guān)系

    2.3.3 提取功率

    將超聲溫度固定在60℃,料液比1∶20(g/mL),超聲時間9 min,分析不同超聲功率下,提取率的變化,結(jié)果見圖10。由圖10 可知,當(dāng)超聲功率為240 W時,火龍果莖多糖的提取率達(dá)最高為2.18%。當(dāng)超聲時間一定時,超聲功率越大,機(jī)械剪切和空化作用越強(qiáng),多糖提取量逐漸增加,但當(dāng)功率過大易導(dǎo)致糖苷鍵的斷裂,從而使多糖提取率降低[16]。因此,選用最佳超聲功率為240 W。

    圖10 超聲功率與提取率的關(guān)系

    2.3.4 提取溫度

    將液料比固定為20∶1(mL/g),超聲功率240 W,超聲時間9 min,對不同超聲溫度下的提取率進(jìn)行比較分析,結(jié)果見圖11。由圖11 可知,當(dāng)提取溫度為60℃,提取率最高為2.18%。

    圖11 提取溫度與提取率的關(guān)系

    采用超聲輔助提取法,分析了4個影響因素對提取率的影響,最佳工藝為提取溫度60℃、超聲功率為240 W、液料比20∶1(mL/g)、超聲時間9 min時,提取率為2.18%。

    2.4 綜合比較

    在用不同提取方法所得多糖粗品后,對這些多糖粗品進(jìn)行初步的基礎(chǔ)性質(zhì)評定,包括顏色是否潔凈,形態(tài)是否穩(wěn)定,探究采用不同的提取方法對提取物造成的影響,結(jié)果詳見表1。根據(jù)表1可知,3 種方法獲得的提取物顏色相差不大;亞臨界水提取法的提取率最高為20.53%,中性糖的含量最高達(dá)到89.45%,超聲輔助提取法的提取率及中性糖含量最低,僅有38.50%;熱水提取法的提取率及中性糖含量介于二者中間。推測原因?yàn)闊崴崛r間過長,導(dǎo)致多糖部分溶于水中,效果較差;而超聲輔助提取受超聲波影響,部分多糖組分溶出未能被提取,且時間較短導(dǎo)致提取率較低。但亞臨界提取法存在設(shè)備要求高,耗能高等不足,難以實(shí)現(xiàn)規(guī)?;崛 ?/p>

    表1 不同提取方法所得多糖樣品的綜合比較

    2.5 紅外圖譜分析

    不同提取方法所得的多糖紅外光譜如圖12 所示。在3 412 cm-1處的強(qiáng)吸收峰是由-OH官能團(tuán)的伸縮振動引起,峰形較寬,表明多糖存在分子內(nèi)或分子間有氫鍵;烷基C-H在2 930 cm-1附近產(chǎn)生的伸縮振動吸收峰是糖類物質(zhì)的典型特征吸收峰;在1 610 cm-1附近的強(qiáng)吸收峰是由C=O 的不對稱伸縮振動引起的;在1 419~1 200 cm-1是C-H 的變形振動引起的吸收峰。1 078 cm-1處的一組強(qiáng)吸收峰是由糖環(huán)上C-O-C 的伸縮振動引起的,且該峰為吡喃環(huán)的特征吸收峰[17],說明火龍果莖多糖具有吡喃環(huán)結(jié)構(gòu);891 cm-1處的吸收峰表明火龍果莖多糖具有β-型糖苷鍵。3種粗多糖紅外光譜圖均含有典型的多糖特征吸收峰,且具有相似的紅外光譜,由此可以認(rèn)定,3種粗多糖在化學(xué)結(jié)構(gòu)上基本一致。

    圖12 火龍果莖多糖紅外光譜圖

    3 討論與結(jié)論

    火龍果莖的開發(fā)利用前景十分廣闊,除刺后,可切成片鮮食,用果汁機(jī)打碎可作冷飲或調(diào)制冰淇淋[1]。植物多糖具有多方面的生物活性,常作為保健食品的營養(yǎng)成分,火龍果莖含有豐富的營養(yǎng)成分,具有特殊的生理功能,尤其是植物性多糖的含量較高。因此,火龍果莖多糖開發(fā)利用前景廣闊[2]。熱水提取、亞臨界水提取及超聲輔助提取3種方法所得火龍果莖粗多糖的提取率分別為4.12%、20.53%和2.18%,使用亞臨界水提取法的提取率最高。但亞臨界水提取法對設(shè)備的要求較高,難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模提??;使用熱水提取法的提取率雖較低,但本方法對設(shè)備的要求不高,易于實(shí)現(xiàn),只是存在提取時間較長,消耗能源較大等缺點(diǎn);超聲輔助提取法的提取率相對較低,但這種方法耗時較短。所以,多糖的提取分離應(yīng)根據(jù)不同種類多糖的性質(zhì)選擇合適的方法,盡量避免單一方法,同時聯(lián)合應(yīng)用兩種或多種提取分離方法。3 種方法得到的粗多糖顏色相近;且經(jīng)紅外光譜分析3 種粗多糖具有相似的紅外光譜,均含有典型的多糖特征吸收峰,火龍果莖多糖具有吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)并呈現(xiàn)β-型糖苷鍵吸收峰;不同方法提取的粗多糖樣品結(jié)構(gòu)無明顯差異。該研究為有效利用火龍果莖提供了理論依據(jù)。

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