• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    分子標記技術(shù)在藥用植物上的應(yīng)用現(xiàn)狀與金錢草的研究進展

    2021-12-03 10:59:12鄭子洪周曼佳何祥玉羅佳雯程汝濱
    農(nóng)技服務(wù) 2021年3期
    關(guān)鍵詞:標記技術(shù)金錢草葉綠體

    鄭子洪, 周曼佳, 何祥玉, 羅佳雯, 程汝濱*

    (1.浙江九龍山國家級自然保護區(qū)管理中心, 浙江 遂昌 323300; 2.浙江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院, 浙江 杭州 310053)

    藥用植物種質(zhì)資源是保障其可持續(xù)發(fā)展的核心,也是中醫(yī)藥發(fā)展的基礎(chǔ),但是隨著社會需求的迅速增長,導(dǎo)致藥用植物資源過度消耗,同時市場上也存在許多混偽品摻雜的現(xiàn)象,嚴重影響藥用植物的臨床用藥效果。因此,尋找高效穩(wěn)定的方法,對藥用植物及其混偽品進行鑒別,以推動藥用植物的可持續(xù)發(fā)展需求迫切。分子標記技術(shù)作為一項速度快、特異性強和靈敏度高的技術(shù),可快速準確地鑒別植物品種及促進其系統(tǒng)發(fā)育分析等方面的深入研究。ZHOU等[1]基于掌葉大黃、藥用大黃和唐古特大黃的葉綠體基因組開發(fā)出潛在DNA條形碼并成功驗證,為超級DNA條形碼在大黃中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。植物葉綠體基因組全序列具有獨特的高度保守結(jié)構(gòu),因其堿基替換率低、單親本遺傳特性使其在植物的系統(tǒng)分類、品種鑒定和系統(tǒng)發(fā)育分析中具有特殊的優(yōu)勢。CHEN等[2]研究表明,6種橐吾屬植物的全基因組可能成為有效鑒定其物種的超級條形碼。金錢草為植物過路黃的干燥全草,具有清熱解毒,利尿排石,活血散瘀之功效,可治療肝膽結(jié)石、膽囊炎和水腫等。目前,藥材市場上的藥材品種繁多,同名異物等現(xiàn)象導(dǎo)致其質(zhì)量不高,各物種原植物形態(tài)、藥材性狀方面極為相似,近緣混偽品較多、真?zhèn)坞y辨,造成藥材質(zhì)量不穩(wěn)定。為同類研究及臨床應(yīng)用提供依據(jù),概述了DNA條形碼、限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)和擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)等方面概述了分子標記技術(shù)在藥用植物研究上的應(yīng)用及金錢草的地方習(xí)用品與市場混用品、化學(xué)成分和藥理作用等的研究進展,并展望了其未來的研究方向。

    1分子標記技術(shù)在藥用植物上的應(yīng)用現(xiàn)狀

    DNA分子標記具有分布范圍廣、標記數(shù)量多、性狀穩(wěn)定且選擇便利、操作簡單和檢測迅速等優(yōu)點,近年來已廣泛應(yīng)用于藥用植物的分析鑒定。目前,分子標記技術(shù)對藥用植物研究提供了技術(shù)保證,其種類已有10余種,如DNA條形碼、限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)、擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)、單核苷酸多態(tài)性(SNP)和簡單重復(fù)序列(SSR)等,給藥用植物研究提供技術(shù)保證。而葉綠體基因序列具有獨特的高度保守結(jié)構(gòu),比傳統(tǒng)的DNA條形碼具有更強的分辨力和更好的通用性,具備成為物種鑒定超級條形碼的潛力。

    1.1DNA條形碼

    DNA條形碼(DNA barcoding)是通過利用一段短的、較保守的標準DNA序列進行物種鑒定的分子技術(shù),其優(yōu)點是操作簡單、能快速準確鑒別大量樣本、結(jié)果不受外界環(huán)境影響等,實現(xiàn)藥用植物的快速準確鑒定,推動了DNA條形碼技術(shù)在藥用植物方面的應(yīng)用,是藥用植物分子鑒定方法上的重大創(chuàng)新[3]。近年來,DNA條形碼技術(shù)在藥用植物各方面的應(yīng)用越來越廣泛。INTHARUKSA等[4]研究發(fā)現(xiàn),條形碼基因rbcL、ITS、ITS1和ITS2與psbA-trnH的組合可以準確區(qū)分不同的訶子屬藥用植物,且ITS2與psbA-trnH的DNA條形碼組合鑒別效果最好。張宏意等[5]研究發(fā)現(xiàn),psbA-trnH序列分析可從分子水平上對德慶道地種源何首烏與其他種源何首烏進行有效鑒定和區(qū)分。JIN等[6]對400種蘭科植物DNA序列分析并結(jié)合聚類分析結(jié)果表明, rbcL可單獨或結(jié)合其他基因片段用于蘭科植物的遺傳多樣性研究,且蘭科植物的遺傳多樣性豐富。

    1.2限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)

    限制性片段長度多態(tài)性(Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP)是一種以DNA-DNA雜交為基礎(chǔ)的第一代遺傳標記。該技術(shù)由于等位基因呈共顯性,且標記數(shù)量多和穩(wěn)定性高,已廣泛應(yīng)用于藥用植物鑒定和親緣關(guān)系分析等。梁晉軍等[7]對柿及其親緣植物關(guān)系分析發(fā)現(xiàn),柿與金棗柿的親緣關(guān)系最緣,與美洲柿和烏柿的親緣關(guān)系較遠。SHI等[8]基于105種白頭翁屬植物和其常見摻假物的植物樣品,建立ITS2條碼庫,并開發(fā)出快速特異性PCR-RFLP鑒定檢測方法,為快速鑒別市售白頭翁產(chǎn)品提供技術(shù)支撐,有助于保證其中藥產(chǎn)品的安全使用。

    1.3擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)

    擴增片段長度多態(tài)性(Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP)是RFLP和PCR技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物,其特點是在知道DNA信息的條件下,專用引物能準確地對酶切片段進行PCR擴增,AFLP具有分辨率高、穩(wěn)定性好且靈敏度高的優(yōu)點可用于亞種分化和種間關(guān)系的研究。劉曉瑩等[9]對212個廣藿香樣本進行AFLP分析顯示,廣藿香種間具有較為豐富的遺傳多樣性,種內(nèi)遺傳多樣性相對較小,種間遺傳分化顯著,可為廣藿香優(yōu)良種質(zhì)的篩選等研究提供參考依據(jù)。蘇增一等[10]對不同產(chǎn)地益智樣本進行AFLP-PCR擴增,篩選出4對適合于益智AFLP分析的引物,且E3/M7引物組合效果最佳,能夠鑒定不同產(chǎn)地益智的種質(zhì)資源。

    1.4單核苷酸多態(tài)性(SNP)

    單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism, SNP)主要指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性,這是一種檢測遺傳多樣性和保護育種者權(quán)利的有用的基因分型工具,可用于藥用植物的道地性評價,有望成為最有效的分子標記技術(shù)。喬東亞等[11]以85份紫薇種質(zhì)為樣本材料進行簡化基因組測序,篩選出高質(zhì)量的SNP標記,獲得SNP分型數(shù)據(jù),紫薇種質(zhì)資源遺傳多樣性豐富,不同類群間存在較高的基因流。WANG等[12]通過檢測的單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點設(shè)計2個經(jīng)過修飾的特異性引物,用于陳皮和果皮的多重等位基因特異PCR系統(tǒng)鑒定。SNP分析在藥用植物物種鑒定,道地性和遺傳多樣性研究等方面的應(yīng)用前景廣闊。

    1.5簡單重復(fù)序列(SSR)

    簡單重復(fù)序列(Simple sequence repeat, SSR)又稱微衛(wèi)星標記,是指基因組中由1~6個核苷酸為基本單位,經(jīng)重復(fù)串聯(lián)多次構(gòu)成一段DNA重復(fù)序列。其優(yōu)點是數(shù)量多,重復(fù)性、信息量和多態(tài)性高。因而SSR通常應(yīng)用于分子指紋圖譜構(gòu)建、物種品種鑒定和分子輔助育種等。劉亞令等[13]對380個黃芪樣本進行SSR遺傳多樣性及結(jié)構(gòu)分析顯示,藥用黃芪具有較高程度的遺傳多樣性水平,且2種黃芪的遺傳變異主要發(fā)生在居群內(nèi)部,為藥用黃芪種質(zhì)資源的有效利用、遺傳多樣性保護、育種及開發(fā)優(yōu)質(zhì)黃芪種質(zhì)資源提供一定的理論基礎(chǔ)。LU等[14]利用EST-SSR和SRAP技術(shù)構(gòu)建鐵皮石斛和杜仲雜種圖譜,為遺傳學(xué)研究提供了基礎(chǔ),并有助于石斛品種育種計劃中醫(yī)學(xué)性狀的定位和標記輔助選擇研究?;赟SR分子標記構(gòu)建的指紋圖譜及遺傳多樣性研究,可為藥用植物種質(zhì)資源的深入研究奠定基礎(chǔ)。

    1.6葉綠體全序列分析

    葉綠體基因組是葉綠體內(nèi)相對獨立的遺傳物質(zhì),由于其高度保守性、進化速率較慢的特性,使其成為不同物種間的分類鑒定研究的重要工具,為后期藥用植物新條形碼的開發(fā)提供了條件。近期有研究發(fā)現(xiàn),葉綠體在藥用植物方面的應(yīng)用有道地性遺傳研究、物種鑒定以及系統(tǒng)發(fā)育等,也可用于篩選出高變區(qū)作為潛在的分子標記。姜丹[15]研究表明,在不同地區(qū)黃芩中,黃芩道地產(chǎn)區(qū)的遺傳多樣性高于非道地產(chǎn)區(qū),且道地產(chǎn)區(qū)是黃芩的遺傳多樣性中心,可對黃芩及其他道地藥材的可持續(xù)利用提供依據(jù)。張明英等[16]比對分析了10種柴胡屬葉綠體基因組結(jié)果表明,葉綠體全基因組可準確鑒定柴胡屬植物。CHEN等[17]基于16種葉綠體基因組構(gòu)建的ML和MP進化樹,可有效鑒別3種麻黃屬植物,表明葉綠體基因組具有成為物種鑒定超級條形碼的潛力;同時發(fā)現(xiàn),麻黃屬植物與買麻藤屬植物、百歲蘭具有更近的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。TAN等[18]從皂莢和山皂莢的130個基因中鑒定出SSC區(qū)域的ycf1b核苷酸變異性最高,明顯高于植物通用標記區(qū)域rbcL、ndhF、rpl16、trnL-trnF、trnL intron、psbA-trnH和matK,揭示ycf1b作為DNA條形碼候選區(qū)域的潛能。利用葉綠體基因組以開發(fā)新的DNA條形碼,可提高金錢草及其他藥用植物質(zhì)量鑒定的有效性和準確性,可促進其系統(tǒng)發(fā)育及道地性研究。

    分子標記技術(shù)的快速發(fā)展和葉綠體全序列的深入研究,對于藥用植物資源的研究影響較大。除前述幾種常見標記技術(shù)外,還有RAPD、ISSR、SRAP、CAPS和STS等分子標記技術(shù)也在藥用植物各方面的研究中具有重要的技術(shù)支撐作用。分子標記間各有優(yōu)勢與不足,與AFLP、RAPD等技術(shù)相比,SSR和ISSR具有多態(tài)性更高更豐富,表明單一的某種標記技術(shù)在藥用植物研究領(lǐng)域的局限性。多種技術(shù)的結(jié)合產(chǎn)生的新的標記技術(shù)使得藥用植物資源研究更加準確和全面,分子鑒定在理論和方法上日趨成熟。

    2金錢草的研究

    正品金錢草藥材為報春花科珍珠菜屬植物過路黃(LysimachiachristinaeHance)的干燥全草,又名大金錢草、對座草、路邊黃和遍地黃等,味苦,酸,微寒。具有清熱解毒、利尿排石和活血散淤等功能。近年來,中藥材市場銷售及臨床應(yīng)用上經(jīng)常發(fā)現(xiàn)金錢草地方習(xí)用品和混用品被當作金錢草正品藥材使用,造成金錢草質(zhì)量和安全性得不到保障,給臨床應(yīng)用造成安全隱患,降低其治療效果。

    2.1地方習(xí)用品與市場混用品

    全國各地金錢草地方習(xí)用品和市場混用品眾多,因此識別主要地方金錢草習(xí)用品和混用品,才能正確區(qū)分鑒別正品金錢草。在市場上除金錢草正品外,其地方習(xí)用品和混用品眾多,據(jù)不完全統(tǒng)計,目前至少有7科14種植物被作為金錢草在各地使用,常見的地方習(xí)用品和混用品包括點腺過路黃、天胡荽、活血丹、廣金錢草、馬蹄金和積雪草。近年研究發(fā)現(xiàn),其同屬植物聚花過路黃和巴東過路黃等也作為金錢草偽品在市場上流通。

    點腺過路黃為報春花科植物點腺過路黃的全草,因其性味歸經(jīng)和功能主治與正品金錢草相似,在浙江地區(qū)作金錢草使用。天胡荽及其變種白毛天胡荽,為傘形科植物天胡荽的全草,又稱破銅錢,在江西地區(qū)被當作金錢草使用,功效更偏向治痢疾,利水作用強,可治目翳。活血丹為唇形科植物活血丹的干燥地上部分,又稱大葉金錢草和連錢草,在上海和江蘇地區(qū)作為金錢草地方習(xí)用品。這是因為其生境與藥效與過路黃相似,也常生于路邊荒地濕氣大的地方,可利水通淋治結(jié)石。廣金錢草是豆科植物,其地上部分在湖南及兩廣地區(qū)作為金錢草混用品使用,其在治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石方面效果更佳。馬蹄金為旋花科植物馬蹄金的全草,又稱小金錢草,在永州地區(qū)作金錢草混用品使用,其功效與金錢草的最大差別是馬蹄金對結(jié)石無治療作用。積雪草為傘形科植物積雪草的全草,在湖南永順地區(qū)為金錢草混用品,與金錢草相比,積雪草在清熱解毒方面效果更好。聚花過路黃和巴東過路黃與金錢草來源于同科同屬,是金錢草的混偽品,因其形態(tài)相似,在四川地區(qū)易被當作金錢草使用。金錢草習(xí)用品和混用品與金錢草正品存在較多方面的不同,兩者混淆使用會對金錢草的臨床應(yīng)用造成隱患。因此,迫切需要尋找快速鑒別不同地區(qū)金錢草習(xí)用品和混用品的方法。

    2.2化學(xué)成分

    金錢草的功效與其化學(xué)成分組成相關(guān),金錢草的初步分析得出其含有酚類、黃酮類、甙類、鞣質(zhì)、揮發(fā)油、氨基酸、膽堿、甾醇、氯化鉀和內(nèi)脂類等成分,其中黃酮類化合物研究較為深入[19]。沈聯(lián)德等[20]從金錢草分離得到六個黃酮類化合物,此外,還分離出兩種無機鹽結(jié)晶,檢驗出其中具有硝酸鹽的存在。趙世萍[21]等還分離出尿嘧啶和對羥基苯甲酸。侯冬巖[22]等用水蒸氣-萃取法提取金錢草揮發(fā)性成分發(fā)現(xiàn)主要為樟腦、山奈酚和石竹烯醇等。

    2.3藥理作用

    金錢草的藥理作用廣泛,具有利尿通淋、除濕退黃等功效,其對治療肝膽結(jié)石效果顯著,是治結(jié)石之要藥。YANG等[23]研究發(fā)現(xiàn),金錢草提取物體內(nèi)具有明顯的抗膽囊炎和利膽活性。金錢草還具有利尿[24]和鎮(zhèn)痛[25]作用。王萍等[26]采用體外模擬的技術(shù),使用 SEM,F(xiàn)T-IR和 XRD等檢測方法對提取的晶體研究發(fā)現(xiàn),金錢草具有排石作用。此外,金錢草還具有抗氧化和抗菌等藥理活性[27]。金錢草藥理作用的深入研究,不僅有利于金錢草的臨床治療應(yīng)用,還為金錢草藥品開發(fā)方向和提高利用效率提供科學(xué)依據(jù)。

    2.4臨床應(yīng)用

    金錢草在中醫(yī)臨床上應(yīng)用廣泛,常用于治療結(jié)石、黃疸型肝炎、慢性前列腺炎、尿潴留和慢性膽囊炎等[28]。據(jù)文獻記載,諸多排石中藥配方中金錢草均為君藥,是治療結(jié)石(膀胱結(jié)石、膽囊結(jié)石等)的有效中草藥。齊鵬[29]研究表明,以金錢草為主藥,對急性黃疸型肝炎、慢性前列腺炎、慢性膽囊炎和尿潴留4種病癥進行治療,其治愈率高。金錢草臨床應(yīng)用范圍極廣,藥用價值極高,具有安全性高、價格實惠、資源豐富等特點,應(yīng)當加強對金錢草臨床應(yīng)用的研究,充分發(fā)揮其醫(yī)療功效。

    2.5產(chǎn)品開發(fā)

    金錢草藥品因其良好功效在市場上銷售應(yīng)用廣泛,據(jù)統(tǒng)計,約有99種中成藥中使用金錢草。此外,為提高金錢草的臨床治療效果,有以金錢草藥劑配伍其他中成藥的治療效果良好。其中,中成藥中藥金錢草沖劑具有清熱解毒和利尿排石作用,既可清熱利濕,又可解毒通淋,同時可減少晶體形成,對于膀胱濕熱、尿路感染、尿路結(jié)石和腎絞痛等有良好的輔助治療作用。復(fù)方金錢草顆粒具有清熱祛濕,利尿排石,消炎止痛,用于治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石和尿路感染等[30]。氧氟沙星與金錢草沖劑聯(lián)合治療尿路感染和復(fù)雜性尿路感染,可顯著提高治療的有效率[31]。清熱利膽片組方中的金錢草具有清熱利膽功效,適用于急性單純性膽囊炎、輕度化膿性膽囊炎、急性膽源性胰腺炎、膽管炎和膽道術(shù)后綜合征等[32]。金錢草開發(fā)應(yīng)用較廣,其制成的中成藥較多,市場銷售量大,是良好的中成藥制備藥材,但由于其習(xí)用品和混用品的存在藥品質(zhì)量降低,應(yīng)探究其更好的鑒別技術(shù),以提高金錢草藥品在臨床上的應(yīng)用效果。

    3展望

    分子標記技術(shù)和葉綠體全序列在現(xiàn)代藥用植物種質(zhì)資源與道地性評價、親緣關(guān)系分析與正偽品鑒定等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,有利于促進中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。但是,多數(shù)分子標記方法耗時耗力,不利于推廣和實際應(yīng)用,且在DNA的研究中,使用的基因片段多為ITS、matK、rbcL和psbA-trnH等,對其新型片段的開發(fā)應(yīng)用較少,仍無法對部分疑難物種進行鑒別[33]。因此,后續(xù)研究應(yīng)建立省時省力、節(jié)約成本的分子標記技術(shù),同時更加注重特異性強的位點或片段,以開發(fā)出新型片段。同時,金錢草藥用價值高,但其市售質(zhì)量參差不齊,且金錢草及其習(xí)用品和混偽品的臨床應(yīng)用存在差異,濫用可能會造成不良影響,其常見鑒別方式有性狀鑒別、顯微和薄層色譜,但易受技術(shù)及條件等的影響,鑒別效率不高。因此,亟待探尋高效準確的方法對金錢草及其習(xí)用品和混用品的質(zhì)量進行鑒別。以期分子標記技術(shù)結(jié)合葉綠體全序列分析技術(shù)能夠探尋出金錢草的特征性DNA片段,利用其對金錢草及其混偽品進行快速區(qū)分,提高鑒定準確性,為臨床用藥和后續(xù)應(yīng)用提供指導(dǎo)。

    猜你喜歡
    標記技術(shù)金錢草葉綠體
    Las semillas de cuscuta y la lisimaquia
    金錢草醇提水沉工藝的優(yōu)化
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:28
    施肥水平對金錢草產(chǎn)量和質(zhì)量的影響
    金錢草外敷治腮腺炎
    南方紅豆杉葉綠體非編碼序列PCR體系優(yōu)化及引物篩選
    DNA分子標記技術(shù)在柑橘研究中的應(yīng)用
    浙江柑橘(2016年3期)2016-03-11 20:12:48
    RAPD分子標記技術(shù)和ITS同源性分析比較不同生態(tài)環(huán)境來源的鈍頂螺旋藻的遺傳多樣性
    三種不同分子標記技術(shù)對靈芝單核體多態(tài)性的研究
    分子標記技術(shù)及其在茶樹育種中的研究進展
    茶葉通訊(2014年3期)2014-02-27 07:55:43
    茶樹葉綠體DNA的PCR-RFLP反應(yīng)體系優(yōu)化
    综合色丁香网| 国国产精品蜜臀av免费| 精品酒店卫生间| 老司机影院毛片| 日韩一区二区视频免费看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 韩国av在线不卡| 麻豆成人午夜福利视频| 在线免费十八禁| 一本一本综合久久| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲色图综合在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日韩成人av中文字幕在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 久久99蜜桃精品久久| 午夜福利高清视频| 免费av不卡在线播放| 尾随美女入室| 国产又色又爽无遮挡免| tube8黄色片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产91av在线免费观看| 伊人久久国产一区二区| 日韩视频在线欧美| 亚洲第一av免费看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 中文在线观看免费www的网站| 国产乱人偷精品视频| 亚洲国产精品国产精品| av在线老鸭窝| 联通29元200g的流量卡| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日韩国内少妇激情av| 国产精品女同一区二区软件| h视频一区二区三区| 国产精品女同一区二区软件| 精品久久久久久久久av| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美最新免费一区二区三区| www.av在线官网国产| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 直男gayav资源| 丝瓜视频免费看黄片| 免费在线观看成人毛片| 韩国高清视频一区二区三区| 久久久久精品性色| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久久国产网址| 一本久久精品| 亚洲综合色惰| 多毛熟女@视频| 美女中出高潮动态图| 99国产精品免费福利视频| 一本一本综合久久| 成人无遮挡网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久国内精品自在自线图片| 性色avwww在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久精品夜色国产| 秋霞在线观看毛片| 成年免费大片在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | kizo精华| av专区在线播放| 青春草视频在线免费观看| 91精品国产九色| 麻豆乱淫一区二区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久久色成人| 最后的刺客免费高清国语| 91精品伊人久久大香线蕉| 嫩草影院入口| 国产成人免费无遮挡视频| 久久6这里有精品| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久久精品94久久精品| 亚洲欧洲日产国产| 我要看日韩黄色一级片| 我要看日韩黄色一级片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 嫩草影院新地址| 成人特级av手机在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产免费一区二区三区四区乱码| 美女福利国产在线 | 久久久久久人妻| 亚洲不卡免费看| 亚洲第一av免费看| 在线观看免费视频网站a站| 熟女av电影| 高清视频免费观看一区二区| 99国产精品免费福利视频| 99国产精品免费福利视频| 久久久久国产网址| 国产高清不卡午夜福利| 高清黄色对白视频在线免费看 | 男的添女的下面高潮视频| 日本av免费视频播放| 日韩大片免费观看网站| 日韩三级伦理在线观看| 成人国产av品久久久| 国产老妇伦熟女老妇高清| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品女同一区二区软件| 久久ye,这里只有精品| 伦理电影免费视频| 久久青草综合色| 国模一区二区三区四区视频| 久久 成人 亚洲| 夫妻午夜视频| 国产精品女同一区二区软件| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久97久久精品| 99久久综合免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲国产精品一区三区| 久久综合国产亚洲精品| 一级毛片电影观看| 18禁在线播放成人免费| 一区二区三区四区激情视频| 插阴视频在线观看视频| 亚洲四区av| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲国产精品国产精品| 一个人免费看片子| 麻豆成人av视频| 久久鲁丝午夜福利片| 免费av不卡在线播放| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲国产精品一区三区| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产爽快片一区二区三区| 少妇的逼水好多| 欧美人与善性xxx| 亚洲欧美精品自产自拍| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 黑人猛操日本美女一级片| 黄色配什么色好看| 欧美xxⅹ黑人| 精品久久久久久久久亚洲| 中国三级夫妇交换| 精品久久国产蜜桃| 亚洲高清免费不卡视频| 久久精品国产亚洲网站| 99热这里只有是精品50| 少妇高潮的动态图| 一区二区三区精品91| 国产成人91sexporn| 成人影院久久| 成年人午夜在线观看视频| 99久久人妻综合| 国产精品国产av在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲国产欧美在线一区| 午夜福利视频精品| 久久99热6这里只有精品| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产久久久一区二区三区| 尾随美女入室| 日韩av不卡免费在线播放| 各种免费的搞黄视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 老司机影院成人| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲色图av天堂| 又大又黄又爽视频免费| 观看美女的网站| 啦啦啦啦在线视频资源| 成年女人在线观看亚洲视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 黄片无遮挡物在线观看| 国产精品免费大片| 精品久久久精品久久久| 成年av动漫网址| 精品一品国产午夜福利视频| 成人免费观看视频高清| 婷婷色麻豆天堂久久| 中国三级夫妇交换| 久久 成人 亚洲| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 人体艺术视频欧美日本| 一区在线观看完整版| a级毛片免费高清观看在线播放| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲第一区二区三区不卡| 日本vs欧美在线观看视频 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲国产最新在线播放| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲人成网站在线观看播放| 在线看a的网站| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 18禁在线播放成人免费| 简卡轻食公司| 欧美97在线视频| 欧美三级亚洲精品| 我的女老师完整版在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 97精品久久久久久久久久精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久久久九九精品二区国产| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 成人免费观看视频高清| 久久久久久伊人网av| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久久久久人妻| 91狼人影院| 黄片无遮挡物在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 日本黄色片子视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品无大码| 国产精品人妻久久久影院| 日本欧美国产在线视频| 少妇精品久久久久久久| 免费av不卡在线播放| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久久久久久精品精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲在久久综合| 日本色播在线视频| 嫩草影院新地址| 欧美3d第一页| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 黄片wwwwww| 91精品国产国语对白视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 91狼人影院| 久久国产乱子免费精品| 免费观看性生交大片5| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 色综合色国产| 视频区图区小说| 插阴视频在线观看视频| 少妇精品久久久久久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久精品94久久精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩一本色道免费dvd| 搡老乐熟女国产| 超碰97精品在线观看| 国产精品.久久久| 99热网站在线观看| 国内精品宾馆在线| 国产久久久一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 简卡轻食公司| 久久毛片免费看一区二区三区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 一级二级三级毛片免费看| 免费看av在线观看网站| 久热这里只有精品99| 看免费成人av毛片| 久久99热这里只有精品18| 99久久综合免费| 少妇精品久久久久久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 在线看a的网站| 亚洲怡红院男人天堂| 青青草视频在线视频观看| 婷婷色av中文字幕| av天堂中文字幕网| 欧美精品国产亚洲| 久久人人爽人人片av| 91狼人影院| 最黄视频免费看| 午夜福利影视在线免费观看| 97在线人人人人妻| 亚洲av二区三区四区| 亚洲伊人久久精品综合| 精品久久久久久久末码| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲成色77777| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 免费观看的影片在线观看| 久热这里只有精品99| 久久久午夜欧美精品| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日韩成人av中文字幕在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 欧美xxⅹ黑人| 一级二级三级毛片免费看| 国产在线一区二区三区精| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 男人狂女人下面高潮的视频| 免费大片黄手机在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 午夜激情福利司机影院| 黄色一级大片看看| 高清日韩中文字幕在线| 久久久久精品性色| 91狼人影院| 大码成人一级视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 少妇高潮的动态图| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产 精品1| 国产毛片在线视频| 一区二区av电影网| 一本一本综合久久| 97在线人人人人妻| 亚洲电影在线观看av| 一边亲一边摸免费视频| 麻豆成人午夜福利视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 制服丝袜香蕉在线| 一级a做视频免费观看| 一级av片app| 免费观看av网站的网址| 黑人猛操日本美女一级片| 超碰97精品在线观看| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品人妻久久久影院| 成人二区视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 各种免费的搞黄视频| 下体分泌物呈黄色| 国产伦理片在线播放av一区| 少妇人妻久久综合中文| 国产亚洲精品久久久com| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久99蜜桃精品久久| av国产久精品久网站免费入址| 成人综合一区亚洲| 国产黄频视频在线观看| 亚洲成人手机| h视频一区二区三区| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲,一卡二卡三卡| 高清在线视频一区二区三区| 国产成人精品久久久久久| 精品一区在线观看国产| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美xxⅹ黑人| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产av精品麻豆| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品久久久久久精品古装| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 99久久精品热视频| 各种免费的搞黄视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 欧美3d第一页| 精品熟女少妇av免费看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| av福利片在线观看| 一级片'在线观看视频| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲三级黄色毛片| av在线观看视频网站免费| 能在线免费看毛片的网站| 内射极品少妇av片p| 97在线视频观看| 久久久久久人妻| 国产高潮美女av| 日韩强制内射视频| 香蕉精品网在线| 成人毛片60女人毛片免费| 天美传媒精品一区二区| 免费人成在线观看视频色| 91久久精品电影网| 99久久综合免费| 人妻一区二区av| 五月玫瑰六月丁香| 如何舔出高潮| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 美女内射精品一级片tv| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产亚洲欧美精品永久| 婷婷色av中文字幕| 22中文网久久字幕| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲伊人久久精品综合| 在现免费观看毛片| h视频一区二区三区| www.色视频.com| 香蕉精品网在线| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲色图综合在线观看| 久久久精品免费免费高清| 最新中文字幕久久久久| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 毛片一级片免费看久久久久| kizo精华| 日日撸夜夜添| 91精品国产九色| 亚洲真实伦在线观看| 插阴视频在线观看视频| 十八禁网站网址无遮挡 | 国产视频首页在线观看| 一个人免费看片子| 免费观看a级毛片全部| 国产成人aa在线观看| 亚洲成色77777| 国产视频首页在线观看| 一级爰片在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲欧美精品自产自拍| 嫩草影院入口| 国产伦精品一区二区三区四那| 爱豆传媒免费全集在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一区二区三区精品91| 最近的中文字幕免费完整| 九九在线视频观看精品| 久久韩国三级中文字幕| 十八禁网站网址无遮挡 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产久久久一区二区三区| 国产极品天堂在线| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲色图av天堂| 嫩草影院新地址| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久久久久久大尺度免费视频| 边亲边吃奶的免费视频| 国产成人免费无遮挡视频| 免费看不卡的av| 中文字幕av成人在线电影| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 少妇精品久久久久久久| 成人国产麻豆网| 成年免费大片在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 六月丁香七月| 99re6热这里在线精品视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 国产一级毛片在线| 国产爱豆传媒在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 欧美人与善性xxx| 国产高清国产精品国产三级 | 国产精品一及| 日本黄色片子视频| 欧美精品一区二区大全| 春色校园在线视频观看| 亚洲经典国产精华液单| 国产高清不卡午夜福利| 一级毛片久久久久久久久女| 97超碰精品成人国产| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 丝瓜视频免费看黄片| 婷婷色综合大香蕉| 国产亚洲一区二区精品| 久久精品人妻少妇| 99久国产av精品国产电影| 欧美最新免费一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 国产精品国产av在线观看| 高清av免费在线| 观看免费一级毛片| 亚洲av成人精品一二三区| 中文字幕免费在线视频6| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产乱来视频区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 五月天丁香电影| 身体一侧抽搐| 亚洲精品日本国产第一区| 精品熟女少妇av免费看| 久久午夜福利片| 看十八女毛片水多多多| 久久97久久精品| 日韩国内少妇激情av| 丰满迷人的少妇在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 国产亚洲91精品色在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 日韩三级伦理在线观看| 少妇精品久久久久久久| 少妇人妻久久综合中文| 久久精品国产a三级三级三级| 精品人妻视频免费看| 久久国内精品自在自线图片| 91狼人影院| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 我的老师免费观看完整版| 嫩草影院入口| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久久久久精品精品| 欧美+日韩+精品| 视频中文字幕在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 午夜激情久久久久久久| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 免费大片18禁| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产精品一及| 亚洲第一av免费看| 一级片'在线观看视频| 精品一品国产午夜福利视频| 日韩强制内射视频| 亚洲国产精品999| 天堂8中文在线网| 国产成人freesex在线| 毛片一级片免费看久久久久| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久 成人 亚洲| 亚洲中文av在线| 美女内射精品一级片tv| 亚洲av二区三区四区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲国产精品999| 嫩草影院新地址| 亚洲性久久影院| 久久99热这里只频精品6学生| 国产一区二区三区综合在线观看 | 一级毛片我不卡| 人体艺术视频欧美日本| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 精品熟女少妇av免费看| 六月丁香七月| 精品国产露脸久久av麻豆| 日本一二三区视频观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 91精品伊人久久大香线蕉| av天堂中文字幕网| 最后的刺客免费高清国语| 最近中文字幕2019免费版| 高清欧美精品videossex| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 一区在线观看完整版| 国产精品蜜桃在线观看| 日本色播在线视频| 国产v大片淫在线免费观看| 最黄视频免费看| 亚洲av不卡在线观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久久久久人妻| 99热网站在线观看| 国产高清三级在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品国产av在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 午夜视频国产福利| 国产亚洲最大av| 亚洲,欧美,日韩| 久久97久久精品| .国产精品久久| 日韩亚洲欧美综合| 我的老师免费观看完整版| 秋霞在线观看毛片| 哪个播放器可以免费观看大片| 91精品国产国语对白视频| 五月开心婷婷网| 久久精品久久精品一区二区三区| 色综合色国产| 欧美zozozo另类| 欧美最新免费一区二区三区| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 韩国av在线不卡| 制服丝袜香蕉在线| 99久久精品国产国产毛片| 久久热精品热| 国产精品99久久99久久久不卡 | 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产伦在线观看视频一区| 一二三四中文在线观看免费高清| av天堂中文字幕网| 国产精品熟女久久久久浪| 婷婷色麻豆天堂久久| 成年av动漫网址| 大片电影免费在线观看免费| 中国美白少妇内射xxxbb| 在线观看免费高清a一片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 老司机影院成人| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 免费看日本二区| 少妇人妻久久综合中文| 成年女人在线观看亚洲视频| 天堂8中文在线网|