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    助陽補(bǔ)肺除痹顆粒治療間質(zhì)性肺疾病機(jī)理研究

    2021-12-02 13:18:16袁成波
    吉林中醫(yī)藥 2021年11期
    關(guān)鍵詞:助陽間質(zhì)性肺纖維化

    袁成波,王 檀

    (長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院肺病科,長春 130021)

    間質(zhì)性肺疾病是呼吸系統(tǒng)中難治疾病,其發(fā)病率有逐年增高的趨勢,目前西醫(yī)治療藥物局限[1]?!爸栄a(bǔ)肺除痹顆?!笔窃陂L春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科多年治療間質(zhì)性肺炎、肺纖維化、“肺痹”的臨床實踐中,對“陽和湯”加減應(yīng)用,并在此基礎(chǔ)上總結(jié)而成的經(jīng)驗方劑,主要用于肺痹急性發(fā)作。MUC5B啟動因子基因的多態(tài)性與間質(zhì)性肺疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān),特別是特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的易感因素[2]。本實驗通過動物造模后予助陽補(bǔ)肺除痹顆粒給藥,并將醋酸潑尼松作為陽性對照藥組,觀察對MUC5B 啟動因子的影響,探討助陽補(bǔ)肺除痹顆粒抗肺纖維化的作用機(jī)理,驗證助陽補(bǔ)肺除痹顆粒治療肺纖維化安全性、有效性[3]。報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 SPF 級Wistar 大鼠60 只,體質(zhì)量200~220 g,雌雄各半。

    1.2 藥品與試劑 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒:規(guī)格:每袋10 g,人用量:每次10 g,每日3 次,生產(chǎn)批號:20130301、20170201,由長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑中心提供;醋酸潑尼松片:規(guī)格:每片5 mg,每瓶100 片,國藥準(zhǔn)字H12020689,產(chǎn)品批號:1312041,天津天藥藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品;注射用鹽酸博來霉素,規(guī)格:1.5 萬USP/支,批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字H20055883,批號:海正輝瑞制藥有限公司產(chǎn)品。中性緩沖福爾馬林組織固定液,規(guī)格:10%,每桶 5 L,批號:20170205,備案號:吉長械備20150129,長春賽默瑞特科技有限公司產(chǎn)品。基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA 檢測試劑盒,批號:20170901A,美國R &D 公司產(chǎn)品。

    1.3 儀器 電子天平,可調(diào)高速勻漿器,臺式離心機(jī),酶標(biāo)儀。

    1.4 方法 SPF 級Wistar 大鼠60 只,按體質(zhì)量將大鼠隨機(jī)分為6組,每組10 只。分別為假手術(shù)組,模型組,陽性對照藥醋酸潑尼松(5 mg·kg-1·d-1)組,助陽補(bǔ)肺除痹顆粒設(shè)高劑量(9.28 g·kg-1·d-1)、中劑量(4.64 g·kg-1·d-1)和低劑量(2.32 g·kg-1·d-1)3 個給藥劑量組。給藥體積為15 mL·kg-1體質(zhì)量,假手術(shù)組及模型組給予同體積蒸餾水。

    1.5 肺纖維化模型復(fù)制方法 將各組大鼠分別自氣管內(nèi)注入鹽酸博來霉素,肺纖維化造模,建模后第2 天起每天灌胃給藥助陽補(bǔ)肺顆粒1 次。假手術(shù)組和肺纖維化模型組動物灌胃給予等體積蒸餾水。分別于造模后第7 天、第14 天和第28 天,每組隨機(jī)選取10 只動物做相關(guān)指標(biāo)檢測。

    1.6 檢測指標(biāo) 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺組織MUC5B 水平的影響,以及肺泡炎期、肺纖維化期病理變化的影響。大鼠分別于造模后第7 天、第14 天和第28 天給藥助陽補(bǔ)肺除痹顆粒后1 h,每組隨機(jī)選取10 只動物,處死后剖取右側(cè)肺組織,按每克肺組織加9 mL 生理鹽水,制成10%組織勻漿,3 000 rpm 離心10 min,取上清。采用酶聯(lián)免疫法(Elisa)檢測肺組織MUC5B 水平以及肺泡炎期、肺纖維化期病理變化的影響。結(jié)果以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差()表示,統(tǒng)計學(xué)處理方法采用組間t檢驗。

    2 結(jié)果

    2.1 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺組織MUC5B 水平的影響 模型組中,3 批動物肺組織中MUC5B啟動因子水平,明顯高于假手術(shù)組(P<0.01),醋酸潑尼松組動物及助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組,3 批動物肺組織中MUC5B 啟動因子水平明顯低于同期模型組(P<0.05,P<0.01),助陽補(bǔ)肺除痹顆粒中劑量組肺組織中MUC5B 啟動因子水平,明顯低于同期模型組(P<0.05,P<0.01),低劑量組動物肺組織中MUC5B 啟動因子水平,第28 天時明顯低于同期模型組(P<0.05)。見表1。

    表1 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺組織MUC5B 水平的影響(,n =10) (pg·mL-1)

    表1 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺組織MUC5B 水平的影響(,n =10) (pg·mL-1)

    注:與模型組比較,# P <0.05,## P <0.01

    2.2 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺泡炎病理學(xué)積分的影響 模型組中,3 批動物肺組織中肺泡炎的病理積分則明顯高于假手術(shù)組(P<0.01),醋酸潑尼松組動物及助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組3 批動物肺組織中肺泡炎的病理積分明顯低于同期模型組(P<0.05,P<0.01),助陽補(bǔ)肺除痹顆粒中劑量組肺組織中肺泡炎的病理積分明顯低于同期模型組(P<0.05,P<0.01),低劑量組動物肺組織中肺泡炎的病理積分第28 天時明顯低于同期模型組(P<0.05)。見表2。

    表2 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺泡炎病理學(xué)積分的影響(,n =10) 分

    表2 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺泡炎病理學(xué)積分的影響(,n =10) 分

    注:與模型組比較,# P <0.05,## P <0.01,### P <0.001

    2.3 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺纖維化病理學(xué)積分的影響 模型組中,3 批動物肺組織中肺纖維化的病理積分則明顯高于假手術(shù)組(P<0.01),醋酸潑尼松組動物及助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組3 批動物肺組織中肺纖維化的病理積分明顯低于同期模型組(P<0.05,P<0.01),助陽補(bǔ)肺除痹顆粒中劑量組肺組織中肺纖維化的病理積分明顯低于同期模型組(P<0.05,P<0.01),低劑量組動物肺組織中肺纖維化的病理積分第28 天時明顯低于同期模型組(P<0.05)。見表3。

    表3 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺纖維化病理學(xué)積分的影響(,n =10) 分

    表3 助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺纖維化病理學(xué)積分的影響(,n =10) 分

    注:與模型組比較,# P <0.05,### P <0.001

    實驗結(jié)果表明,觀察助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對肺纖維化模型大鼠肺組織MUC5B 水平的影響,以及肺泡炎期、肺纖維化期病理變化的影響,模型組動物肺組織中MUC5B 啟動因子水平,在造模后不同時期均明顯高于假手術(shù)組(P<0.05,P<0.01),說明模型動物肺纖維化時MUC5B 啟動因子水平增高。陽性對照組及助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組動物肺組織中MUC5B啟動因子水平在不同時期與同期模型組比較均明顯下降(P<0.05,P<0.01),助陽補(bǔ)肺除痹顆粒中劑量組動物肺組織中MUC5B 水平于第28 天時與同期模型組比較顯著性下降(P<0.05),低劑量組動物肺組織中MUC5B 水平于第14 天、第28 天時與同期模型組比較顯著性下降(P<0.05)。最終說明助陽補(bǔ)肺除痹顆??赏ㄟ^降低肺組織中MUC5B 水平阻止肺纖維化的發(fā)展。

    造模第7 天:陽性對照組,肺間隔增厚,毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血,大量炎癥細(xì)胞浸潤;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組,局部肺泡壁增厚,可見炎癥細(xì)胞浸潤;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒中劑量組,肺泡壁明顯增厚,以巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒低劑量組,肺泡間隔明顯增厚,局部充血、水腫,可見炎癥細(xì)胞肺浸潤。肺泡腔內(nèi)可見出血;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組,助陽補(bǔ)肺除痹顆粒低劑量組,肺泡炎癥減輕。助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對于炎癥療效甚微。說明助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對于炎癥有不顯著療效。

    造模第14 天:陽性對照組,肺間隔增厚,有纖維化;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組,局部肺泡壁增厚,可見炎癥細(xì)胞浸潤,有纖維化;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒中劑量組,有炎癥變化,輕度纖維化;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒低劑量組,可見炎癥變化,輕度纖維化;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組、低劑量組,無差異,肺泡炎癥減輕為,個別纖維化。表面看助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對于炎癥有不顯著療效,纖維化無療效。說明助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對于炎癥有不顯著療效,纖維化無療效。

    造模第28 天:陽性對照組,肺間隔增厚;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組,局部肺泡壁增厚,有輕度纖維化;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒中劑量組、低劑量組無差別,有輕中度纖維化;助陽補(bǔ)肺除痹顆粒高劑量組,低劑量組,無差異,肺組織個別纖維化。說明助陽補(bǔ)肺除痹顆粒對于肺組織纖維化有不顯著療效。

    MUC5B參與ILD早期炎癥反應(yīng)及最終肺纖維化,研究[4-6]表明MUC5B 導(dǎo)致肺纖維化的標(biāo)志。本研究發(fā)現(xiàn)助陽補(bǔ)肺除痹顆粒與潑尼松片對間質(zhì)性肺疾病患者M(jìn)UC5B 有影響,即2組均對肺泡炎癥和肺纖維化有影響[7],但其影響2組之間無明顯差異。

    3 討論

    本研究在助陽補(bǔ)肺除痹顆粒藥學(xué)、藥效學(xué)前期研究已完成的情況下從ILD 發(fā)病機(jī)理研究方面入手[8],通過實驗研究,驗證助陽補(bǔ)肺除痹顆粒治療間質(zhì)性肺疾病的有效性[9],探討其作用及療效的機(jī)理研究的同時,使中醫(yī)藥在治療間質(zhì)性肺疾病提供現(xiàn)實的依據(jù)。為今后對助陽補(bǔ)肺除痹顆粒治療ILD 進(jìn)行器官、細(xì)胞、分子、基因等多層次多靶點的研究,提供了有效的幫助[10]。

    本研究經(jīng)文獻(xiàn)查詢及調(diào)研,對肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)辨證、病因病機(jī),治則治法進(jìn)行了系統(tǒng)論述。臨床觀察表明,助陽補(bǔ)肺除痹顆粒治療間質(zhì)性肺疾病療效確切,為間質(zhì)性肺疾病的發(fā)展提供了方便[11],能有效改善其臨床癥狀,且臨床無副作用,為以后間質(zhì)性肺疾病在臨床的發(fā)展提供了可靠的依據(jù)[12],中醫(yī)藥的優(yōu)勢在治療間質(zhì)性肺疾病方面尤為突出[13]。

    本研究選用臨床療效頗佳的助陽補(bǔ)肺除痹顆粒治療間質(zhì)性肺疾病[14],結(jié)果顯示,助陽補(bǔ)肺除痹顆??梢杂行Ц纳崎g質(zhì)性肺疾病患者血清MUC5B 啟動因子水平[15]。MUC5B 啟動因子在間質(zhì)性肺疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用[16]。目前臨床研究表明:應(yīng)用助陽補(bǔ)肺除痹顆粒治療間質(zhì)性肺疾病治療組血清MUC5B 啟動因子濃度值均對照組顯著下降[17],提示助陽補(bǔ)肺除痹顆??梢酝ㄟ^間質(zhì)性肺疾病患者黏液蛋白分泌發(fā)揮醫(yī)治炎癥的作用[18]。

    綜上所述,助陽補(bǔ)肺除痹顆粒可通過降低肺組織中MUC5B 水平阻止肺纖維化的發(fā)展,可增強(qiáng)機(jī)體的免疫力,抑制肺纖維化,起到治療間質(zhì)性肺疾病的作用。

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