食品中瘦肉精檢測(cè)存在的問(wèn)題及解決方法分析①

方榮謙

（廈門市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院 福建廈門 361000）

1 GB/T 22286標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)瘦肉精存在的問(wèn)題

GB/T 22286 標(biāo)準(zhǔn)作為重要的瘦肉精檢測(cè)手段，方法較準(zhǔn)確，檢出限低，常用于畜禽肉及副產(chǎn)品中的萊克多巴胺、克倫特羅等β-受體激動(dòng)劑（即瘦肉精）殘留量的檢測(cè)。在《國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則》2019 版、2020 版規(guī)定，豬、牛、羊及其他畜肉中的萊克多巴胺等瘦肉精的檢測(cè)方法均采用該標(biāo)準(zhǔn)方法。然而該標(biāo)準(zhǔn)在實(shí)際使用過(guò)程中，由于步驟繁多，操作復(fù)雜，不同檢測(cè)人員對(duì)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)節(jié)的理解也不盡相同，以及標(biāo)準(zhǔn)所用的儀器設(shè)備更新?lián)Q代，比如可用自動(dòng)固相萃取裝置代替手動(dòng)萃取，或儀器參數(shù)設(shè)置不同等諸多原因，會(huì)引起檢測(cè)結(jié)果的顯著偏差。

2 GB/T 22286 標(biāo)準(zhǔn)在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中的解決方法

2.1 簡(jiǎn)化提取過(guò)程中沉淀蛋白的步驟

GB/T 22286 需要將已酶解、加過(guò)內(nèi)標(biāo)的樣品用高氯酸將pH 調(diào)節(jié)至1，離心后取上清液用氫氧化鈉溶液調(diào)為11，再用有機(jī)相進(jìn)行液液萃取，萃取后的有機(jī)相用氮?dú)獯抵粮?，最后用合適溶劑溶解殘?jiān)拍苓M(jìn)入下一步的凈化步驟。整個(gè)過(guò)程操作步驟多，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，還使得整個(gè)方法的A類不確定度變大。由于該步驟的主要目的是沉淀固體雜質(zhì)和蛋白，避免在凈化步驟中堵塞固相萃取柱，因此簡(jiǎn)化該步驟。實(shí)際操作中，對(duì)于生豬肉和生牛肉樣品，無(wú)需用高氯酸調(diào)節(jié)pH，直接將加過(guò)內(nèi)標(biāo)且混合均勻的樣品離心，上清液用濾紙過(guò)濾，濾液澄清即可用于下一步凈化。簡(jiǎn)化后的方法可行且操作簡(jiǎn)單，無(wú)論是使用自動(dòng)固相萃取裝置進(jìn)行凈化，還是手動(dòng)操作凈化，均不會(huì)造成固相萃取柱堵塞。簡(jiǎn)化后的步驟數(shù)量大幅減少，縮短了檢測(cè)時(shí)間，還提高了檢測(cè)方法的精密度。

2.2 自動(dòng)固相萃取凈化參數(shù)的優(yōu)化

自動(dòng)固相萃取儀是一種能夠自動(dòng)化運(yùn)行固相萃取方法中包括活化、上樣、清洗、洗脫等步驟的固相萃取裝置，廣泛應(yīng)用于食品中農(nóng)殘、真菌毒素和獸殘分析的樣品前處理。按同時(shí)處理樣品的批量數(shù)區(qū)分，自動(dòng)固相萃取儀可分為單通道固相萃取儀和多通道固相萃取儀。通道數(shù)越多，同時(shí)處理樣品的批量越多，可節(jié)省更多的前處理時(shí)間，特別是萃取步驟中上樣的時(shí)間。自動(dòng)固相萃取儀的特點(diǎn)是穩(wěn)定、可靠，能夠充分體現(xiàn)自動(dòng)化的長(zhǎng)處，將實(shí)驗(yàn)過(guò)程的人工隨機(jī)誤差降至最低。GB/T 22286 中并無(wú)提到凈化過(guò)程是采用自動(dòng)固相萃取還是手動(dòng)固相萃取裝置。因此，實(shí)驗(yàn)室常采用自動(dòng)固相萃取裝置更省心省力。

GB/T 22286 詳細(xì)描述了固相萃取的各個(gè)參數(shù)，包括活化、上樣、清洗、洗脫等步驟所需的溶劑種類和數(shù)量，規(guī)定過(guò)程流速應(yīng)控制在0.5 mL/min。如采用手動(dòng)方式，檢驗(yàn)人員對(duì)流速的控制都比較熟悉，直接掐著秒表數(shù)液體滴下來(lái)的數(shù)量換算成體積即可。如采用自動(dòng)方式，由于大部分自動(dòng)萃取裝置都可以在儀器面板或軟件的操作界面直接設(shè)置流速參數(shù)，理論上操作應(yīng)該更會(huì)簡(jiǎn)單，且過(guò)程不用人工干預(yù)，平行性也會(huì)更好。然而在實(shí)際操作中往往會(huì)遇到流速不一致的問(wèn)題。比如在洗脫這一步設(shè)置流速成0.5 mL/min 的時(shí)候，由于儀器的滯后效應(yīng)，洗脫過(guò)程流速遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于0.5 mL/min，不僅達(dá)不到慢速洗脫的效果，而且還可能使洗脫液滯留在萃取柱中，使得待測(cè)目標(biāo)物損失。在多通道固相萃取儀中還可能造成各通道流速不一致，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)平行性不好。值得注意的是，標(biāo)準(zhǔn)方法中流速控制在0.5 mL/min，是指實(shí)際流速，不是儀器上設(shè)置的流速。標(biāo)準(zhǔn)方法里僅用1mL 洗脫液在自動(dòng)萃取裝置凈化，有時(shí)無(wú)法完全把目標(biāo)物洗脫下來(lái)，導(dǎo)致回收率降低，檢測(cè)數(shù)值偏小。建議將洗脫液增大為2～5 mL，充分將目標(biāo)物洗脫下來(lái)。經(jīng)調(diào)整參數(shù)之后的檢測(cè)回收率及檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性均有明顯提升。

2.3 內(nèi)標(biāo)加入方式的改進(jìn)

在檢測(cè)分析中，為了保證操作符合標(biāo)準(zhǔn)方法的要求，常常使用內(nèi)標(biāo)法定量。內(nèi)標(biāo)法可補(bǔ)償檢測(cè)過(guò)程中待測(cè)物在樣品前處理，儀器響應(yīng)等方面誤差，使定量結(jié)果更加準(zhǔn)確［1］。GB/T 22286 標(biāo)準(zhǔn)前處理步驟繁多，待測(cè)目標(biāo)物在諸多復(fù)雜操作中很容易損失，如果用外標(biāo)法定量會(huì)造成檢測(cè)數(shù)值重復(fù)性差，加標(biāo)回收率數(shù)值也明顯偏低。因此，有必要加入內(nèi)標(biāo)。一般的檢測(cè)方法是內(nèi)標(biāo)直接加入待測(cè)樣品中，混合均勻即可進(jìn)行下一步操作。GB/T 22286 加入內(nèi)標(biāo)后需要在振蕩器中振蕩15 min，以使內(nèi)標(biāo)物充分混合，與待測(cè)目標(biāo)物處于相同狀態(tài)。如果加入內(nèi)標(biāo)后不振蕩或振蕩時(shí)間不夠，則內(nèi)標(biāo)大部分游離于待測(cè)樣品及待測(cè)目標(biāo)物之外，檢測(cè)結(jié)果會(huì)造成內(nèi)標(biāo)數(shù)值偏大，使得內(nèi)標(biāo)校正后的待測(cè)目標(biāo)物檢測(cè)值明顯偏低。在實(shí)際檢測(cè)中，為了更好發(fā)揮內(nèi)標(biāo)作用，加入內(nèi)標(biāo)后把振蕩時(shí)間延長(zhǎng)至30 min，或在振蕩15 min 之后再靜置30 min，讓內(nèi)標(biāo)與基質(zhì)能夠得到充分混合。

3 GB/T 22286標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用優(yōu)化實(shí)踐的結(jié)論

瘦肉精檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，方法精密度相對(duì)較差，本文通過(guò)簡(jiǎn)化前處理中沉淀蛋白的處理，優(yōu)化固相萃取設(shè)置參數(shù)，改進(jìn)內(nèi)標(biāo)的加入方式，使檢測(cè)時(shí)間大幅減少的同時(shí)提升了檢測(cè)精密度和方法回收率，大大增強(qiáng)了檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。