烏雞白鳳丸抗炎、鎮(zhèn)痛及抗應激的藥效學研究

烏雞白鳳丸抗炎、鎮(zhèn)痛及抗應激的藥效學研究

陳家藝，吳清和，黃萍，操紅纓*

(廣州中醫(yī)藥大學，廣州511400)

摘要：目的探討烏雞白鳳丸抗炎、鎮(zhèn)痛及抗應激作用，為其臨床應用提供科學的理論依據(jù)。方法采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗、蛋清致大鼠足趾腫脹實驗以及大鼠棉球肉芽腫實驗，觀察烏雞白鳳丸的抗炎作用；應用小鼠熱板法、醋酸扭體法觀察該藥的鎮(zhèn)痛作用；通過小鼠耐疲勞、耐缺氧、耐寒冷實驗觀察該藥的抗應激作用。結果抗炎方面：烏雞白鳳丸可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度及大鼠致炎后足腫脹度，降低大鼠肉芽腫系數(shù)；鎮(zhèn)痛方面：烏雞白鳳丸可提高熱板法引起的小鼠痛閾值，抑制醋酸所致小鼠扭體反應；抗應激方面：烏雞白鳳丸能增加小鼠負荷游泳時間，延長小鼠常壓耐缺氧的存活時間，降低小鼠在低溫環(huán)境中的死亡率。結論烏雞白鳳丸具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛及抗應激作用。

關鍵詞:烏雞白鳳丸；抗炎作用；鎮(zhèn)痛作用；抗應激作用

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.03.012

中圖分類號：R965

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2015)03-0256-05

Abstract:ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory, analgesic and anti-stress effects of Wujibaifeng Pills.Methods The anti-inflammatory action of Wujibaifeng Pills was assessed by ear edema induced by using xylene in mice and injected egg white in rats； the analgesic effect was tested by using the rat body torsion test and hot-plate test；antifatigue, anti-anoxia and low temperature-resistant tests were used for evaluating the effects on anti-stress. ResultAnti-inflammatory aspects: Wujibaifeng Pills high-dose can significantly inhibit mouse auricle swelling caused by dimethylbenzene and rats foots swelling， in addition can also decrease the granuloma of rats. Analgesic aspects: Wujibaifeng Pills can increase the pain threshold，inhibit body torsion reaction caused by acetic acid.Stress resistance aspect:Wujibaifeng Pills can obviously increase the weight loaded swimming time in mice，and can prolong the survival time of bearing hypoxia at normal pressure in mice and significantly reduce the mortality rate of mice in the low temperature environment in mice. Conclusion Wujibaifeng Pills have significant anti-inflammatory, analgesic action and can improve the ability of the body′s resistance to stress.

基金項目：中央財政支持地方高校發(fā)展專項資金項目(編號：財教[2013]338號)

作者簡介：陳家藝，女，在讀碩士研究生

收稿日期：(2014-12-22)

Study on the anti-inflammatory, analgesic and anti-stress effect of Wujibaifeng Pills

CHEN Jiayi，WU Qinghe，HUANG Ping，CAO Hongying*(Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 511400，China)

Key words: Wujibaifeng Pills；anti-inflammatory；analgesia；anti-stress

*通信作者：操紅纓，女，副教授，博士

烏雞白鳳丸系明代龔廷賢《壽世保元》中烏雞丸的加減方，由烏骨雞、人參、黃芪、丹參、當歸、白芍、川芎等20味中藥組成，集溫補、澀斂、滋陰、調和等法為一方，具有補而不滯、溫而不燥的特點[1]。近年來，烏雞白鳳丸藥理作用研究主要集中在補血、止血、調脂、保肝、治療慢性前列腺炎及骨質疏松癥等方面[2]，但關于烏雞白鳳丸作為婦科良藥臨床常用于調經(jīng)止帶、抗炎鎮(zhèn)痛的藥理作用卻少見較為全面的藥效學研究，缺乏科學的理論依據(jù)。因此本研究根據(jù)烏雞白鳳丸的臨床應用，較為全面地開展了其抗炎鎮(zhèn)痛以及提高機體抗應激方面的藥效學研究，為其臨床應用提供科學的理論依據(jù)，也為其進一步的機制探討奠定基礎。

1儀器與材料

1.1儀器YLS-6A智能熱板儀(山東省醫(yī)學科學院)；118-3型電熱鼓風遠紅外恒溫干燥箱(蕭山永發(fā)電器有限公司汝南實驗儀器廠)；BS110S電子天平(Sartorius 公司)；TE2000S Nikon倒置熒光數(shù)碼照相顯微鏡；三用電熱恒溫水浴箱(上海躍進醫(yī)療器械廠)。

1.2試藥烏雞白鳳丸(廣州陳李濟藥廠，批號20070903)；阿司匹林(印尼拜耳公司，批號BTA6EA)；醋酸地塞米松片(浙江仙琚制藥股份有限公司，批號071032)；十全大補丸(九芝堂股份有限公司，批號20070921)；二甲苯(Xylene)(天津市富宇精細化工有限公司產(chǎn)品，批號20061117)；水合氯醛(國藥集團化學試劑有限公司，批號T20070725)；青霉素(白云山天心制藥股份有限公司，批號060974)；鏈霉素(華北制藥股份有限公司，批號060905)；醋酸(天津市富宇精細化工有限公司，批號070420)。

1.3動物SD系大鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供(合格證號:粵監(jiān)證字2007A003)；KM系小鼠，由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心(合格證號:粵監(jiān)證字2007A013)提供。

2方法

2.1抗炎作用

2.1.1對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響昆明種雄性小鼠60只，體質量18～22 g，隨機分為對照組、陽性藥阿司匹林組及烏雞白鳳丸低、中、高(0.532，1.064和2.129 g·kg-1)劑量組，每組10只。灌胃給藥(0.02 mL·g-1)，每天1次，連續(xù)3 d，對照組給予等容積蒸餾水。末次給藥1 h后，將二甲苯100 μL均勻滴于小鼠右耳兩面，左耳不涂作為對照。1.5 h后將小鼠脫頸椎處死，用直徑8 mm打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，稱質量，以左、右耳片質量之差作為腫脹度[3]。

2.1.2對大鼠蛋清性足腫脹的影響SD雄性大鼠60只，體質量180～200 g，隨機分為對照組、陽性藥阿司匹林組及烏雞白鳳丸低、中、高(0.377，0.755和1.509 g·kg-1)劑量組，每組10只。灌胃給藥(0.01 mL·g-1)，每天1次，連續(xù)3 d，對照組給予等容積蒸餾水。實驗前每只鼠左后足踝關節(jié)處用記號筆作一清晰橫線，排水法測鼠足正常體積。末次給藥1 h后，每鼠左后足跖皮下注射鮮雞蛋清0.05 mL，測量致炎后1，2，3和4 h的足腫容積，減去基礎值，作為足腫脹度。

2.1.3對大鼠棉球肉芽腫的影響SD雄性大鼠60只，體質量180～200 g，隨機分為對照組、陽性藥地塞米松組及烏雞白鳳丸低、中、高(0.532，1.064和2.129 g·kg-1)劑量組，每組10只。腹腔注射體積分數(shù)為10%水合氯醛3.5 mL·kg-1麻醉，胸部皮膚用碘酒消毒，用體積分數(shù)75%酒精棉球脫碘后，切開1 cm長小口，將2個20 mg的高壓滅菌棉球(經(jīng)青霉素和鏈霉素混合液0.2 mL浸泡，烘干)從切口處植入雙側腋下部皮下，隨即縫合皮膚。從手術當日開始灌胃給藥(0.1 mL·kg-1)，每天1次，對照組給予蒸餾水，連續(xù)給藥6 d，第7天打開原切口，將棉球連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，放進烘箱中60 ℃烘干，稱質量。將稱得的質量減去棉球原質量即得肉芽腫質量，計算肉芽腫系數(shù)。

肉芽腫凈質量(mg)=干燥后棉球肉芽腫質量(mg)-原棉球質量(mg)

肉芽腫系數(shù)(mg/100 g)=肉芽腫凈質量(mg)/大鼠體質量(100 g)

2.2鎮(zhèn)痛作用

2.2.1熱板實驗昆明種雌性小鼠60只，體質量18～22 g，使用智能熱板儀測定小鼠正常痛閾值2次，選取基礎痛閾在5～30 s之間的小鼠，取2次痛閾平均值作為該鼠給藥前的基礎痛閾值。將動物隨機分為對照組、陽性藥阿司匹林組、烏雞白鳳丸低、中、高劑量組，每組10只。給藥劑量及方式同2.1.1，于末次給藥后30，60和120 min分別測小鼠痛閾值，計算痛閾提高百分率，若60 s仍無反應，將小鼠取出，以免燙傷，其痛閾值以60 s計算。

2.2.2對醋酸所致小鼠疼痛的影響昆明種小鼠60只，雌雄各半，體質量18～22 g，隨機分為對照組、陽性藥阿司匹林組及烏雞白鳳丸低、中、高劑組、每組10只。給藥劑量及方式同2.1.1，末次給藥后1 h，腹腔注射8 mL·L-1醋酸生理鹽水溶液0.2 mL/只，記錄20 min內小鼠扭體反應次數(shù)[4]。

2.3抗應激作用

2.3.1耐疲勞實驗昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分為對照組、陽性藥十全大補丸組及烏雞白鳳丸低、中、高(劑量同2.1.2)劑量組，灌胃給藥(0.02 mL·g-1)，每天1次，連續(xù)7 d，對照組給予等容積蒸餾水。末次給藥后1 h，將小鼠尾根部負荷10%體質量的鐵絲，置于水深20 cm玻璃缸內游泳，觀察小鼠游泳力竭死亡時間，記錄該時間為小鼠的游泳時間[5]。

2.3.2耐缺氧實驗昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分為對照組、陽性藥十全大補丸組、烏雞白鳳丸低、中、高(劑量同2.1.1)劑量組，灌胃給藥(0.02 mL·g-1)，每天1次，連續(xù)7 d，對照組給予等容積蒸餾水。末次給藥后1 h，將小鼠放入盛有5 g鈉石灰的廣口瓶內，每次1只，將瓶口封住，立即計時，以停止呼吸為指標觀察小鼠存活的時間。

2.3.3耐寒冷實驗昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分為對照組、陽性藥十全大補丸組、烏雞白鳳丸低、中、高劑量組，給藥方式及劑量同2.3.2。末次給藥后1 h，將各組小鼠(單只)置于-l8℃低溫環(huán)境中，觀察記錄l h內各組小鼠死亡數(shù)，并計算死亡率。

3結果

3.1抗炎作用

3.1.1對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響與正常對照組相比，烏雞白鳳丸高劑量可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度(P<0.05)，阿司匹林亦可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度(P<0.01)。結果見表1。

表1烏雞白鳳丸對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

Tab.1 Effect of Wujibaifeng Pills on ear swelling induced by xylene

組別劑量/g·kg-1耳廓腫脹度/mg對照組-17.18±5.49阿司匹林組0.2009.80±5.22**低劑量0.53215.28±4.29中劑量1.06414.24±5.63高劑量2.12912.88±2.56*

注：與對照組相比*P<0.05，**P<0.01。

3.1.2對大鼠蛋清性足趾腫脹的影響與對照組相比，烏雞白鳳丸低劑量可抑制大鼠致炎后3和4 h的足趾腫脹度(P<0.05)，中、高劑量可明顯抑制大鼠致炎后1，2，3和4 h的足趾腫脹度(P<0.05)；阿司匹林亦可明顯抑制大鼠致炎后1，2，3和4 h的足趾腫脹度(P<0.05～0.01)。結果見表2。

表2烏雞白鳳丸對大鼠蛋清性足趾腫脹的影響

Tab.2 Effect of Wujibaifeng Pills on rat paw edema induced by egg white

組別劑量/g·kg-1足趾腫脹度/mL1h1h3h4h對照組 —0.81±0.120.61±0.150.58±0.120.57±0.16阿司匹林組0.1000.55±0.08**0.46±0.08*0.36±0.10**0.26±0.07**低劑量 0.3770.79±0.180.70±0.100.41±0.18*0.21±0.13*中劑量 0.7550.60±0.13**0.40±0.25**0.25±0.14**0.14±0.10**高劑量 1.5090.55±0.15**0.42±0.15**0.26±0.15**0.16±0.08**

注：與對照組相比*P<0.05，**P<0.01。

3.1.3對大鼠棉球肉芽腫的影響與對照組相比，烏雞白鳳丸低、中、高劑量均可明顯降低大鼠肉芽腫系數(shù)(P<0.05～0.01)；地塞米松亦可明顯降低大鼠肉芽腫系數(shù)(P<0.01)。結果見表3。

表3烏雞白鳳丸對大鼠棉球肉芽腫的影響

Tab.3 Effect of Wujibaifeng Pills on cotton granuloma in rat

組別劑量/g·kg-1肉芽腫系數(shù)/mg·g-1對照組-46.78±9.65地塞米松組0.0012917.67±7.35**烏雞白鳳丸低劑量0.27735.41±9.83*烏雞白鳳丸中劑量0.75529.61±10.12**烏雞白鳳丸高劑量1.50930.86±9.17**

注：與對照組相比*P<0.05，**P<0.01。

3.2鎮(zhèn)痛作用

3.2.1對熱刺激所致小鼠疼痛的影響與對照組相比，烏雞白鳳丸低劑量可增加藥后60 min的痛閾提高百分率(P<0.05)，中、高劑量可增加藥后60和120 min的痛閾提高百分率(P<0.01)，阿司匹林亦可增加藥后30，60和120 min的痛閾提高百分率(P<0.05～0.01)，結果見表4。

表4烏雞白鳳丸對熱刺激致小鼠疼痛的影響

Tab.4 Effect of Wujibaifeng Pills on pain induced byheatin mice

組別劑量/g·kg-130min痛閾提高百分率/%60min痛閾提高百分率/%120min痛閾提高百分率/%對照組-3.96±0.21-18.22±2.15-10.47±2.97阿司匹林組0.20051.94±7.15*36.90±2.34**58.78±3.28*烏雞白鳳丸低劑量0.53227.84±5.5211.72±3.08*21.67±4.17烏雞白鳳丸中劑量1.06432.05±5.4327.46±3.67**64.57±10.08**烏雞白鳳丸高劑量2.12935.89±4.6240.44±2.50**65.77±7.76**

注：與對照組相比*P<0.05，**P<0.01。

3.2.2對醋酸所致小鼠疼痛的影響與對照組相比，烏雞白鳳丸低、中、高劑量對醋酸所致小鼠扭體反應具有顯著的抑制作用(P<0.05～0.01)，阿司匹林對醋酸所致小鼠扭體反應亦有顯著的抑制作用(P<0.01)，結果見表5。

表5烏雞白鳳丸對醋酸致小鼠疼痛的影響

Tab.5 Effect of Wujibaifeng Pills on pain induced by acetic acid in mice

組別劑量/g·kg-1扭體次數(shù)對照組—33.5±8.76阿司匹林組0.20016.1±4.82**烏雞白鳳丸低劑量0.53227.1±7.31*烏雞白鳳丸中劑量1.06421.0±5.31**烏雞白鳳丸高劑量2.12917.6±6.45**

注：與對照組相比*P<0.05，**P<0.01。

3.3抗應激作用

3.3.1耐疲勞實驗與對照組相比，烏雞白鳳丸低、中、高劑量均可明顯增加小鼠負荷游泳時間(P<0.05～0.01)；十全大補丸亦可明顯增加小鼠負荷游泳時間(P<0.01)，結果見表6。

表6烏雞白鳳丸對小鼠負荷游泳時間的影響

Tab.6 Effect of WujiBaifeng Pills on loaded swimming time of mice

組別劑量/g·kg-1負荷游泳時間/s對照組—128.40±49.75十全大補丸組4.550272.40±114.13**烏雞白鳳丸低劑量0.532224.40±112.64*烏雞白鳳丸中劑量1.064290.10±108.52**烏雞白鳳丸高劑量2.129244.60±69.00**

注：與對照組相比*P<0.05，**P<0.01。

3.3.2耐缺氧實驗與對照組相比，烏雞白鳳丸低、中、高劑量均可明顯延長小鼠常壓缺氧的存活時間(P<0.05～0.01)；十全大補丸亦可明顯延長小鼠常壓缺氧的存活時間(P<0.01)，結果見表7。

3.3.3耐寒冷實驗與對照組相比，烏雞白鳳丸高劑量和十全大補丸可降低小鼠在低溫環(huán)境中的死亡率(P<0.05)，結果見表8。

表7烏雞白鳳丸對小鼠耐常壓缺氧的影響

Tab.7 Effects of Wujibaifeng Pills on anti-anoxia in mice

組別劑量/g·kg-1存活時間/s對照組-604.20±73.48十全大補丸組4.550723.60±84.63**烏雞白鳳丸低劑量0.532698.90±64.47**烏雞白鳳丸中劑量1.064713.80±52.99**烏雞白鳳丸高劑量2.129671.10±50.67*

注：與對照組相比*P<0.05，**P<0.01。

表8烏雞白鳳丸耐寒冷實驗

Tab.8 Effects of Wujibaifeng Pills on anti-cold in mice

組別劑量/g·kg-1死亡率/%對照組- 90十全大補丸組4.550 50*烏雞白鳳丸低劑量0.532 90烏雞白鳳丸中劑量1.064 70烏雞白鳳丸高劑量2.129 50*

注：與對照組相比*P<0.05。

4討論

炎癥是指具有血管系統(tǒng)的活體組織對損傷因子所發(fā)生的復雜防御反應，是最基本的病理過程，與多種疾病有著密切的聯(lián)系，如肺炎、腎炎、肝炎以及部分婦科疾病等[6-7]。在炎癥的過程中，一般具有3個明顯的時相：急性時相，以質變、滲出及水腫為主；亞急性時相，以白細胞和吞噬細胞的浸潤為主；慢性增殖相則以增生為主[8-9]。張新新等[10]通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹法觀察得出大葉秦艽花及麻花秦艽花具有顯著的抗炎作用。本研究主要采用了針對急性及亞急性時相的動物模型：二甲苯致小鼠耳腫脹法及蛋清致大鼠足趾腫脹法；增殖時相的動物模型：大鼠棉球植入法，較為全面地觀察烏雞白鳳丸的抗炎作用。在二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗中，烏雞白鳳丸高劑量組可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度(P<0.05)；在蛋清致大鼠足腫脹實驗中，烏雞白鳳丸低劑量可抑制大鼠致炎后3和4 h的足腫脹度(P<0.05)，中、高劑量可明顯抑制大鼠致炎后1，2，3和4 h的足腫脹度(P<0.05)；在大鼠棉球肉芽腫實驗中，烏雞白鳳丸各劑量組可降低大鼠肉芽腫系數(shù)(P<0.01～0.05)。結果提示，烏雞白鳳丸可能具有較強的抗炎作用，這可能與烏雞白鳳丸方中各藥配伍應用、提高機體免疫力、增強其抗炎作用有關，與其臨床應用于治療炎癥(如盆腔炎)等相一致。

鎮(zhèn)痛藥的藥效實驗方法很多，主要涉及化學性和物理性刺激兩大類。朱玲等[11]通過采用小鼠熱板法、醋酸扭體法考察鹽酸青藤堿二元醇質體(SHBE)凝膠的鎮(zhèn)痛效果，結果顯示，SHBE凝膠具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，且無明顯刺激性。本實驗分別采用化學刺激造模即醋酸扭體實驗、物理性刺激造模即熱板法評價烏雞白鳳丸的鎮(zhèn)痛作用。研究結果顯示，烏雞白鳳丸各劑量組均能不同程度地增加小鼠痛閾提高百分率、減少扭體反應次數(shù)，提示烏雞白鳳丸具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，這與其臨床應用于月經(jīng)不調、痛經(jīng)等相對應。

抗應激實驗中采用了3個經(jīng)典實驗即耐疲勞、耐缺氧、耐寒冷實驗，綜合評估烏雞白鳳丸抗應激作用。烏雞白鳳丸各劑量均能顯著延長小鼠負荷游泳時間、常壓耐缺氧存活時間(P<0.05～0.01)，高劑量組亦能顯著降低小鼠低溫環(huán)境中的死亡率(P<0.05)，提示烏雞白鳳丸具有顯著的抗應激作用。這可能與方中含有人參、黃芪等提高機體免疫力以及抗應激作用的中藥有關。

綜上所述，本次研究結果顯示，烏雞白鳳丸方中各藥配伍應用，可能具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，同時還能顯著地增強機體的抗應激能力，為其臨床應用提供了科學的理論依據(jù)，但關于其藥理作用機制可能是多方面的，有待于進一步探討。

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