不同培養(yǎng)溫度對紅托竹蓀菌絲生長的影響*

鞏玉輝，陳翠翠，方 曄，張 軍，劉亞雯，彭洪斌，宋 雕，管 杰

（貴州金蟾大山生物科技有限責(zé)任公司，貴州 畢節(jié) 553300）

紅托竹蓀 [Dictyophora rubrovalvata Zang,Ji et Liou)]，屬擔(dān)子菌門（Basidiomycota） 鬼筆科（Phallaceae） 竹蓀屬（Dictyophora） 食用菌。我國竹蓀食用歷史悠久，早在唐代段成式的《酉陽雜俎》一書中已有記載，野生竹蓀多生長在有大量竹子殘體和腐殖質(zhì)的竹林地，其味道鮮美可口，素有“菌中皇后”“山珍之王”的稱號，且價格昂貴[1-3]。紅托竹蓀是貴州省特色食用菌，隨著產(chǎn)業(yè)發(fā)展，對菌種的質(zhì)量要求也越來越高，優(yōu)良的菌種是生產(chǎn)的基礎(chǔ)。試驗主要通過測定不同溫度下紅托竹蓀菌絲的速度、生長勢等，選擇最適合紅托竹蓀母種生長的溫度，為紅托竹蓀母種質(zhì)量的評價標(biāo)準(zhǔn)提供相關(guān)數(shù)據(jù)支撐和參考。同時，通過觀察不同溫度下的菌絲生長狀態(tài)，也為紅托竹蓀的栽培提供一定的參考。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗菌株

菌株采用貴州金蟾大山生物科技有限責(zé)任公司選育的JCZS-14-33菌株。

1.2 試驗培養(yǎng)基

培養(yǎng)基 （培養(yǎng)皿）：土豆100 g(煮水過濾）、葡萄糖5 g、果糖25 g、蛋白胨5 g、硫酸銨2.5 g、雜木屑70 g（粒徑100目）、瓊脂粉18 g，水1 000 mL[4-5]。

按照操作方法進(jìn)行培養(yǎng)基的配置，將配置好的培養(yǎng)基121℃滅菌30 min，滅菌后倒入無菌培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿倒入厚3 mm?5 mm的培養(yǎng)基。

1.3 菌絲體培養(yǎng)

利用超凈工作臺進(jìn)行接種，用5 mm的打孔器在母種平板中距老接種塊2 cm?3 cm處打孔取菌種塊，菌種塊放于平板培養(yǎng)基中央進(jìn)行接種[6]，接種完畢后分別放入10℃、15℃、20℃、25℃、28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔7 d用十字交叉法劃線記錄菌絲的生長速度[7]、菌絲狀態(tài)、菌絲的均勻度等。菌絲生長速度（V，mm·d-1）的計算公式如下：

式中：D1為第1次測量直徑（mm）；D2為第2次測量直徑（mm）；d2為測量天數(shù)（d）；d1為初始天數(shù)（d）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行單因素方差和線性相關(guān)分析。

2 試驗結(jié)果

試驗于2021年5月21日進(jìn)行培養(yǎng)基的制作，2021年5月22日接種，每個溫度試驗接種平板12個，菌種接種后2 d開始觀察記錄萌發(fā)生長情況，其后定期測量菌絲的生長速度，觀察其生長速度的差異。

2.1 菌種萌發(fā)差異分析

接種后2 d觀察記錄其萌發(fā)結(jié)果，培養(yǎng)溫度10℃、15℃時，萌發(fā)率為0；培養(yǎng)溫度20℃、25℃、28℃時，萌發(fā)率為100%。不同溫度下菌種萌發(fā)時間記錄見圖1。

圖1 不同溫度下菌絲萌發(fā)時間Fig.1 Germination time of mycelium at different temperatures

由圖1可知，溫度是影響紅托竹蓀菌絲萌發(fā)的主要因素，溫度越低，紅托竹蓀菌絲的萌發(fā)速度越慢，紅托竹蓀菌絲在15℃時萌發(fā)時間開始延長，在20℃以上菌絲2 d即可萌發(fā)?？梢娚a(chǎn)中培養(yǎng)紅托竹蓀菌絲時培養(yǎng)溫度不低于20℃為宜，溫度過低會影響菌種的萌發(fā)以及生長速度。

2.2 菌絲生長速度差異分析

在培養(yǎng)過程中有的平板中菌絲生長不規(guī)則、不均勻或者出現(xiàn)前期萌發(fā)后期不生長的現(xiàn)象，標(biāo)記為異常平板。溫度對紅托竹蓀生長速度的影響結(jié)果見表1、圖2。

圖2 不同培養(yǎng)天數(shù)及不同溫度菌絲生長速度差異Fig.2 Difference of mycelial growth rate in different culture days and temperatures

表1 不同溫度及不同時期菌絲生長情況統(tǒng)計表Tab.1 Statistics of mycelial growth in different temperatures and periods

由表1和圖2可知，隨著溫度的變化，紅托竹蓀菌絲生長速度具有明顯差異。其中10℃、15℃不適合紅托竹蓀菌絲的生長，但在2個溫度區(qū)間內(nèi)紅托竹蓀的菌絲沒有死亡，只是生長速度受到抑制，據(jù)此可以指導(dǎo)生產(chǎn)，合理安排紅托竹蓀的栽培季節(jié)。紅托竹蓀菌絲在溫度20℃以上時，隨著溫度升高生長速度加快，差異比較顯著。

紅托竹蓀菌絲在平板上前10 d生長比較慢，菌絲在10 d?16 d生長比較迅速，且各個時期內(nèi)差異較明顯，通過長滿平板時間可以測算出生長速度與實際培養(yǎng)中較為一致。10 d?20 d為菌絲快速生長期，此時間段可以作為紅托竹蓀菌絲生長階段特異性、一致性和穩(wěn)定性栽培試驗（DUS）測試時間段參考依據(jù)。不同培養(yǎng)溫度下菌絲生長形態(tài)見圖3。

圖3 不同溫度菌絲生長速度及形態(tài)Fig.3 Growth rate and morphology of mycelia in different temperatures

由圖3可知，25℃時紅托竹蓀菌絲生長比較正常，均勻度也較高，是適合紅托竹蓀菌絲生長的。20℃時菌絲生長雖然比25℃稍慢，但菌絲形態(tài)各方面都基本不受影響。從菌絲生長異常平板數(shù)量來看，28℃時菌絲生長開始被抑制，其生長不均勻性增加，顯著影響菌絲形態(tài)，生產(chǎn)中28℃不適合菌絲培養(yǎng)。由此可知紅托竹蓀菌絲最佳培養(yǎng)溫度為20℃?25℃，此區(qū)間內(nèi)菌絲均勻性、一致性較好。

2.3 菌絲耐低溫測試結(jié)果

經(jīng)過10℃、15℃培養(yǎng)的菌絲沒有死亡，但是其生長速度比較慢，按照2.2中的測試方法將菌種全部重新接種后放于25℃進(jìn)行培養(yǎng)，測定其生長速度及生長情況，結(jié)果詳見表2、圖4和圖5。

表2 菌絲耐低溫測試結(jié)果統(tǒng)計表Tab.2 Statistics of test resalts of low temperature resistance of mycelium

圖4 菌絲生長形態(tài)Fig.4 Morphology of mycelium

圖5 不同時間段菌絲生長速度Fig.5 Mycelial growth rate in different time periods

由表2、圖4和圖5可知，紅托竹蓀菌絲在10℃、15℃培養(yǎng)時菌絲生長較慢，但是將其恢復(fù)到25℃溫度培養(yǎng)后菌絲可以恢復(fù)活性，且兩者的生長速度差異不顯著。由此可以說明10℃?15℃時紅托竹蓀菌絲只是生長較慢。

3 結(jié)論

試驗采用適合紅托竹蓀栽培的培養(yǎng)基，通過不同的溫度栽培紅托竹蓀并進(jìn)行觀察、記錄和分析，得出結(jié)論如下。

不同培養(yǎng)溫度平板中紅托竹蓀菌絲隨著溫度升高生長速度加快。10℃下菌絲可以萌發(fā)但是很少生長；28℃菌絲生長最快，但是菌絲相對不均勻；20℃?25℃菌絲生長比較均勻，菌絲致密，一致性好。研究表明25℃最適合紅托竹蓀菌絲生長。

紅托竹蓀的生物學(xué)特性決定了其生長速度非常緩慢。在前10 d菌絲生長非常慢，在第10天?第20天適應(yīng)培養(yǎng)基后，其菌絲生長速度較快，此階段可以作為DUS測試時菌絲生長速度的參考判定標(biāo)準(zhǔn)。在工廠化生產(chǎn)過程中，菌絲快速生長階段要注意環(huán)境調(diào)控，防止溫度過高引起燒菌。

紅托竹蓀菌絲經(jīng)過低溫培養(yǎng)之后再轉(zhuǎn)接至培養(yǎng)基上，放置于合適溫度下培養(yǎng)即可正常萌發(fā)，菌絲前10 d生長速度差異顯著，后續(xù)生長速度差異不顯著。轉(zhuǎn)至25℃培養(yǎng)20 d時，50%以上可以長滿平板。紅托竹蓀在10℃下不會死亡，只是生長的非常慢。