韭菜中8種農(nóng)藥及其代謝物殘留分析

李輝，林宏芳，張宇軒，劉磊，李娜，邵輝，郭永澤，張玉婷

（天津市農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室（天津），天津 300381）

韭菜（Allium tubeiosum Rottl.ex Spreng.）葉、莖、籽均可食用[1]，且具有較好的殺菌消炎、促進(jìn)食欲，以及降低血糖血脂作用，并且對高血壓和冠心病的治療也具有一定療效[2-6]。其因特有風(fēng)味而為國人所喜食，作為一種特色蔬菜，在我國絕大部分地區(qū)均有種植，特別在我國北方大棚、拱棚和露地廣泛種植。

韭菜灰霉病，和韭菜遲眼蕈蚊（Bradysia odoriphaga），幼蟲俗稱韭蛆，是韭菜生長過程中主要的病蟲害，對韭菜產(chǎn)量和品質(zhì)有著較大的影響。韭菜灰霉病防治藥劑很少，目前獲得登記的僅有腐霉利可濕性粉劑和煙劑。其對韭菜灰霉病防治效果較好，但有報道稱韭菜灰霉病對腐霉利產(chǎn)生了一定程度的抗藥性[7-8]，因而韭菜病蟲害的防治還需要尋找新的替代農(nóng)藥，或加強韭菜的綜合防治。韭菜病蟲害的防治方法有物理防治[9]、生物防治[10-11]以及化學(xué)防治[12]，但以化學(xué)防治為主，也有以生物防治和化學(xué)防治相結(jié)合的防治措施[13]。辛硫磷和吡蟲啉等是韭蛆防治的主要登記用藥，不能為了達(dá)到防治效果，違規(guī)使用毒死蜱等禁用農(nóng)藥[14]。在現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)進(jìn)程中，韭菜田除草劑的使用也必不可少，二甲戊靈是韭菜田常用的除草劑[15]。

韭菜中常見農(nóng)藥殘留的檢測多用氣相色譜法[16]、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[17-18]、液相色譜[19]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[20-24]。為進(jìn)一步研究韭菜中常用病蟲害防治藥劑腐霉利、辛硫磷、吡蟲啉、氧樂果和二甲戊靈等典型農(nóng)藥，及禁用的毒死蜱、克百威和甲拌磷等農(nóng)藥的使用及殘留情況，本研究通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）分析了韭菜樣品中農(nóng)藥的殘留情況，并對腐霉利消解進(jìn)行分析，評價了其在露地韭菜和設(shè)施韭菜中的消解差異。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈（分析純）：天津市康科德科技有限公司；乙腈（色譜純）：默克公司；超純水：自制；甲酸（色譜純）、氯化鈉（分析純）：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；石墨化碳氨基柱（GCB/NH2，500 mg/500 mg，6 mL）：島津企業(yè)管理（中國）有限公司；50%腐霉利可濕性粉劑：陜西億農(nóng)高科藥業(yè)有限公司；韭菜樣品：采自天津市武清區(qū)、寶坻區(qū)、薊州區(qū)等多地；標(biāo)準(zhǔn)品腐霉利、辛硫磷、吡蟲啉、氧樂果、二甲戊靈、毒死蜱、克百威、3-OH克百威、甲拌磷、甲拌磷砜和甲拌磷亞砜，含量分別 為 93.0% 、99.0% 、93.0% 、99.0% 、98.5% 、93.0% 、99.0%、93.0%、99.0%、98.5%和98.5%：天津阿爾塔科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜儀（Waters H-Class）：美國Waters公司；三重四極桿質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源（Xevo TQS）：美國 Waters公司；旋渦混合器（QL-901）：江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司；高通量組織研磨儀（CK2000）：托摩根生物科技有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Laborota 4000 efficient）：德國 Heidolph；Milli-Q 超純水儀：美國Millipore公司。

1.3 田間設(shè)計及采樣

韭菜田間驗證試驗分為露地韭菜和設(shè)施韭菜試驗，均在天津市武清區(qū)進(jìn)行，試驗小區(qū)50 m2，并設(shè)對照小區(qū)30 m2。根據(jù)登記農(nóng)藥制劑，50%腐霉利可濕性粉劑在韭菜上防治灰霉病的最大推薦劑量，450 g ai/ha，噴霧施藥 1 次，于施藥后采集 2 h、1、2、3、5、7、10、14、21、28、30、35、42 d 的韭菜樣品，每次采集兩個平行樣品，低于-18℃儲存待處理測定。

1.4 分析方法

采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對目標(biāo)農(nóng)藥進(jìn)行定性和定量分析。按照農(nóng)藥的殘留定義，部分藥物的殘留值以其本體及代謝物殘留值的和進(jìn)行計算。MassLynx 4.1工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)采集與分析，基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量。

1.4.1 前處理方法

提?。悍Q取10 g試樣（精確到0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入20mL乙腈，5mL水，1200strokes/min垂直振蕩15 min，加入3 g氯化鈉，再以1 200 strokes/min垂直振蕩5min，4000r/min離心5min。取上清液5 mL于10 mL離心管中，氮吹至約2 mL，待凈化。

凈化：取上述待凈化液加入到經(jīng)5 mL乙腈預(yù)淋洗過的石墨化碳氨基小柱，用5 mL乙腈分兩次洗滌離心管，洗滌液加入小柱中，待液面快要流干時分次加入20 mL乙腈洗脫小柱，收集全部流出液，濃縮至近干，用2.5 mL乙腈復(fù)溶解，過0.22 μm有機(jī)濾膜，待測。

1.4.2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

液相色譜條件為色譜柱：Acquity UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：2 μL；流速：0.3 mL/min。

線性梯度洗脫程序：0～1 min，10%A～90%A；1 min～3 min，90%A；3 min～4 min，10%A。梯度洗脫程序：0～1 min，乙腈和0.1%甲酸水的體積比從10∶90逐漸變?yōu)?0∶10；1 min～3 min，乙腈和0.1%甲酸水的體積比保持為90∶10；3 min～4 min，乙腈和0.1%甲酸水的體積比保持為 10∶90。

質(zhì)譜條件為離子源：ESI（+）；毛細(xì)管電壓：3.0 kV；離子源溫度：150℃；脫溶劑氣溫度：500℃；錐孔反吹氣流量：150 L/h；脫溶劑氣流量：1 000 L/h；霧化氣流量：0.7 MPa。檢測方式為多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式（multiresponse monitoring scanning mode，MRM），如表1。

表1 8種農(nóng)藥及其代謝物的質(zhì)譜檢測條件Table 1 Mass-spectrometric conditions for determining of eight pesticides and its metabolites

1.4.3 方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度

考慮到基質(zhì)效應(yīng)對農(nóng)藥檢測的影響，試驗用標(biāo)準(zhǔn)品溶液均采用基質(zhì)溶液配制，各農(nóng)藥分別做3個濃度的添加試驗，添加濃度為0.01 mg/kg～0.50 mg/kg，定量限均為0.01 mg/kg。按照上述提取、凈化和測定方法，做5個平行測定，各農(nóng)藥的回收率均為70%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）不大于15%，所有數(shù)據(jù)符合農(nóng)藥殘留檢測要求。

1.5 腐霉利消解模擬試驗

分別以50%腐霉利可濕性粉劑在露地韭菜和設(shè)施韭菜消解模擬試驗的采樣間隔期為橫坐標(biāo)，以采樣間隔期對應(yīng)的兩個平行樣品中腐霉利殘留量的平均值為縱坐標(biāo)，繪制腐霉利消解指數(shù)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 8種農(nóng)藥及其代謝物測定結(jié)果

8種農(nóng)藥及其代謝物平均回收率與精密度見表2。

表2 8種農(nóng)藥及其代謝物平均回收率與精密度（n=5）Table 2 Average recoveries，relative standard deviation（RSD）of eight pesticides and its metabolites（n=5）

2.2 8種農(nóng)藥檢測結(jié)果

按照我國GB2763—2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[25]要求，對所采集的126批次韭菜樣品進(jìn)行分析，克百威的殘留量以克百威和3-羥基克百威之和表示，甲拌磷的殘留量以甲拌磷、甲拌磷砜和甲拌磷亞砜三者之和表示。8種農(nóng)藥的結(jié)果如表3所示。

表3 8種農(nóng)藥的檢測結(jié)果Table 3 Determining results of eight pesticides

8種農(nóng)藥檢出率最高的為二甲戊靈，檢出率43.6%，55批次有檢出，其中有12批次不合格，腐霉利和吡蟲啉的檢出率較高，但吡蟲啉沒有不合格批次，4批次樣品中辛硫磷超標(biāo)，占有辛硫磷檢出批次的31%，此外，甲拌磷和毒死蜱等禁限用農(nóng)藥也有不同程度的檢出，但氧樂果均未檢出。

2.3 生產(chǎn)規(guī)模分析

采集的126批次韭菜樣品中，73批次來自于中小規(guī)模的韭菜生產(chǎn)單位，53批次來自大規(guī)模韭菜生產(chǎn)基地。不同生產(chǎn)規(guī)模的韭菜樣品不合格結(jié)果分析見表4。

表4 不同生產(chǎn)規(guī)模的韭菜樣品結(jié)果分析Table 4 Results analysis of leek samples with different production scales

從采樣結(jié)果看，大規(guī)模生產(chǎn)基地的產(chǎn)品合格率為79%，遠(yuǎn)大于中小規(guī)模的59%。中小規(guī)模生產(chǎn)產(chǎn)品中使用禁限用農(nóng)藥的問題比較突出。

2.4 腐霉利的消解

消解趨勢如圖1、圖2。

圖1 腐霉利在露地韭菜的消解曲線圖Fig.1 Dissipation curve of procymidone in open field leek

圖2 腐霉利在設(shè)施韭菜中的消解曲線Fig.2 Dissipation curve of procymidone in greenhouses leek

50%腐霉利可濕性粉劑，以最大推薦劑量（450g ai/ha）于韭菜約10 cm高時施用1次，其沉積量均較高，殘留量隨著時間的推移呈現(xiàn)明顯下降趨勢，露地韭菜在施藥5 d后呈現(xiàn)明顯的下降趨勢，而后逐漸趨于平緩，設(shè)施韭菜在施藥15 d后呈現(xiàn)明顯的下降趨勢，隨后趨于平緩，其消解動態(tài)符合一級動力學(xué)反應(yīng)模型。露地韭菜中的消解曲線為y=14.784 8e-0.1312x，相關(guān)系數(shù)r=0.954 8，消解半衰期為5.3 d，經(jīng)過17.6 d，可降解90%；設(shè)施韭菜的消解曲線為y=11.242 5e-0.0719x，相關(guān)系數(shù)r=0.969 2，消解半衰期為9.6 d，經(jīng)過32 d，可降解90%。

3 結(jié)論與討論

根據(jù)采集樣品殘留結(jié)果可以看出，氧樂果在所有樣品中均未檢出，但甲拌磷、克百威、毒死蜱等農(nóng)藥有檢出，檢出率約為6%，幾乎全部集中于中小生產(chǎn)規(guī)模的韭菜樣品。這可能是農(nóng)藥的混用造成的，當(dāng)然也不排除土壤中農(nóng)藥長期殘留的影響和農(nóng)藥隱性成分添加造成的，同時也說明加強對農(nóng)藥使用監(jiān)管和合理化使用，是提升韭菜等農(nóng)產(chǎn)品安全生產(chǎn)的關(guān)鍵因素。

二甲戊靈是唯一在韭菜上登記使用的田間除草劑。以往人們習(xí)慣把農(nóng)藥殘留危害的重點集中在殺蟲、殺螨、殺菌等農(nóng)藥上，然而本次收集數(shù)據(jù)顯示，二甲戊靈在韭菜中的檢出率為43.6%。其可能的原因是人們對除草劑的危害認(rèn)識不夠或除草劑使用不當(dāng)，導(dǎo)致藥物逐漸在田間積累，形成了一定的風(fēng)險危害，應(yīng)當(dāng)引起我們的高度重視。

腐霉利是具有保護(hù)和治療雙重作用的低毒內(nèi)吸性殺菌劑，常被用于防治韭菜灰霉病等病害。通過本次采集的數(shù)據(jù)可知韭菜中腐霉利有檢出。因而，根據(jù)試驗產(chǎn)品登記信息，開展了腐霉利在韭菜上的消解試驗。以腐霉利最大推薦劑量應(yīng)用于韭菜，其使用30 d后的殘留量仍然在0.2 mg/kg左右，接近于我國韭菜中腐霉利最大殘留限量要求，可能是由于其原始沉積量較大造成的。然而，韭菜收獲期短，30 d的間隔期不適合韭菜產(chǎn)品的實際生產(chǎn)需求。參考試驗數(shù)據(jù)，建議經(jīng)過進(jìn)一步試驗，評估腐霉利膳食風(fēng)險，重新制定韭菜中腐霉利的限量要求。