氣相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法對藥用膠塞中8 種多環(huán)芳烴浸出物的測定

曲亞南，嚴(yán)群，柯軍（通信作者）

1 國家藥品監(jiān)督管理局體外循環(huán)器械重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·廣州市生物醫(yī)用血液凈化材料研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 （廣東廣州 510663）；2 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所包裝材料容器檢驗(yàn)中心（廣東廣州 510663）；3 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所 （廣東廣州 510663）

藥用膠塞是藥品包裝中重要的密封組件，一個(gè)完整的橡膠配合體系包括生膠體系、硫化體系、補(bǔ)強(qiáng)填充體系、軟化體系、防老體系、著色體系，其中，補(bǔ)強(qiáng)填充體系中的填充油和炭黑中含有多環(huán)芳烴[1]。由于多環(huán)芳烴是一類可致癌、致畸和致突變性的物質(zhì)，并且廣泛分布于環(huán)境中，《化學(xué)藥品與彈性體密封件相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》明確指出，對多環(huán)芳烴需特別加以關(guān)注。目前，在國內(nèi)藥物相容性領(lǐng)域中有關(guān)多環(huán)芳烴的文獻(xiàn)報(bào)道較少，僅見甲苯提取試驗(yàn)[2]、丙酮/正己烷提取試驗(yàn)[3]和吸入氣霧劑的遷移試驗(yàn)[4]。本研究參考《醫(yī)療器械已知可瀝濾物測定方法驗(yàn)證及確認(rèn)注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則》，同時(shí)根據(jù)《化學(xué)藥品與彈性體密封件相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》確定8種多環(huán)芳烴為檢測對象，主要研究藥用膠塞中多環(huán)芳烴向復(fù)方電解質(zhì)注射液（注射液用鹵化丁基橡膠塞包裝、長期12個(gè)月樣品）的遷移情況，通過固相萃取濃縮采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測復(fù)方電解質(zhì)注射液中多環(huán)芳烴的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑耗材

儀器：島津GCMS-QP2010 Ulra氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；島津電子天平AUW220D。

試劑耗材：WondaSepRC18 固相萃取柱（規(guī)格：500 mg/6 ml，生產(chǎn)批號：7C010303）；萘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：D1705066）；菲對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：L1812027）；蒽對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：A1606033）；芘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：H1820022）；苯并（a）蒽對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：B1728028）；苯并[e]芘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：J1811282）；3，4-苯并芘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：A1704012）；苯并[g，h，i]芘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：B1911045）；乙腈、二氯甲烷均為HPLC 級。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱為InertCap 5MS/Sil 0.25 mm×30 m×0.25 μm；進(jìn)樣方式為直接進(jìn)樣；進(jìn)樣量為1.0 μl；不分流；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；色譜-質(zhì)譜接口溫度為280 ℃；柱溫度程序?yàn)槌跏紲囟?0 ℃，以20 ℃/min 升溫至220 ℃，再以10 ℃/min 升溫至320 ℃，保持2 min；載氣為氦氣，流速為1.0 ml/min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電離方式為EI；離子源溫度為230 ℃；測定方式為選擇離子（selected ion monitor，SIM）模式（圖1），選擇離子參數(shù)見表1。

圖1 對照品總離子流圖

表1 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用選擇離子參數(shù)

1.2.3 對照品儲備液制備

分別精密稱取萘、菲、蒽、芘、苯并（a）蒽、苯并[e]芘、3，4-苯并芘、苯并[g，h，i]芘對照品0.03081、0.03097、0.03602、0.03463、0.03158、0.02801、0.03250、0.03199 g，并于小燒杯中用適量二氯甲烷溶解，充分溶解（可采取超聲溶解）后轉(zhuǎn)移至10 ml 容量瓶中，搖勻、定容后即得各對照品儲備液（注：各對照品分別單獨(dú)配制）。

1.2.4 對照品工作液制備

分別精密量取萘、菲、蒽、芘、苯并[e]芘、苯并[g，h，i]芘對照品儲備液各300 μl，苯并（a）蒽、3，4-苯并芘對照品儲備液各600 μl，全部加于1個(gè)10 ml 容量瓶中，再用乙腈定容至刻度搖勻，即得對照品工作液A；準(zhǔn)確移取1.0 ml 對照品工作液A加于10 ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度搖勻，即得對照品工作液B。

1.2.5 標(biāo)曲工作液及檢出限檢測用溶液的制備

標(biāo)曲工作液：標(biāo)曲工作液共5個(gè)濃度點(diǎn)，從濃度點(diǎn)1至濃度點(diǎn)5濃度依次降低；精密移取0.2 ml 對照品工作液A 至10 ml 容量瓶中，分別精密移取1.0、0.5、0.2 ml 對照品工作液B 至10 ml 容量瓶中（3個(gè)），用乙腈定容至刻度，搖勻即得濃度點(diǎn)1、2、3、4的標(biāo)曲工作液；精密移取1.0 ml 配制好的濃度點(diǎn)2的標(biāo)曲工作液至10 ml 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻即得濃度點(diǎn)5的標(biāo)曲工作液。

檢出限檢測用溶液：精密移取0.5 ml 配制好的濃度點(diǎn)2的標(biāo)曲工作液至10 ml 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻即得檢出限檢測用溶液。

1.2.6 供試品制備

供試品的制備方法為固相萃取法，具體步驟：固相萃取柱使用前分別用3 ml 甲醇和3 ml 水活化，活化完成后，分別精密移取復(fù)方電解質(zhì)注射液樣品50 ml，以1.5～2.0 ml/min 的流速通過固相萃取柱，負(fù)壓抽濾至完全干燥，分別用2 ml 乙腈及6 ml 二氯甲烷依次洗脫，收集洗脫液，用二氯甲烷定容至10 ml，供試液經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾后注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測。

1.2.7 加標(biāo)供試品制備

分別取對照品工作液B 各0.1、0.2、0.4 ml 至50 ml 容量瓶中（3個(gè)），取復(fù)方電解質(zhì)注射液（Ⅱ）定容至刻度，將所得溶液經(jīng)固相萃取法（方法同供試品制備）處理后收集洗脫液，再用乙腈和二氯甲烷的混合溶液定容至10 ml，得加標(biāo)供試品1、加標(biāo)供試品2、加標(biāo)供試品3。加標(biāo)供試品1、加標(biāo)供試品2、加標(biāo)供試品3分別平行制備6、3、3份樣品。

2 結(jié)果

2.1 線性范圍

取標(biāo)曲工作液進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，各多環(huán)芳烴在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù)（R2）≥0.991，見表2。

表2 8種多環(huán)芳烴線性關(guān)系（n=2）

2.2 方法檢出限、方法定量限、平均加標(biāo)回收率及精密度

根據(jù)加標(biāo)供試品1色譜圖的信噪比，換算出信噪比為3和10的濃度，分別作為方法檢出限和方法定量限；取所有制備的加標(biāo)供試品進(jìn)行檢測，計(jì)算得到平均回收率為75.4%～95.8%；取6份加標(biāo)供試品1進(jìn)行檢測，得各多環(huán)芳烴含量的RSD為2.73%～11.46%，見表3。

表3 8種多環(huán)芳烴的方法檢出限、方法定量限、平均回收率和精密度

2.3 樣品測定結(jié)果

測定某復(fù)方電解質(zhì)注射液（長期12個(gè)月）樣品3批，此3批復(fù)方電解質(zhì)注射液均未檢出多環(huán)芳烴萘、菲、蒽、芘、苯并（a）蒽、苯并[e]芘、3，4-苯并芘、苯并[g，h，i]芘（圖2）。

圖2 復(fù)方電解質(zhì)注射液樣品中多環(huán)芳烴總離子流圖

3 結(jié)論

本研究建立了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測復(fù)方電解質(zhì)注射液中8種多環(huán)芳烴浸出物的方法。相較之前的文獻(xiàn)報(bào)道，本研究首次關(guān)注藥物相容性領(lǐng)域多環(huán)芳烴在藥液中的遷移情況。固相萃取濃縮的前處理方法綠色環(huán)保高效，方法驗(yàn)證結(jié)果表明，該方法選擇性強(qiáng)，可準(zhǔn)確檢測復(fù)方電解質(zhì)注射液中8種多環(huán)芳烴浸出物。檢測3批復(fù)方電解質(zhì)注射液結(jié)果顯示，8種多環(huán)芳烴均未檢出。實(shí)踐證明，該方法可為藥物相容性領(lǐng)域多環(huán)芳烴遷移試驗(yàn)的檢測提供參考。