梔子中梔子苷的研究進(jìn)展

劉 聃，劉鳳英，黃 穎，段艷輝，鄧愛(ài)華

（1.湖南文理學(xué)院 芙蓉學(xué)院，湖南 常德415000；2.湖南文理學(xué)院 地理科學(xué)與旅游學(xué)院，湖南 常德415000）

梔子是茜草科植物山梔子的干燥成熟果實(shí)，主要生長(zhǎng)在我國(guó)長(zhǎng)江中下游地域，江西、湖南是梔子分布的大省，浙江、福建、廣東等地區(qū)也有少數(shù)分布[1]。梔子具有清熱、瀉火、涼血等藥用功效，能夠抗炎鎮(zhèn)痛、保肝利膽，對(duì)消化體系、呼吸體系、心血管體系等有關(guān)的疾病均有藥理作用。在中國(guó)，研究人員發(fā)現(xiàn)梔子中含有40余種生理活性物質(zhì)，其中主要為環(huán)烯醚萜類(lèi)和揮發(fā)油類(lèi)物質(zhì)，藥典中認(rèn)為中藥梔子中最有效的成分是環(huán)烯醚萜類(lèi)物質(zhì)[2-3]，而梔子苷為梔子中活性最高的物質(zhì)之一。近年來(lái)，隨著社會(huì)進(jìn)步和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，醫(yī)學(xué)設(shè)施逐漸完善，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和藥理研究技術(shù)得到了提高，梔子的藥理作用和功效被逐漸發(fā)現(xiàn)并運(yùn)用于臨床治療，對(duì)醫(yī)學(xué)界具有重要意義。

1 梔子的主要化學(xué)成分

1.1 環(huán)烯醚類(lèi)

梔子中含量較高是環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物，該物質(zhì)對(duì)酸較為敏感，易被酸水解。廖輝等人[1]在梔子中提取出5個(gè)環(huán)烯醚帖苷，經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)，這5個(gè)是母核相同的閉環(huán)環(huán)烯醚帖苷，能夠在皮革、絲綢、毛等蛋白質(zhì)纖維上進(jìn)行染色。相關(guān)研究表明，環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物能夠運(yùn)用在工業(yè)生產(chǎn)方面。梔子苷屬環(huán)烯醚萜物質(zhì)，又名京尼平苷，在梔子中的含量較高，杜仲、肉蓯蓉、衛(wèi)矛、香鱗毛蕨、牛膝和青牛膽等植物中也有發(fā)現(xiàn)。

1.2 有機(jī)酸酯類(lèi)

梔子中的有機(jī)酸脂類(lèi)物質(zhì)較多，其中常見(jiàn)的有綠原酸和熊果酸。He W等人[3]用HPLC-DAD-MS方法從梔子中提取出9種化合物，經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，其中為6種綠原酸異構(gòu)體（綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C），其他為藏紅花素與京尼平苷。而綠原酸中的咖啡?？崴崤c異綠原酸中的二咖啡?？崴釋?duì)自由基的清除起主導(dǎo)作用。

1.3 色素類(lèi)

梔子苷中含有紅紫藍(lán)3種色素，可以用于衣服著色，當(dāng)作染料；在不同條件下，也可將提取的梔子紅、梔子藍(lán)、梔子紫用于食物加工、化妝品的制作等行業(yè)。梔子中提取梔子黃色素的提取率較高，梔子黃色素是良好的黃色素，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。湯興俊等人[4]發(fā)現(xiàn)梔子系列色素具有抑菌功效，可以廣泛用于食品添加領(lǐng)域。抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)梔子黃色素、梔子紅色素和梔子藍(lán)色素都具有抑制革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌生長(zhǎng)的功能，如枯草芽孢桿菌、變形桿菌?；谠撘志δ?，具備紅、黃、綠3種基色的天然梔子系列色素，可以作為調(diào)配任意顏色的食品添加劑，同時(shí)對(duì)食物也起到抑菌防腐的作用。因此，既可以用于制備抑菌劑，也可以用作防腐劑[5-6]。

2 梔子苷的藥理作用

2.1 抗炎鎮(zhèn)痛

梔子苷具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用，這是較早發(fā)現(xiàn)的梔子苷藥理作用之一。楊宇等人[7]嘗試用小鼠醋酸扭體法、小鼠熱板法研究梔子苷的鎮(zhèn)痛作用，發(fā)現(xiàn)梔子苷可以延長(zhǎng)熱刺激而致使小鼠疼痛的時(shí)間縮短，也可以顯著抑制由醋酸導(dǎo)致的扭轉(zhuǎn)次數(shù)。試驗(yàn)研究了阿片受體、NO與梔子苷的鎮(zhèn)痛作用是否有關(guān)系，發(fā)現(xiàn)阿片受體拮抗藥能夠拮抗梔子苷的鎮(zhèn)痛作用，而鎮(zhèn)痛作用與NO的釋放有較密切的關(guān)系。

2.2 保護(hù)心腦血管

梔子苷可以保護(hù)心腦血管。丁嵩濤等人[8]使用H2O2為氧化劑創(chuàng)建HUVEC細(xì)胞氧化硬損傷模型，對(duì)梔子苷是否具備保護(hù)氧化應(yīng)激損傷的細(xì)胞功能進(jìn)行試驗(yàn)。經(jīng)試驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，梔子苷可以增添細(xì)胞內(nèi)抗氧化體系的活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)NOS活性，促進(jìn)NO生成恢復(fù)正常水平，從而增進(jìn)細(xì)胞內(nèi)血管增殖的作用。推測(cè)可能因?yàn)榫C合作用，使得梔子苷能夠起到保護(hù)心腦血管的作用，而這一潛在的功能為治療肝硬化有關(guān)的疾病提供了依據(jù)。

2.3 治療脂肪肝

梔子苷具備醫(yī)治脂肪肝的作用，梔子苷通過(guò)降低血清和肝組織中的TG含量，抑制血清ALT，AST活性的升高，從而實(shí)現(xiàn)治療脂肪肝的功效。陳少東等人[9]采用經(jīng)高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪肝金黃地鼠進(jìn)行試驗(yàn)，證實(shí)了梔子苷所制備的藥物確實(shí)具有這一用途，發(fā)明了梔子苷在制備治療脂肪肝藥物的應(yīng)用專(zhuān)利。

2.4 降低血糖

日本學(xué)者Kimura發(fā)現(xiàn)梔子苷具備治療糖尿病及并發(fā)癥的功能。糖尿病是一種因?yàn)檠翘叨l(fā)的慢性高血糖代謝病，容易引發(fā)并發(fā)癥。通過(guò)對(duì)前脂肪細(xì)胞消耗試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)梔子苷可以促進(jìn)前脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收。小鼠荷瘤試驗(yàn)、四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的試驗(yàn)與PPARy進(jìn)一步探究，發(fā)現(xiàn)梔子苷在體內(nèi)外的降糖活性，且首次發(fā)現(xiàn)梔子苷具有激活PPARy受體的活性，但對(duì)梔子苷是否能夠?qū)σ葝u細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)與分泌作用還需進(jìn)一步試驗(yàn)。梔子苷的降血糖及改善糖尿病癥狀的作用，為糖尿病的進(jìn)一步醫(yī)治提供了新思路。

3 梔子苷的提取方法

3.1 浸漬法

浸漬法是利用相似相溶原理提取出相應(yīng)的功效成分，包括乙醇提取法、乙醚提取法、水提取法等，而水提取法提取出的雜質(zhì)較多。杜守穎等人[10]為優(yōu)選梔子藥材的提取工藝采用了直接比較法（水煎煮法、70%乙醇回流提取、70%乙醇滲漉提?。?。結(jié)果表明，水煎法提取率較高，考慮多方面因素影響，水煎法提取作為進(jìn)一步純化梔子苷的最佳提取工藝。

3.2 超聲波輔助提取法

超聲波輔助提取技術(shù)是利用超聲波的空化作用和機(jī)械振動(dòng)擊碎等效應(yīng)，使梔子與提取劑充分接觸、混合，迅速擴(kuò)散以提取其有效成分。由于傳統(tǒng)的提取方法提取率溶劑損耗大、提取時(shí)間較長(zhǎng)等缺點(diǎn)，歐陽(yáng)薇等人[11]探究超聲波提取法最佳優(yōu)化條件，通過(guò)采用Box-behnken響應(yīng)面法進(jìn)行工藝優(yōu)化，分析梔子苷提取率的回歸方程，得出最佳提取條件為：超聲功率750.87 W，提取時(shí)間46.57 min，溶劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)52.06%溶劑體積（料液比）1∶64.59（g∶mL），梔子苷提取率為36.16 mg/g。該結(jié)果具有較高的實(shí)用值，對(duì)工業(yè)生產(chǎn)具有指導(dǎo)意義。

3.3 微波輔助提取法

微波輔助提取法是利用電磁場(chǎng)的作用，使固體或半固體物質(zhì)中的某些有機(jī)物成分與機(jī)體有效的分離，并能維持分析對(duì)象的原本化合物狀態(tài)的一種分離方法。為了探索梔子有效成分提取的最佳條件，秦秀蓉等人[12]采取正交試驗(yàn)法來(lái)篩選提取梔子苷的最佳條件，通過(guò)考查藥材的粉碎度、微波加熱時(shí)間、提取次數(shù)3個(gè)因素，得出了最佳條件為粗顆粒，加熱時(shí)間20 min，提取次數(shù)2次。微波萃取的分離方法與常規(guī)的水煮法相比，有效提取了梔子中的梔子苷成分，且提取率高、時(shí)間短。

3.4 生物酶法

生物酶法是采用酶反應(yīng)的專(zhuān)一性，將底物與之對(duì)應(yīng)的苷鍵水解開(kāi)，從而獲取相應(yīng)的成分。生物酶法提取梔子相關(guān)成分常與浸提法等方法相輔助，將提取之后的成分進(jìn)行水解獲得單體或其他衍生物，如提取梔子苷（京尼平）等成分。近年來(lái)，纖維素酶廣泛運(yùn)用在各個(gè)領(lǐng)域，如化工、食品及天然產(chǎn)物提取等。趙伯濤等人[13]通過(guò)色譜法與高效液相色譜法對(duì)梔子苷的酶解反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，確定了葡萄糖糖苷酶水解梔子苷的最適條件。

4 梔子苷的純化方法

4.1 氧化鋁吸附法

氧化鋁吸附法的基本原理是水合氧化鋁在活化時(shí)迅速脫水，活化后又可以可逆吸水，這種吸附是一種物理吸附過(guò)程。林璐等人[14]通過(guò)比較水煎煮法與乙醇回流法，發(fā)現(xiàn)用70%乙醇提取梔子苷提取的含量較大，且雜質(zhì)較少。通過(guò)正交試驗(yàn)法確定梔子苷的提取工藝，最后用Al2O3純化梔子苷。用中性三氧化二鋁純化的梔子苷達(dá)18%，為工業(yè)發(fā)展提供了依據(jù)。丁越等人[15]通過(guò)氧化鋁柱層析制備高純度梔子苷，研究發(fā)現(xiàn)最佳工藝條件為適量層析用中性氧化鋁（100～200目），徑高比為5∶1，梔子苷粗提物的上樣量為氧化鋁用量的1/30，95%乙醇沖洗氧化鋁柱，洗脫液用量為60倍柱體積，該工藝可用于制備質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于90%的梔子苷。

4.2 大孔樹(shù)脂分離法

大孔樹(shù)脂分離法是一種用大孔樹(shù)脂作為支持劑的分離方法，可分為陽(yáng)離子大孔樹(shù)脂法和陰離子大孔樹(shù)脂法。涂盛輝等人[16]用乙酸乙酯提取出梔子苷的粗提取液，通過(guò)樹(shù)脂靜態(tài)吸附試驗(yàn)來(lái)選擇能最佳制出梔子苷的吸附樹(shù)脂，再通過(guò)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)來(lái)選擇最適宜的吸附流速。經(jīng)過(guò)對(duì)比分析后，選用了HPD-100樹(shù)脂進(jìn)行后續(xù)的動(dòng)態(tài)試驗(yàn)，得出用30%乙醇水溶液在吸附流速2.0 mL/min吸附，低流速1.0 mL/min洗脫為最佳條件。使用該方法純化的梔子苷含量高達(dá)90%以上，方法穩(wěn)定可行。彭柳等人[17]用大孔樹(shù)脂分離純化梔子提取液中梔子苷，最佳純化條件為樣品質(zhì)量濃度為20.00 g/L，溫度25℃，pH值5.0，洗脫劑為60%乙醇，動(dòng)態(tài)吸附流速2.0 BV/h，樣品溶液上樣量3.0 BV，動(dòng)態(tài)洗脫流速3.0 BV/h，洗脫劑用量7.5 BV。丁玲等人[18]用SP825型大孔樹(shù)脂對(duì)梔子苷的吸附性能進(jìn)行考查，得出最佳吸附條件為上樣液質(zhì)量濃度83 g/L，pH值2.79，最大吸附量247 mg/g，可以確定梔子苷的吸附過(guò)程為自發(fā)放熱反應(yīng)，且低溫有利于吸附，吸附速率主要由液膜擴(kuò)散控制。

5 梔子苷的檢測(cè)方法

5.1 硅膠色譜法

楊小軍等人[19]用RP-HPLC法測(cè)定防風(fēng)通圣丸中梔子苷、芍藥苷、黃芩苷、大黃素的含量，用Zorbax Eclipse XDB-C18鍵合硅膠色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-2%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm，梔子苷進(jìn)樣量在0.056～0.56 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R=0.999 7），平均加樣回收率為99.14%，該方法操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏、精密度高、重現(xiàn)性良好、結(jié)果準(zhǔn)確。

5.2 高效液相色譜法

何峰等人[20]用HPLC法測(cè)定梔子提取物中梔子苷的含量，通過(guò)研究試液前處理方法、色譜條件、專(zhuān)屬性試驗(yàn)和線性關(guān)系等，考查檢測(cè)方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率和樣品測(cè)定等結(jié)果分析，確定色譜柱C18柱（250 mm×4.6 mm×5 μm），柱溫40℃，流動(dòng)相為甲醇-0.05%磷酸（25∶75），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm，進(jìn)樣量10 μL時(shí)，梔子苷在24.6～98.4 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R=0.999 7），平均回收率為99.1%（RSD=0.69%）。

5.3 免疫學(xué)分析法

高效液相色譜法難以滿(mǎn)足大樣量的研究要求，研究人員建立了梔子苷定量分析的免疫學(xué)分析方法，建立該法的第一步要成功合成梔子苷的人工合成抗原。屈會(huì)化等人[21]采用高碘酸鈉氧化法制備了梔子苷免疫抗原（GEN-BSA）和包被抗原（GEN-PLL），為下一步梔子苷克隆抗體進(jìn)行準(zhǔn)備。免疫學(xué)分析法是在抗原與抗體的特異性與敏感性的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，比較其他方法，具有靈敏度較高、特異性強(qiáng)、對(duì)測(cè)定結(jié)果檢測(cè)分析影響小等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)梔子苷的定量分析檢測(cè)具有較大的意義，且具有廣泛的應(yīng)用前景。

6 結(jié)語(yǔ)

梔子苷具有許多的藥理作用，近年來(lái)其相關(guān)的研究報(bào)道呈上升趨勢(shì)，但很多停留在機(jī)制的研究階段，應(yīng)用比較少。目前，市場(chǎng)上的梔子苷產(chǎn)品大部分以中藥復(fù)方為主，以梔子苷單體為主要有效成分的成品少見(jiàn)。究其原因可能是梔子苷的油水分配系數(shù)較小，全腸吸收較差，需通過(guò)復(fù)方改善其吸收。不過(guò)，可在不改變梔子苷藥效的情況下，采用先進(jìn)的制劑技術(shù)，如將其制成β-環(huán)糊精包合物、磷脂復(fù)合物等，改善其生物利用度，甚至還可提高藥效。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和藥理學(xué)研究水平的不斷提高，梔子中更多的藥理作用和有效成分將會(huì)被開(kāi)發(fā)和利用，為臨床應(yīng)用和一些新藥的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。