甲狀腺癌組織中抗凋亡基因-1蛋白的表達(dá)水平及其臨床病理意義

梁 靚，唐錦玲

（江蘇省人民醫(yī)院病理科，江蘇 南京 210000）

甲狀腺癌是指起源于甲狀腺濾泡上皮的惡性腫瘤。早期甲狀腺癌患者多無明顯癥狀，中晚期甲狀腺癌患者隨著腫瘤體積的增大會逐漸出現(xiàn)呼吸困難、吞咽困難、聲音嘶啞、心動過速等癥狀[1-2]。近年來的大量研究顯示，惡性腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移不僅與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化有關(guān)，還與腫瘤細(xì)胞凋亡規(guī)律失常有關(guān)[3-5]。抗凋亡基因-1（BAG-1）是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的抗凋亡基因。有報(bào)道稱，BAG-1 蛋白可通過多種途徑參與腫瘤細(xì)胞的凋亡抑制，其表達(dá)水平與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有一定的相關(guān)性。國內(nèi)的研究顯示，BAG-1 蛋白在消化道腫瘤、淋巴造血系腫瘤等惡性腫瘤患者體內(nèi)的表達(dá)水平會明顯升高[6-7]。本文主要是研究甲狀腺癌組織中BAG-1 蛋白的表達(dá)水平及其臨床病理意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2018 年1 月至2020 年1 月期間我院病理科收集的69 份甲狀腺癌組織病理標(biāo)本、34 份癌旁甲狀腺組織標(biāo)本、35 份甲狀腺腺瘤組織標(biāo)本和30 份正常甲狀腺組織標(biāo)本作為研究對象。將其中69 份甲狀腺癌組織病理標(biāo)本作為研究組，將其中34 份癌旁甲狀腺組織標(biāo)本作為對照A 組，將其中35 份甲狀腺腺瘤組織標(biāo)本作為對照B 組，將其中30 份正常甲狀腺組織標(biāo)本作為對照C 組。研究組69 份甲狀腺組織標(biāo)本取自69 例患者〔年齡為45 ～63 歲，平均年齡為（52.78±3.78）歲〕；其中，取自男性患者和女性患者的甲狀腺組織標(biāo)本分別有31 份和38 份；病理分期為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期的甲狀腺組織標(biāo)本分別有27 份、21 份、16份和5 份；組織學(xué)分型為分化型癌和未分化型癌的甲狀腺組織標(biāo)本分別有53 份和16 份；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺組織標(biāo)本分別有18 份和51 份。對照A 組34 份甲狀腺組織標(biāo)本取自34 例患者〔年齡為45 ～63歲，平均年齡為（52.54±4.09）歲〕；其中，取自男性患者和女性患者的甲狀腺組織標(biāo)本各有17 份。對照B 組35 份甲狀腺組織標(biāo)本取自35 例患者〔年齡為46 ～64 歲，平均年齡為（53.78±4.11）歲〕；其中，取自男性患者和女性患者的甲狀腺組織標(biāo)本分別有18 份和17 份。對照C 組30 份甲狀腺組織標(biāo)本取自30 例患者，其年齡為44 ～62 歲，平均年齡為（52.65±3.98）歲；其中，取自男性患者和女性患者的甲狀腺組織標(biāo)本分別有16 份和14 份。四組甲狀腺組織標(biāo)本取自患者的年齡及性別相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

1.2 方法

采用免疫組化法檢測四組甲狀腺組織標(biāo)本中BAG-1 蛋白的表達(dá)水平，比較四組甲狀腺組織標(biāo)本中BAG-1 蛋白的陽性表達(dá)率，并采用Pearson 相關(guān)性分析法分析BAG-1基因的表達(dá)水平與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。對甲狀腺組織標(biāo)本中BAG-1 蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測的方法是：所用試劑為DAB 顯色試劑盒和羊抗兔SP 免疫組化染色試劑盒，用BAG-1 兔抗人多克隆抗體作為一抗，用已知BAG-1 呈陽性的扁桃體作為陽性對照。用10% 的福爾馬林溶液對甲狀腺組織標(biāo)本進(jìn)行固定，用石蠟對標(biāo)本進(jìn)行包埋，然后將其連續(xù)切成5 μm 的薄片。在60℃的溫度下對切面進(jìn)行2 h 的炙烤，儲存?zhèn)溆谩⑶衅撓炛了?7℃下用3% 的過氧化氫（H202）處理15 min，用微波修復(fù)抗原，加入山羊血清封閉。在切片中加入一抗，置于4℃的環(huán)境中過夜。在切片中加入用生物素標(biāo)記的二抗，用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）進(jìn)行顯色，用蘇木精復(fù)染后封片。以磷酸鹽緩沖液（PHS）代替一抗作為陰性空白對照。結(jié)果判斷：用400 倍的顯微鏡隨機(jī)觀察每張病理切片的10 個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200 個(gè)細(xì)胞，胞核內(nèi)或胞漿出現(xiàn)黃色顆粒且顏色明顯比背景染色深為陽性細(xì)胞，取10 個(gè)視野中陽性細(xì)胞的平均值作為該切片的陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞的比份，陽性細(xì)胞的比份超過5%表示BAG-1 蛋白呈陽性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 13.0 軟件處理本研究中的數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用%表示，用χ2 檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示，用t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較四組甲狀腺組織標(biāo)本中BAG-1 蛋白的陽性表達(dá)率

研究組甲狀腺組織標(biāo)本中BAG-1 蛋白的陽性表達(dá)率高于對照A 組、對照B 組與對照C 組甲狀腺組織標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。詳見表1。

2.2 甲狀腺癌組織中BAG-1 基因的表達(dá)水平與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

在這69 份甲狀腺癌組織標(biāo)本中，未分化型甲狀腺癌組織標(biāo)本中BAG-1 的陽性表達(dá)率高于分化型甲狀腺癌組織標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌組織標(biāo)本中BAG-1 的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌組織標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；病理分期為Ⅲ期、Ⅳ期的甲狀腺癌組織標(biāo)本中BAG-1 的陽性表達(dá)率高于病理分期為Ⅰ期、Ⅱ期的甲狀腺癌組織標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。詳見表2。通過進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析可知，甲狀腺癌組織中BAG-1 蛋白的表達(dá)水平與甲狀腺癌的組織學(xué)分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與病理分期呈顯著正相關(guān)（P ＜0.05）。

3 討論

甲狀腺癌在臨床上較為常見。此病患者約占惡性腫瘤患者總數(shù)的1%。近年來我國甲狀腺癌的發(fā)病率以每年遞增20% 左右的速度持續(xù)增長[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展不僅取決于腫瘤細(xì)胞的增殖，還與腫瘤細(xì)胞的凋亡有關(guān)[9]。BAG-1 是臨床上在對B 淋巴細(xì)胞瘤-2 基因（Bcl-2）結(jié)合的各類蛋白進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)的另一種凋亡抑制基因。Emmanouil 等[9]研究指出，人表皮生長因子受體2（HER2）呈陽性的乳腺癌患者體內(nèi)BAG-1 蛋白的表達(dá)水平顯著升高。這說明，BAG-1 蛋白的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。BAG-1 蛋白是一個(gè)與細(xì)胞凋亡相關(guān)的多功能蛋白，有多種亞型，可通過與大量的細(xì)胞靶點(diǎn)相互作用來實(shí)現(xiàn)抗細(xì)胞凋亡的作用[10]。BAG-1 蛋白在與Bcl-2 結(jié)合后，可共同起到抑制細(xì)胞凋亡的作用。BAG-1 蛋白在與多種生長因子受體結(jié)合后，可促進(jìn)生長因子的表達(dá)，提高細(xì)胞的增殖能力。Kizilboga 等[11]研究指出，若BAG-1 蛋白過度表達(dá)，會抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。本研究的結(jié)果顯示，研究組甲狀腺組織標(biāo)本中BAG-1蛋白的陽性表達(dá)率高于其他三組甲狀腺組織標(biāo)本。這表明，BAG-1 蛋白在甲狀腺癌組織中存在高表達(dá)的現(xiàn)象，BAG-1蛋白與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。BAG-1 蛋白表達(dá)水平的升高可增強(qiáng)與細(xì)胞靶點(diǎn)的相互作用，抑制癌細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖/ 凋亡的平衡遭到破壞，使癌細(xì)胞異常存活，進(jìn)而累積形成優(yōu)勢克隆，促進(jìn)甲狀腺癌的發(fā)展。本研究的結(jié)果顯示，惡性程度高的未分化型甲狀腺癌組織標(biāo)本中BAG-1 的陽性表達(dá)率高于惡性程度低的分化型甲狀腺癌組織標(biāo)本，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌組織標(biāo)本中BAG-1的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌組織標(biāo)本，病理分期為Ⅲ期、Ⅳ期的甲狀腺癌組織標(biāo)本中BAG-1 的陽性表達(dá)率高于病理分期為Ⅰ期、Ⅱ期的甲狀腺癌組織標(biāo)本。這說明，甲狀腺癌組織中BAG-1 蛋白的表達(dá)水平與甲狀腺癌的臨床病理參數(shù)呈正相關(guān)

綜上所述，甲狀腺癌組織中BAG-1 蛋白的表達(dá)水平較高，且其表達(dá)水平與甲狀腺癌的臨床病理參數(shù)呈顯著正相關(guān)。甲狀腺癌組織中BAG-1 蛋白的表達(dá)水平可作為反映甲狀腺癌惡性程度和預(yù)后的重要參數(shù)。