22年前命案中作案工具上DNA檢測1例

劉翠蘭，吳玉劍，李暉，黃方方，王茜，孫婧

武漢市公安司法鑒定中心，湖北 武漢 430024

1 案 例

1.1 簡要案情

1997年6月12日13：00許，外來務(wù)工人員邱某在其租住的某集貿(mào)市場鐵棚內(nèi)被人先用釘錘打擊頭部，后用菜刀多次砍其頸部致死，案件一直未能偵破。2019 年8 月23 日，辦案人員再次送檢該案作案工具釘錘及菜刀，DNA 技術(shù)人員通過對作案工具全面進(jìn)行網(wǎng)格化分區(qū)分層檢驗(yàn)，在釘錘上檢出死者邱某DNA分型，在菜刀上檢出一未知男性DNA 分型，該未知男性Y 染色體STR 分型比中外省某縣的“付”姓家系和“郭”姓家系。

1.2 DNA提取及檢驗(yàn)

送檢的釘錘斷成兩截，錘頭已經(jīng)生銹（圖1A）；菜刀有一個(gè)缺口，刀刃部分也布滿鐵銹（圖1B）。把釘錘的錘頭、錘柄劃分成30 個(gè)網(wǎng)格，把菜刀的刀刃、刀柄劃分成24 個(gè)網(wǎng)格，每個(gè)網(wǎng)格大小約3 cm×3 cm。分兩層提取，先用脫落細(xì)胞粘取器粘取上述每個(gè)網(wǎng)格的表層，均勻用力粘取約20 次，再用干濕棉簽二步擦拭每個(gè)網(wǎng)格，54個(gè)網(wǎng)格共獲取108份檢材。然后用干濕棉簽二步擦拭釘錘和菜刀的溝槽、縫隙處，各提取4份檢材。

圖1 作案工具Fig.1 Tools for criminal purpose

采用聯(lián)苯胺試驗(yàn)檢驗(yàn)上述116 份檢材。采用磁珠法分別提取上述116 份檢材的DNA，洗脫體積為20 μL。DNA 模板采用GlobalFilerTMPCR 擴(kuò)增試劑盒及YfilerTMPlus PCR擴(kuò)增試劑盒（美國Applied Biosys?tems公司）擴(kuò)增，反應(yīng)體系為10 μL，31個(gè)擴(kuò)增循環(huán)。擴(kuò)增產(chǎn)物用3500xL基因分析儀（美國Applied Biosystems公司）檢測，上樣量為2.5 μL。使用GeneMapperTMIDX軟件（美國Applied Biosystems公司）分析DNA圖譜。

1.3 檢驗(yàn)結(jié)果

116 份檢材的聯(lián)苯胺試驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果均為陰性。釘錘的64 份檢材中共有3 份檢出死者邱某的常染色體STR 分型（圖1A 中標(biāo)注“1、2、3”處），其中錘頭縫隙處（圖1A 中標(biāo)注“3”處）檢材分型完整（圖2）；4 份檢出死者邱某Y 染色體STR 分型（圖1A 中標(biāo)注“1、2、3、4”處），其中錘頭縫隙處（圖1A 中標(biāo)注“3”處）檢材分型完整（圖3）。菜刀的52 份檢材中共有5 份檢出同一未知男性常染色體STR 分型（圖1B 中標(biāo)注“1、2、3、4、5”處），其中刀刃處（圖1B 中標(biāo)注“5”處）檢材分型完整（圖4）；5 份檢出同一未知男性Y 染色體STR 分型（圖1B 中標(biāo)注“1、2、3、4、5”處），其中刀刃處（圖1B中標(biāo)注“5”處）檢材分型完整（圖5）。檢出標(biāo)準(zhǔn)均為檢出9 個(gè)及以上STR 基因座，相對熒光單位（relative fluorescence units，RFU）>100。

圖2 釘錘上常染色體STR分型結(jié)果Fig.2 Autosomal STR typing results of the nail hammer

圖3 釘錘上Y染色體STR分型結(jié)果Fig.3 Y chromosome STR typing results of the nail hammer

圖4 菜刀上常染色體STR分型結(jié)果Fig.4 Autosomal STR typing results of the knife

圖5 菜刀上Y染色體STR分型結(jié)果Fig.5 Y chromosome STR typing results of the knife

2 討論

本例從22 年前發(fā)生的命案作案工具（釘錘和菜刀）中檢出邱某和一未知男性完整獨(dú)立的常染色體和Y 染色體STR 分型，且該未知男性的Y 染色體STR 分型比中外省的兩個(gè)家系，為案件的偵破提供了極其重要的線索。

從當(dāng)年的現(xiàn)場照片看，釘錘和菜刀上疑似留有大量血跡，但現(xiàn)在116 份檢材的血痕預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰性，說明當(dāng)年遺留在釘錘和菜刀上血跡中的血紅蛋白已經(jīng)完全降解。由于年代久遠(yuǎn)，釘錘和菜刀上的DNA絕大部分也已經(jīng)腐敗、降解和丟失。此外，釘錘和菜刀曾經(jīng)多次被提取過其他的痕跡物證，如熏顯過指紋等，不排除某些抑制物存在的可能。由于實(shí)驗(yàn)室多次搬家，物證保管環(huán)境發(fā)生變化也不利于作案工具上DNA 的保存。盡管如此，仍有極其微量的DNA 殘存下來，并被成功檢出完整DNA 分型。分析其成功的原因有如下幾點(diǎn)：（1）對工具全面進(jìn)行網(wǎng)格化分區(qū)分層檢驗(yàn)，包括溝槽、縫隙處，確保不遺漏，每個(gè)網(wǎng)格的面積不宜太大（<10 cm2），面積太大，抑制物增多，且容易檢出混合DNA 分型，特別是多人混合，不易拆分[1]。本實(shí)驗(yàn)也檢出大量混合DNA 分型，隨機(jī)擴(kuò)增比較多，擴(kuò)增極其不平衡，沒有太大分析價(jià)值。不同提取轉(zhuǎn)移方法對生物檢材DNA 檢出率有很大影響[2]，要兼顧載體屬性，特別注意溝槽、縫隙處。本實(shí)驗(yàn)采用脫落細(xì)胞粘取器粘取和干濕棉簽二步擦拭分兩層提取所有檢材，兩次檢出完整DNA 分型的檢材都是粘取而來，推測原因可能是歷時(shí)太久，釘錘頭和菜刀已經(jīng)嚴(yán)重生銹，除鐵銹外的其他抑制物比較多，表層粘取的DNA 中抑制物比深層次棉簽擦拭的少。實(shí)際檢案中為了獲得更大的DNA 模板量，可以把黏附膜和棉簽合并提取。（2）在控制污染、減少抑制的前提下，DNA 檢測的各個(gè)環(huán)節(jié)均注意加大DNA 量，如減小洗脫體積，終體積減少至20 μL。擴(kuò)增時(shí)增加1～2 個(gè)循環(huán)數(shù)，但不建議增加更多循環(huán)數(shù)，防止非特異性譜帶出現(xiàn)。電泳時(shí)加大上樣量，較一般的檢材上樣量多1.5～2 倍即可。（3）每份檢材均進(jìn)行Y 染色體STR 檢測。本例116份檢材中共8份檢出常染色體STR分型結(jié)果，9份檢出Y染色體STR分型結(jié)果，日常檢案實(shí)踐也表明，Y 染色體STR 分型檢測靈敏度比較高，且能直接得到男女混合樣本中男性成分的DNA 分型，在家系排查中具有重要作用，可以作為常染色體STR分型檢測的補(bǔ)充[3]。

本例歷時(shí)22 年久偵不破，社會(huì)影響極其惡劣。22 年來，DNA 檢驗(yàn)技術(shù)不斷進(jìn)步，在提取、擴(kuò)增、檢測等各環(huán)節(jié)的操作方法越來越標(biāo)準(zhǔn)化，試劑質(zhì)量越來越高，檢測靈敏度不斷提高，去抑制物能力增強(qiáng)，一些腐敗、微量檢材以及年代久遠(yuǎn)的案件遺留下來的檢材如骨骼、牙齒、接觸性DNA 等也有可能檢出DNA[4-5]。技術(shù)人員要規(guī)范物證保管、增強(qiáng)證據(jù)保全意識(shí)，對命案積案檢材進(jìn)行梳理，運(yùn)用新技術(shù)、新方法，攻堅(jiān)克難，不斷優(yōu)化DNA 檢測方法，就有可能成功檢測各類命案積案中犯罪分子遺留的DNA。