血清Hcy、CysC、RBP及尿足細胞聯(lián)合檢測對2型糖尿病腎病早期診斷的臨床價值

徐晏玲，艾禾，漆丹平

1.成都市雙流區(qū)中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科，四川 成都 610200；2.成都市中西醫(yī)結合醫(yī)院科教部，四川 成都 610041；3.成都市雙流區(qū)中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，四川 成都 610200

糖尿病是臨床常見疾病，腎損傷是糖尿病患者最重要的合并癥，也是導致患者進展為終末期腎臟病的主要因素之一[1-2]。研究表明，糖尿病患者一旦進展至終末期腎臟病，會由于機體代謝紊亂，在治療上比其他腎臟疾病的治療更加困難，因此2型糖尿病腎病患者早期確診治療對提高患者生存率，延緩疾病進展有著重要意義[3]。目前有研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎病患者疾病的發(fā)生與進展與氧化應激、炎癥反應等存在一定聯(lián)系，而血清同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(Cys C)、視黃醇結合蛋白(RBP)與機體氧化應激及炎癥反應有關，并且尿足細胞是腎小球濾過屏障的主要組成細胞，因此對Hcy、Cys C、RBP以及尿足細胞的檢測有助于判斷患者病情進展情況，具有重要臨床診斷價值。本文旨在進一步探討Hcy、Cys C、RBP及尿足細胞聯(lián)合檢測對2型糖尿病腎病早期診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇成都市雙流區(qū)中醫(yī)醫(yī)院2019年1月至2020年8月間收治的2型糖尿病腎病早期患者58例作為A組，同時選取我院收治的58例單純糖尿病患者作為B組，糖尿病患者均符合1999年WHO指定的2型糖尿病相關診斷標準，排除合并急慢性腎炎、尿路感染、原發(fā)性高血壓等疾病者。選取同時期在醫(yī)院體檢的健康者58例作為C組。A組中男性31例，女性27例；年齡36～78歲，平均(58.3±9.5)歲；病程3～13年，平均(7.2±1.9)年。B組中男性35例，女性23例；年齡36～79歲，平均(58.5±9.2)歲；病程3～12年，平均(7.4±1.8)年。C組中男性33例，女性25例；年齡36～78歲，平均(58.9±9.4)歲。三組受檢者的性別、年齡比較和A組和B組患者的病程比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，所有受檢均知情并簽署知情同意書。

1.2 觀察指標與檢測方法

1.2.1 血清Hcy、CysC水平 清晨采集所有受檢者空腹靜脈血5 mL，置于肝素鋰抗凝管中，常溫下采用離心機以3 000 r/min的速度離心分離10 min，取上層清液置于-70℃冰箱內(nèi)保存，待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測患者血清Hcy、CysC水平，檢測儀器為貝克曼AU5800全自動生化分析儀，Hcy檢測試劑盒購自北京九強公司，CysC試劑盒購自上海藍怡公司，所有操作均按說明書進行。

1.2.2 尿RBP、尿足細胞 取患者以及健康體檢者新鮮晨尿兩份，離心分離5 min，棄上層清液，沉渣采用PBS清洗3次，加入1 mL PBS重懸，然后加入PE標記鼠抗人足盂蛋白單克隆熒光抗體50μL，于4℃環(huán)境下孵育45 min，采用離心機離心分離5 min，分離完成后采用PBS清洗3次，沉渣中加入2 mL PBS重懸后轉移至BD絕對計數(shù)管，置于振蕩器上充分混勻后采用美國BD公司生產(chǎn)BD FACS Calibur流式細胞儀進行檢測。絕對細胞數(shù)=(熒光標記細胞計數(shù)×已知熒光小球總數(shù)×稀釋背書)/(熒光小球計數(shù)×樣本總體積)。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較應用q檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，使用受試者工作特征曲線(Receiver Operating Characteristic，ROC)分析各指標診斷價值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組受檢者的各項指標比較 A組患者的血清Hcy、CysC、RBP和尿足細胞水平明顯高于B組及C組，而B組患者的上述各項指標又明顯高于C組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.0.5)，見表1。

表1 三組受檢者的各項指標比較(±s)

表1 三組受檢者的各項指標比較(±s)

注：與A組比較，a P<0.05；與B組比較，b P<0.05。

尿足細胞(個/μL)2.8±0.8 2.3±0.6a 0.7±0.1b 207.31<0.01組別A組B組C組F值P值例數(shù)58 58 58 Hcy(μmol/L)21.2±3.5 19.7±2.8a 7.7±1.9b 401.96<0.01 CysC(mg/L)1.8±0.3 1.5±0.2a 0.7±0.1b 401.86<0.01 RBP(mg/L)3.1±0.7 2.6±0.5a 0.8±0.1b 339.49<0.01

2.2 各項指標對2型糖尿病腎病的早期診斷價值 將A組和B組進行研究，以腎小球濾過率<90 mL/min作為2型糖尿病腎病診斷切點，ROC分析顯示血清Hcy、CysC、RBP以及尿足細胞診斷最佳切點分別為20.81μmol/L、1.75 mg/L、2.91 mg/L以及2.73個/μL，各項指標檢測敏感性血清CysC>RBP>尿足細胞>Hcy，并且四者聯(lián)合檢測可顯著提高診斷敏感性，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2和圖1。

表2 各項指標對2型糖尿病腎病早期診斷價值(%)

圖1 各項指標診斷2型糖尿病腎病的ROC曲線

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病中最嚴重的慢性并發(fā)癥，近年來呈逐年增長趨勢[4-5]。糖尿病腎病可分為早期糖尿病腎病、臨床期糖尿病腎病和晚期糖尿病腎病。部分早期糖尿病腎病患者經(jīng)治療后可恢復正常，近一半的患者在治療后病情不會進展，會停留在微量蛋白尿階段[6-7]。因此，早期診斷糖尿病腎病并采取積極治療，是提高生存質量，改善預后的重要手段。

Hcy是人體內(nèi)含硫氨基酸的重要中間代謝產(chǎn)物之一，可損傷患者的血管內(nèi)皮細胞，促進血管內(nèi)皮細胞及平滑肌細胞增生，影響到患者腎小球基底膜功能。相關研究表明，早期2型糖尿病腎病患者由于糖脂代謝異常，Hcy生成過多，自由基生成而出現(xiàn)氧化應激損傷。腎功能受損后，腎臟清除Hcy的能力也會下降，Hcy甲基化能力降低以及含硫氨基酸的代謝均為患者體內(nèi)Hcy水平升高的原因[8-10]。本研究顯示，2型糖尿病腎病患者血清Hcy水平均明顯高于單純糖尿病患者及正常人群。

CysC是有核細胞產(chǎn)生的一種低分子量蛋白，正常情況下會在經(jīng)腎小球過濾后會被腎小管上皮細胞吸收。CysC對腎小球以及腎小管損傷的評估有重要診斷意義。2型糖尿病腎病患者在正常蛋白尿階段，CysC水平即升高，標志患者出現(xiàn)腎損傷[11-13]。RBP作為一種低分子量蛋白質，正常情況下將視黃醇從肝臟運轉到上皮細胞，隨著人尿液排出的量極少，當患者肝臟出現(xiàn)損傷后，游離的RBP不會被腎小球濾過被近曲小管吸收分解，而是隨尿液排出。足細胞作為腎小球濾過屏障的重要組成部分，在對大分子的濾過的過程中發(fā)揮著重要作用，當2型糖尿病早期患者出現(xiàn)微量白蛋白尿階段時，足細胞脫落功能受損，密度降低，因此在尿液中可檢測到大量蛋白質[14-15]。

上述各項指標能夠從不同角度體現(xiàn)糖尿病腎病患者的病情程度，多指標聯(lián)合檢測能夠顯著提高糖尿病腎病的診斷準確率，聯(lián)合檢測對患者病情確診有著重要意義，可作為糖尿病患者預防以及動態(tài)監(jiān)測的可靠指標。本研究顯示，血清Hcy檢測的陽性率為60.3%，CysC為79.3%，RBP為87.5%，尿足細胞為74.1%，四者聯(lián)合檢測的陽性率為94.8%，四者聯(lián)合檢測陽性率高于單一指標檢測。這是由于患者尿微量白蛋白的排除量以及血清胱抑素C、尿視黃醇結合蛋白水平均隨著患者糖尿病腎病的進展呈現(xiàn)出明顯增加的趨勢。而尿液中足細胞水平的升高提示患者腎小球發(fā)生病變，當患者為微量白蛋白尿時，腎臟足細胞的密度明顯降低，一旦進展為大量蛋白尿時，腎臟足細胞密度降低更為明顯，因此尿足細胞的數(shù)量測定對2型糖尿病患者早期腎病的預測具有重要的臨床意義[16-18]。

綜上所述，2型糖尿病患者在出現(xiàn)腎損傷時，血清Hcy、CysC、RBP及尿足細胞水平明顯升高，因此四者聯(lián)合檢測對患者早期診斷有著重要意義。