奶牛子宮內(nèi)膜炎的研究進(jìn)展

馬曉宇，武小虎，王勝義，楊 潔，沈文祥，宋朋杰，楊 英，嚴(yán)作廷*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蘭州畜牧與獸藥研究所，蘭州 730050；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院，呼和浩特 010018）

奶牛子宮內(nèi)膜炎是奶牛產(chǎn)后常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)疾病，是奶牛由于生產(chǎn)、營(yíng)養(yǎng)、病原菌感染等因素導(dǎo)致的子宮內(nèi)膜發(fā)生感染，從而引起子宮內(nèi)膜層細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，是造成奶牛不孕癥的主要原因之一，會(huì)對(duì)奶牛養(yǎng)殖行業(yè)造成非常大的損失［1］。為了更好地認(rèn)識(shí)和治療奶牛子宮內(nèi)膜炎，文章從其病因、危害、防治等方面進(jìn)行綜述。

1 奶牛子宮內(nèi)膜炎病因

引起奶牛子宮內(nèi)膜炎的原因較為復(fù)雜。研究表明：奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生除了與飼養(yǎng)管理、配種操作等因素有關(guān)外，主要與感染性因素、機(jī)體激素水平、血液狀態(tài)、微量元素、營(yíng)養(yǎng)、季節(jié)和地區(qū)等繼發(fā)性因素有關(guān)［2－3］。細(xì)菌感染是造成奶牛子宮內(nèi)膜炎最主要的因素，從子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮內(nèi)分離到的細(xì)菌主要有葡萄球菌（Staphylococcus）、鏈球菌（Streptococcus）、大腸埃希氏桿菌（Escherichia coli）、棒狀桿菌（Corynebacterium）、布氏桿菌（Brucella）、化膿桿菌（Bacillus pyogenes）、假單胞菌（Pseudomonas）、變形桿菌（Proteus）、壞死桿菌（Necrobacterium necrosis）、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa）、嗜血桿菌（Haemophilus）、克雷伯氏桿菌（Klebsiella pneumoniae）、乳酸菌（Lactobacillus）等，其中大腸桿菌和化膿性鏈球菌是引起子宮內(nèi)膜炎最廣泛的病原菌［4－5］。此外，一些病毒、支原體、寄生蟲(chóng)等也是子宮內(nèi)膜炎的致病因素［6－7］。

2 奶牛子宮內(nèi)膜炎危害

奶牛子宮內(nèi)膜炎是一種影響奶牛繁殖性能的主要疾病，在全球范圍內(nèi)都具有很高的發(fā)病率。其對(duì)產(chǎn)后奶牛的健康恢復(fù)危害巨大，直接降低奶牛經(jīng)濟(jì)價(jià)值的穩(wěn)定并嚴(yán)重?fù)p害奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。子宮內(nèi)膜炎會(huì)造成雌性動(dòng)物子宮組織損傷、胚胎死亡、黃體期延長(zhǎng)、胎間距增大等不良后果，是引起雌性哺乳動(dòng)物不孕和胎兒死亡的重要原因之一［8－9］。研究表明，國(guó)內(nèi)外奶牛產(chǎn)后2～3周內(nèi)臨床型子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率為10% ～50%，規(guī)?；?chǎng)的高產(chǎn)奶?；疾÷矢撸跉W洲和北美發(fā)病率可達(dá)67%，部分奶牛還可能因?yàn)槌掷m(xù)感染而患上亞臨床型子宮內(nèi)膜炎（也稱隱性子宮內(nèi)膜炎），造成的危害不亞于臨床型子宮內(nèi)膜炎。亞臨床型子宮內(nèi)膜炎的主要特點(diǎn)是在沒(méi)有明顯癥狀表現(xiàn)的情況下導(dǎo)致奶牛繁殖性能下降、淘汰率增高。此外，產(chǎn)后患有亞臨床型子宮內(nèi)膜炎的奶牛由于免疫力低下，更容易遭受其他致病因素感染而增加其他疾病的發(fā)病率，給疾病的治愈增加難度，也增加了經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［10－11］。

3 奶牛子宮內(nèi)膜炎診斷方法

臨床型子宮內(nèi)膜炎的診斷方法有很多，包括臨床檢查（臨床癥狀診斷、直腸檢查、陰道窺鏡檢查）、血液常規(guī)檢查和生化指標(biāo)檢查、細(xì)菌培養(yǎng)法、子宮內(nèi)膜活檢等，通常需要多種方法結(jié)合運(yùn)用才能確診［12］；亞臨床型子宮內(nèi)膜炎主要依靠子宮內(nèi)膜細(xì)胞學(xué)檢查。人們也一直在探索簡(jiǎn)便、特異的新型診斷技術(shù)。

3.1 臨床檢查

根據(jù)臨床型子宮內(nèi)膜炎發(fā)病時(shí)的臨床癥狀，如陰道排出黏（膿）性分泌物，有惡臭氣味和子宮復(fù)舊延遲等，輔以直腸檢查和陰道檢查來(lái)診斷奶牛子宮內(nèi)膜炎。其中陰道窺鏡檢查法是判定奶牛繁育功能是否健全的標(biāo)準(zhǔn)之一，可按陰道中分泌物的顏色和氣味進(jìn)行評(píng)分，以判定子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病程度及子宮內(nèi)病原菌的生長(zhǎng)數(shù)量［13］。臨床檢查主要用于臨床型子宮內(nèi)膜炎，對(duì)于亞臨床型子宮內(nèi)膜炎沒(méi)有意義。

3.2 血液常規(guī)檢查和生化指標(biāo)檢查

血液常規(guī)和生化指標(biāo)檢查是診斷疾病常用的輔助方法，麻延峰等［14］研究發(fā)現(xiàn)：患子宮內(nèi)膜炎的奶牛血液中紅細(xì)胞（RBC）和血紅蛋白（HGB）值明顯低于正常值；其血液中白細(xì)胞（WBC）比例嚴(yán)重失調(diào)：?jiǎn)魏思?xì)胞（monocyte）和中性粒細(xì)胞（neutrophils）比例明顯增加，淋巴細(xì)胞（lymphocyte）比例明顯下降。T.Sattler等［15］研究發(fā)現(xiàn)，肌酸激酶（CK）在子宮內(nèi)膜炎患牛血清中的活性顯著升高，且與子宮內(nèi)膜炎嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可將其作為篩選子宮內(nèi)膜炎的輔助診斷指標(biāo)之一?，F(xiàn)代分子病理學(xué)研究顯示，子宮內(nèi)膜炎患牛血清中炎癥細(xì)胞因子（TNF－α、IL－1β、IL－6、IL－8等）水平會(huì)顯著增高，同時(shí)其子宮組織中炎性因子基因表達(dá)也往往顯著升高，這可作為母牛子宮內(nèi)膜炎的診斷標(biāo)志［16－17］。

3.3 細(xì)菌培養(yǎng)法

細(xì)菌感染是奶牛患子宮內(nèi)膜炎的主要病因，因此，可對(duì)臨床采集到的奶牛子宮分泌物進(jìn)行細(xì)菌分離、培養(yǎng)和鑒定，根據(jù)細(xì)菌種類和數(shù)量來(lái)判斷奶牛是否可能患子宮內(nèi)膜炎及嚴(yán)重程度［18］。從患子宮內(nèi)膜炎的奶牛子宮中分離出來(lái)的細(xì)菌種類很多，主要有葡萄球菌、鏈球菌、大腸埃希氏桿菌等。E.J.Williams等［13］認(rèn)為，子宮感染壞死梭桿菌會(huì)引起黏膿性分泌物，化膿性鏈球菌和變形桿菌感染則會(huì)導(dǎo)致膿性分泌物，而黏液的惡臭味通常是由于大量大腸桿菌、鏈球菌和溶血性曼氏桿菌入侵子宮腔引起的。

3.4 子宮細(xì)胞學(xué)檢查

細(xì)胞學(xué)檢查通常用來(lái)檢測(cè)亞臨床型子宮內(nèi)膜炎［19－20］。在缺少陰道膿性分泌物的情況下，通過(guò)子宮灌洗或者細(xì)胞刷采樣，檢測(cè)樣品中的多核中性粒細(xì)胞（polymorphonuclear neutrophilic granulocytes，PMN）百分比。R.Kasimanicham等［21］認(rèn)為，亞臨床型子宮內(nèi)膜炎的判定標(biāo)準(zhǔn)為產(chǎn)后21～23 d PMN＞18%或產(chǎn)后34～47 d PMN＞10%。C.S.Barlund等［22］認(rèn)為，在奶牛產(chǎn)后28～41 d子宮內(nèi)PMN＞8%是奶牛隱性子宮內(nèi)膜炎發(fā)病的標(biāo)志。W.Baranski等［23］認(rèn)為，在奶牛產(chǎn)后第4周PMN＞18%是診斷奶牛亞臨床型子宮內(nèi)膜炎的最佳閾值。但到目前為止，對(duì)此還沒(méi)有形成一個(gè)統(tǒng)一的判定標(biāo)準(zhǔn)。

4 奶牛子宮內(nèi)膜炎相關(guān)的分子機(jī)制

子宮內(nèi)膜上皮層是子宮防御外源病原感染的第一道防線，其炎癥反應(yīng)是機(jī)體對(duì)抗細(xì)菌感染的一種正常生理反應(yīng)，是產(chǎn)后促進(jìn)子宮恢復(fù)健康的過(guò)渡階段。平衡的炎癥反應(yīng)對(duì)有效清除子宮內(nèi)細(xì)菌、恢復(fù)子宮內(nèi)膜機(jī)能、接受新妊娠的環(huán)境恢復(fù)都是很關(guān)鍵的。但過(guò)度的炎癥反應(yīng)會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生傷害，表現(xiàn)為奶牛子宮內(nèi)膜炎［24－25］。因此，奶牛子宮內(nèi)膜炎的分子病理機(jī)制可以概括為動(dòng)物機(jī)體子宮內(nèi)膜損傷修復(fù)的抗炎機(jī)制，主要表現(xiàn)在免疫調(diào)控［26］（特異性免疫和非特異性免疫）、Toll樣受體4（TLR4）、NF－κB信號(hào)通路［27－28］和Micro RNA／Mi RNA調(diào)控［29］等方面。

近年來(lái)的研究表明，細(xì)胞膜表面和細(xì)胞內(nèi)存在一系列模式識(shí)別受體（pattern recognise receptors，PRRs），包括Toll樣受體、NOD樣受體等。這些受體可以識(shí)別一系列的病原體相關(guān)模式分子（pathogen－associated molecular patterns，PAMPs），包括細(xì)菌的鞭毛、脂多糖（LPS）、DNA等。它們可以同細(xì)胞內(nèi)的銜接蛋白ASC以及效應(yīng)蛋白Caspasae－1、Caspasae－4、Caspasae－5、Caspasae－11組成蛋白復(fù)合物——炎癥小體，可以進(jìn)一步切割細(xì)胞膜打孔蛋白GSDMD，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)一種炎癥依賴性死亡——焦亡。同時(shí)，Caspasae－1可以導(dǎo)致白細(xì)胞介素1β（IL－1β）和白細(xì)胞介素18（IL－18［11］）成熟并分泌到細(xì)胞外。因此，炎癥小體依賴的細(xì)胞焦亡［12］可能是奶牛子宮內(nèi)膜炎潛在的分子病理機(jī)制。而炎癥小體介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡又可分為經(jīng)典與非經(jīng)典通路兩種方式。另有研究表明，補(bǔ)體系統(tǒng)組分表達(dá)變化與子宮內(nèi)膜炎病理過(guò)程顯著相關(guān)。故而子宮內(nèi)膜炎的分子病理機(jī)制究竟如何有待于進(jìn)一步研究探討［30－34］。

5 奶牛子宮內(nèi)膜炎治療方法

根據(jù)子宮內(nèi)膜炎的病因分析，子宮內(nèi)病原菌感染是造成奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要原因，因此臨床上常用的治療方法多為針對(duì)細(xì)菌感染的方法，概括起來(lái)包括抗生素治療、中藥治療、微生物制劑治療和臭氧療法等。

5.1 抗生素治療

抗生素具有治療簡(jiǎn)單方便、快速、成本低等優(yōu)點(diǎn)，長(zhǎng)期以來(lái)被臨床獸醫(yī)工作者廣泛應(yīng)用于臨床。但由于實(shí)際生產(chǎn)中引起子宮內(nèi)膜炎的病原具有多樣性，且病原體存在地域間的差異，這給抗生素的選擇和應(yīng)用帶來(lái)困難，且濫用廣譜抗生素很容易引起細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。因此，抗生素的選用需根據(jù)臨床實(shí)踐結(jié)合當(dāng)?shù)亓餍胁W(xué)調(diào)查情況和藥敏試驗(yàn)謹(jǐn)慎選擇。

趙鑫等［35］報(bào)道，對(duì)新疆奎屯地區(qū)子宮內(nèi)膜炎患牛進(jìn)行子宮分泌物病原菌分離及藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明：引起該地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌為大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌；頭孢噻肟和阿莫西林對(duì)大腸埃希菌抑菌效果明顯，恩諾沙星和卡那霉素對(duì)葡萄球菌抑菌效果明顯，阿莫西林和環(huán)丙沙星對(duì)鏈球菌抑菌效果明顯，幾乎所有分離細(xì)菌都對(duì)四環(huán)素和青霉素耐藥。趙智香等［36］的研究表明，巴彥淖爾地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌為鏈球菌和葡萄球菌，且大多數(shù)患牛為混合感染；藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氟苯尼考三種藥物對(duì)受試致病菌均表現(xiàn)為高度敏感，青霉素和鏈霉素對(duì)致病菌表現(xiàn)為嚴(yán)重的耐藥性。辛萍萍等［37］報(bào)道：濰坊地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌為鏈球菌、葡萄球菌、大腸桿菌等；藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，該地區(qū)細(xì)菌對(duì)頭孢拉定、環(huán)丙沙星、恩諾沙星等抗生素較為敏感，耐藥性較小。趙清梅等［38］在寧夏地區(qū)的研究表明：該地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎主要致病菌為大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌，且以混合感染為主；該類病原對(duì)青霉素類、四環(huán)素類、氨基糖甙類和磺胺類抗生素耐藥性較強(qiáng)，對(duì)萬(wàn)古霉素、頭孢類較敏感。

上述研究表明，奶牛子宮內(nèi)膜炎的關(guān)鍵性致病菌，如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等，已對(duì)常用抗生素如青霉素、鏈霉素、四環(huán)素等產(chǎn)生一定耐藥性，但對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、頭孢等抗生素較為敏感。因此，臨床上應(yīng)選擇耐藥性相對(duì)較小的抗生素，且應(yīng)避免長(zhǎng)期使用單一種類的抗生素，盡量交替使用且制訂嚴(yán)格、合理的休藥期。

5.2 中藥治療

中藥治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的優(yōu)勢(shì)在于其多成分、多靶點(diǎn)的作用且不易引起耐藥性，而成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。近年來(lái)由于抗生素的大量使用，造成細(xì)菌耐藥性越來(lái)越嚴(yán)重，越來(lái)越多的中藥制劑被用來(lái)治療奶牛子宮內(nèi)膜炎，且取得了較好的成果。李清艷等［39］應(yīng)用中藥復(fù)方宮炎散（主要成分為龍膽草、柴胡、澤瀉、車前子、木通、生地黃、當(dāng)歸尾、梔子、黃芩、甘草）治療奶牛子宮內(nèi)膜炎，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，宮炎散能夠增強(qiáng)患牛的免疫防御機(jī)能，調(diào)節(jié)其血清促炎細(xì)胞因子維持在一定水平，對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎有一定的防治作用。馮偉等［40］應(yīng)用中藥復(fù)方灌注液（主要成分為連翹、黃連、丹參、紅花等）治療急性奶牛子宮內(nèi)膜炎病牛40頭，結(jié)果表明，該中藥復(fù)方灌注液對(duì)奶牛急性子宮內(nèi)膜炎自然病例具有顯著治療效果。鄧婷等［41］選用14味中藥（黃連、黃芩、苦參、黃柏、連翹、地錦草、丹參、紅花、益母草、桃仁、白術(shù)、黃芪、黨參、當(dāng)歸）進(jìn)行了奶牛子宮內(nèi)膜炎主要病原菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鏈球菌）的抑菌試驗(yàn)，結(jié)果表明，黃連、黃芩、連翹、丹參對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎3種病原菌均有較強(qiáng)的抑菌活性。

5.3 微生物制劑治療

微生物制劑是一類根據(jù)微生態(tài)學(xué)原理制成的對(duì)動(dòng)植物有益的活菌制劑，具有抑菌效果強(qiáng)、藥物殘留低、不易引發(fā)耐藥性等特點(diǎn)。相對(duì)于抗生素來(lái)說(shuō)，應(yīng)用微生物制劑治療子宮內(nèi)膜炎具有較好的應(yīng)用前景［42］。目前研究的微生態(tài)主要有嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、枯草芽孢桿菌等［43－44］，孫海英等［45］利用復(fù)合微生態(tài)制劑治療子宮內(nèi)膜炎家兔模型，對(duì)家兔進(jìn)行了臨床表現(xiàn)、剖檢觀察、尿液檢查和子宮切片分析，結(jié)果表明，復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)子宮內(nèi)膜炎家兔模型有明顯的治療效果。張志焱等［46］采用微生態(tài)制劑對(duì)病牛子宮分泌物內(nèi)的病原菌進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)，并進(jìn)行臨床治療，結(jié)果表明，治愈率高達(dá)75%，有效率為95%。

5.4 臭氧（ozone）療法

臭氧是一種具有強(qiáng)氧化性的氣體，對(duì)大多數(shù)細(xì)菌、病毒、真菌等都具有一定的滅活作用，且具有作用范圍廣、治療見(jiàn)效快、不產(chǎn)生耐藥性、無(wú)不良反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，已作為一種新型手段被廣泛用于治療動(dòng)物疾?。?7］。焦京琳等［48］研究發(fā)現(xiàn)：臭氧化橄欖油對(duì)于卡他性及黏液性子宮內(nèi)膜炎的治療有效率能夠達(dá)到與抗生素藥物接近，且經(jīng)安全性試驗(yàn)證明，臭氧化橄欖油并未引起小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞明顯損傷，提示臭氧化橄欖油可在一定程度替代抗生素預(yù)防及治療卡他性及黏液性子宮內(nèi)膜炎。R.Zobel等［49］發(fā)現(xiàn)，宮內(nèi)臭氧療法或與抗生素聯(lián)合治療奶牛產(chǎn)后胎衣不下效果好于激素和抗生素治療，且可減少奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率。

6 奶牛子宮內(nèi)膜炎的預(yù)防

鑒于奶牛子宮內(nèi)膜炎的病因較多，最佳的預(yù)防方法就是想辦法提高奶牛自身的免疫力，降低奶牛生活區(qū)致病性細(xì)菌含量。具體做法：加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，合理搭配奶牛日糧營(yíng)養(yǎng)比例，保持奶牛生活區(qū)清潔，定期消毒，指定合理、規(guī)范的配種流程并嚴(yán)格執(zhí)行等；同時(shí)堅(jiān)持早發(fā)現(xiàn)早治療的原則，盡量避免轉(zhuǎn)為亞臨床型子宮內(nèi)膜炎。

7 結(jié)語(yǔ)與展望

奶牛子宮內(nèi)膜炎作為奶牛圍產(chǎn)期主要疾病之一，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展帶來(lái)極大的危害。由于致病因素復(fù)雜，奶牛子宮內(nèi)膜炎患牛長(zhǎng)期以來(lái)難以獲得有效的治療。因此，對(duì)于該病的防控應(yīng)以預(yù)防為主，結(jié)合當(dāng)?shù)嘏R床實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)室分析，制訂科學(xué)有效的治療方案；同時(shí)加強(qiáng)對(duì)該病分子病理學(xué)的研究，找出其發(fā)病本質(zhì)，以期更好地指導(dǎo)臨床實(shí)踐。