• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    一種高通量鑒定甘藍型油菜耐低氮種質(zhì)的方法及其應(yīng)用

    2021-11-18 16:14:02萬何平何冰冰陳敬東戢強強曾長立
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年19期
    關(guān)鍵詞:聚類分析

    萬何平 何冰冰 陳敬東 戢強強 曾長立

    摘要:構(gòu)建了一套高通量的油菜水培平臺,以104份甘藍型油菜(Brassica napus L.)種質(zhì)為研究材料,采用該水培平臺研究測定不同油菜品種(系)苗期在高氮(10 mmol/L)和低氮(0.6 mmol/L)供應(yīng)水平下的生長情況,并對104份甘藍型油菜品種(系)的耐低氮脅迫能力進行分級。結(jié)果顯示,與高氮水平相比,低氮環(huán)境能夠顯著抑制甘藍型油菜的生長,且不同基因型材料間的抑制程度存在廣泛遺傳變異。通過葉片數(shù)比值、地上部分長度比值和地上鮮質(zhì)量比值進行聚類分析,共將104份油菜品種(系)分為低氮耐受型、低氮敏感型和中間型3個等級,其中7個低氮耐受型品種,65個低氮敏感型品種,剩下32個為中間型,為油菜低氮耐受能力的遺傳改良提供了理論基礎(chǔ)和種質(zhì)資源。

    關(guān)鍵詞:甘藍型油菜;氮高效;低氮脅迫;聚類分析

    中圖分類號:S634.303 文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2021)19-0078-06

    氮是植物生長所必需的大量元素之一,它對植物代謝、產(chǎn)量和品質(zhì)的形成具有重要作用。據(jù)估計,全球谷物增長的將近1/2歸因于氮肥的施用[1]。農(nóng)作物只能吸收約1/2的農(nóng)業(yè)氮肥,土壤中殘留的大量氮會導(dǎo)致嚴重的生態(tài)問題,如土壤酸化、水富營養(yǎng)化等[2-3]。油菜是我國重要的油料作物之一,種植面積約670萬hm2/年,產(chǎn)菜籽油約500萬t/年,約占自產(chǎn)植物油總量的45%以上[4-5]。與其他農(nóng)作物相比,油菜生長期間需要大量投入肥料,尤其是氮肥,然而油菜的氮利用效率卻很低[6-7]。甘藍型油菜(Brassica napus L.)是3種油菜(白菜型油菜、芥菜型油菜、甘藍型油菜)中種植范圍最廣的種類,是我國重要的油料作物[5]。近年來,為了適應(yīng)經(jīng)濟發(fā)展的需求,油菜的用途已從油用為主,逐漸發(fā)展為蔬菜、觀賞、飼料等多功能用途[8]。其中,依托油菜花海打造農(nóng)業(yè)觀光旅游正成為各大投資商關(guān)注的新熱點,目前已經(jīng)打造的有江西婺源、陜西漢中、江蘇興化、湖北荊門、云南羅平、重慶潼南和青海門源等15個油菜觀賞基地[9-10]。隨著美麗鄉(xiāng)村建設(shè)的推進,全國各地還涌現(xiàn)出一大批以油菜花為主題的景觀。在此大的背景下,急需篩選出適應(yīng)性廣、耐低氮的油菜品種(系),以降低油菜花海景觀的種植成本。

    目前,對于不同作物的氮高效種質(zhì)的篩選研究主要包括苗期篩選和全生育期篩選。但全生育期篩由于周期長、易受到環(huán)境因子的影響,難以真正全面地反映出作物對低氮的耐受能力。因此,更多的研究是在苗期對作物進行初篩,再用全生育期加以驗證[11]。近年來,關(guān)于油菜氮高效基因型種質(zhì)和高效機理的研究已取得了一些研究進展[12-14]。洪娟利用土培的方法對100份油菜種質(zhì)在低氮和氮正常條件下地上部干質(zhì)量、葉片數(shù)、葉片葉綠素含量、含氮量和氮累積量進行考察,初步篩選出氮高效和氮低效油菜種質(zhì)各3份,認為生物量積累和氮素積累量是評價油菜苗期氮高效的可靠指標,葉片數(shù)可作為參考指標[15]。顧熾明等利用營養(yǎng)液培養(yǎng)的方法考察了162份油菜種質(zhì)在低氮和氮正常條件下的生物量、主根長、側(cè)根長、根冠比、氮累積量及氮吸收和利用效率,初步將162份油菜種質(zhì)按氮效率分成了3類,其中雙高效型23份、雙低效型28份、中間型111份,同樣認為生物量積累是評價油菜苗期氮高效的可靠指標[16]。究其原因,生物量積累是油菜生長發(fā)育最終結(jié)果的體現(xiàn),能綜合反映出植株在低氮環(huán)境下的生長情況[12]。

    目前,篩選鑒定油菜氮高效的栽培方式主要為水培和土培,其中水培技術(shù)由于其能夠精準控制營養(yǎng)成分的含量,已被成功應(yīng)用于油菜肥料利用效率的研究上[14,17]。但是,目前的油菜水培技術(shù)還存在規(guī)模小、通量低、控制成本高等不足,無法滿足對大規(guī)模油菜種質(zhì)資源的篩選鑒定要求。為此,本研究建立了一套高通量的油菜水培系統(tǒng),利用該平臺對104份甘藍型油菜種質(zhì)進行耐低氮能力的篩選鑒定,在此基礎(chǔ)上篩選獲得耐低氮的油菜品種(系),為油菜氮高效遺傳改良提供了理論基礎(chǔ)和種質(zhì)資源。

    1材料與方法

    1.1試驗材料

    本試驗供試材料包括104份甘藍型油菜核心種質(zhì),由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所伍曉明研究員提供,主要來自我國各油菜主產(chǎn)區(qū)的地方品種(系)、育種材料和栽培品種(系),油菜種質(zhì)適應(yīng)性強,具有廣泛的遺傳多樣性。

    1.2試驗設(shè)計及表型鑒定

    為了盡可能減少栽培環(huán)境對試驗結(jié)果的影響,本試驗建立了一套同時可容納超過3 000株油菜幼苗的精準化控制水培系統(tǒng)(培養(yǎng)池的長、寬、高分別為12.5、0.8、0.4 m),主要包括營養(yǎng)液補充系統(tǒng)、營養(yǎng)液循環(huán)系統(tǒng)、空氣泵和補光系統(tǒng)等(圖1),并利用該系統(tǒng)對104份甘藍型油菜進行種植。本試驗于江漢大學(xué)湖北省漢江流域生物資源與利用工程中心的油菜水培實驗室內(nèi)進行。

    甘藍型油菜水培法的具體步驟如下。

    (1)播種。用干凈的尼龍繩將長、寬、高分別為60、40、12 cm的藍色盆子分成60格,并在最上面鋪上1層無菌紗布。向苗床內(nèi)加滿純水保證紗布浸濕,將104份甘藍型油菜材料均勻播撒到對應(yīng)的小格中并記下編號,每個材料播種約50粒。

    (2)制作培養(yǎng)板。將2 cm的高密度泡沫板制成60 cm×100 cm規(guī)格的培養(yǎng)板,培養(yǎng)板上用打孔器均勻打出140個直徑約為2 cm的圓形小孔。將厚度約為2 cm的海綿剪成邊長約為2.5 cm的方塊,并將海綿方塊沿1條對角線剪開1個小口用來固定幼苗。

    (3)移苗和營養(yǎng)管理。配制經(jīng)改良的適合甘藍型油菜水培的營養(yǎng)液[18]。播種7 d后將甘藍型油菜幼苗從紗布上取出,用海綿方塊夾住下胚軸基部,然后移植至培養(yǎng)板上的小孔中并貼上標簽,每個材料取48株生長一致的幼苗,分別移栽至6個培養(yǎng)板中,每個培養(yǎng)板移栽8株,其中高氮處理3板、低氮處理3板。最后將固定有幼苗的培養(yǎng)板放置在2個裝有1/4全營養(yǎng)液的培養(yǎng)池(營養(yǎng)液總體積為 1 000 L)中進行培養(yǎng)。1周后更換1/2全營養(yǎng)液,再過1周后更換全營養(yǎng)液。

    (4)不同氮濃度脅迫處理。幼苗移栽21 d后進行不同氮水平處理,設(shè)置高氮(10 mmol/L)和低氮(0.6 mmol/L)2個處理,具體營養(yǎng)液濃度見表1。

    (5)表型考察與數(shù)據(jù)分析。不同氮處理21 d后測定甘藍型油菜苗的葉片數(shù)(NL)、地上長度(SL)、地上部分鮮質(zhì)量(SFW)。為了消除不同甘藍型油菜的基因型背景差異,計算3個性狀的低氮耐受指數(shù)(LNT-NL、 LNT-SL和LNT-SFW,其為低氮條件下的性狀值與對照條件下性狀值的比值[14,19])。所有數(shù)據(jù)用SPSS 22.0進行分析處理,圖片使用Origin 8.0和R軟件制作。

    2結(jié)果與分析

    2.1不同氮水平條件下甘藍型油菜品種(系)表型分析

    如表2所示,在低氮處理條件下,甘藍型油菜幼苗的NL的平均值為4.93張,變化范圍為3.20~975張,變異系數(shù)為18.78%;SL的平均值為 1598 cm,變化范圍為10.38~22.30 cm,變異系數(shù)為14.21%;SFW的平均值為4.26 g,變化范圍為179~12.47 g,變異系數(shù)為29.98%。在高氮條件下,甘藍型油菜幼苗的NL的平均值為6.94張,變化范圍為5.00~12.33張,變異系數(shù)為16.51%;SL的平均值為21.94 cm,變化范圍為14.46~27.53 cm,變異系數(shù)為14.48%;SFW的平均值為 10.91 g,變化范圍為5.61~26.65 g,變異系數(shù)為30.36%;各性狀在低氮環(huán)境下的表型值均極顯著低于高氮環(huán)境下的表型值。在2種氮營養(yǎng)水平下,NL、SL和SFW都呈現(xiàn)連續(xù)性分布(圖2),說明這些性狀都符合數(shù)量性狀特征。

    3個低氮脅迫耐受指數(shù)(LNT-NL、LNT-SL和LNT-SFW)呈現(xiàn)出較大的遺傳變異,LNT-NL的平均值為0.71,變化范圍為0.55~0.93,變異系數(shù)為11.01%;LNT-SL的平均值為0.73,變化范圍為061~0.89,變異系數(shù)為9.43%;LNT-SFW的平均值為0.41,變化范圍為0.21~0.73,變異系數(shù)為31.57%。結(jié)果表明,低氮脅迫環(huán)境對不同甘藍型油菜品種葉片數(shù)、地上長度和地上鮮質(zhì)量的抑制效果存在顯著差異,其中地上鮮質(zhì)量受影響最大。此外,3個耐低氮指數(shù)性狀均符合連續(xù)型正態(tài)分布的特征(圖2),說明油菜耐低氮性狀符合數(shù)量性狀的遺傳特征。

    2.2甘藍型油菜品種(系)各性狀間的相關(guān)性分析

    如圖3所示,LNT-NL與低氮葉片數(shù)、低氮地上鮮質(zhì)量和LNT-SFW呈極顯著正相關(guān);LNT-SL與低氮葉片數(shù)、低氮地上長度、低氮地上鮮質(zhì)量以及LNT-SFW呈顯著正相關(guān),LNT-SL與高氮地上長度呈顯著負相關(guān);LNT-SFW與低氮葉片數(shù)、LNT-NL、LNT-SL以及低氮地上鮮質(zhì)量呈顯著正相關(guān)性, 與高氮地上長度和高氮地上鮮質(zhì)量呈顯著

    負相關(guān);LNT-NL和LNT-SFW間呈顯著正相關(guān);LNT-SL和LNT-SFW間呈顯著正相關(guān),而LNT-NL和LNT-SL之間不存在相關(guān)性。

    2.4甘藍型油菜低氮脅迫耐受能力的初步分級

    根據(jù)LNT-NL、LNT-SL和LNT-SFW性狀對104份甘藍型油菜進行聚類分析,結(jié)果如圖4所示,104份材料被分成了三大類,其中7個材料劃分為低氮耐受型品種(系)(表3),其LNT-NL≥0.8,LNT-SL≥0.68,且LNT-SFW≥0.41;65個材料被劃分為低氮敏感型品種(系),這些材料的LNT-NL和LNT-SL普遍在0.7以下,且LNT-SFW普遍在0.4左右,表現(xiàn)為對低氮敏感。剩下32個材料則被劃分為中間型材料。

    3討論與結(jié)論

    作物耐低氮性狀是由多基因調(diào)控的數(shù)量性狀,基因與環(huán)境之間存在著明顯的相互作用,易受非遺傳因素的影響[20-21]。因此,選擇正確的評價方法是獲得準確表型的關(guān)鍵。目前,甘藍型油菜耐低氮種質(zhì)的篩選方法主要有田間試驗法和盆栽模擬試驗法[22-23]。盆栽模擬試驗按生長介質(zhì)的不同可分為土培試驗法和水培試驗法。其中,土培盆栽試驗更接近實際生產(chǎn),是篩選耐低氮基因型最直接、最可靠的方法,但難以進行根系形態(tài)和生理生化特性的研究[24]。

    近年來,水培技術(shù)已成功地應(yīng)用于養(yǎng)分吸收的研究[9,17,25]中。在水培試驗中,營養(yǎng)液中各種營養(yǎng)素的濃度、類型和供給時間都可精確控制,營養(yǎng)素分布相對均勻,因此十分適合用來篩選大量的耐低氮作物遺傳資源[26]。盡管如此,目前普遍采用的油菜水培系統(tǒng)還存在以下2點不足:第一,傳統(tǒng)油菜水培通常采用小規(guī)格的塑料方盒作為栽培容器,不同材料間會存在營養(yǎng)競爭關(guān)系,因此,小規(guī)格的水培容器不利于維持養(yǎng)分的均勻和穩(wěn)定。第二,由于油菜根系長期浸入營養(yǎng)液中,會影響根系的正常呼吸作用,進一步影響根系對營養(yǎng)離子的吸收與轉(zhuǎn)運。以上問題極大地限制了油菜水培的規(guī)模和表型鑒定的精準性。為此,本研究通過不斷的摸索實踐,建立了可容納3 000余株油菜幼苗的水培體系,包括營養(yǎng)液補充系統(tǒng)、營養(yǎng)液循環(huán)系統(tǒng)、空氣泵和補光系統(tǒng)。對104份甘藍型油菜種質(zhì)進行表型鑒定,結(jié)果顯示,該水培體系能滿足甘藍型油菜的正常生長,是鑒定營養(yǎng)吸收相關(guān)表型的理想方法。

    油菜是小麥、水稻和大麥輪作的一種非常適宜的作物,對后續(xù)谷物的產(chǎn)量產(chǎn)生了積極的影響[27-29]。然而,油菜比其他作物需要更多的氮肥[7]。盡管油菜可以從土壤中吸收大量的氮,但它一直被認為是一種氮肥利用率低、單位施氮種子產(chǎn)量低的作物,約為谷類作物的1/2[30]。此外,油菜不同時期需氮量差別很大,其中氮素苗期占全生育期40%以上[31]。因此,苗期是油菜對氮脅迫相對敏感的時期。本研究選擇對甘藍型油菜苗期的耐低氮能力進行鑒定和評價,結(jié)果顯示,低氮脅迫能顯著地抑制甘藍型油菜幼苗的生長發(fā)育,主要體現(xiàn)在葉片數(shù)的減少、生物量積累的受限等方面。通過計算各個性狀的耐低氮指數(shù),發(fā)現(xiàn)在104份不同遺傳背景的甘藍型油菜種質(zhì)中,其耐低氮能力存在廣泛的遺傳變異。通過對3個耐低氮指數(shù)進行聚類分析,篩選得到7個低氮耐受型油菜品種(系),為進一步提升現(xiàn)有優(yōu)質(zhì)油菜品種的氮利用效率提供了遺傳基礎(chǔ)。目前,雖然關(guān)于低氮脅迫對油菜的苗期和成熟期的研究相對較多,然而對種子萌發(fā)期和開花期等生長發(fā)育關(guān)鍵時期的研究還十分少見。因此,后期有必要繼續(xù)開展這方面的研究,篩選得到全生育期耐低氮能力強的油菜資源。

    參考文獻:

    [1]Tilman D,Cassman K G,Matson P A,et al. Agricultural sustainability and intensive production practices[J]. Nature,2002,418(6898):671-677.

    [2]McAllister C H,Beatty P H,Good A G. Engineering nitrogen use efficient crop plants:The current status[J]. Plant Biotechnology Journal,2012,10(9):1011-1025.

    [3]Liu X J,Zhang Y,Han W X,et al. Enhanced nitrogen deposition over China[J]. Nature,2013,494(7438):459-462.

    [4]王漢中. 我國油菜產(chǎn)需形勢分析及產(chǎn)業(yè)發(fā)展對策[J]. 中國油料作物學(xué)報,2007,29(1):101-105.

    [5]沈金雄,傅廷棟. 我國油菜生產(chǎn)、改良與食用油供給安全[J]. 中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報,2011,13(1):1-8.

    [6]Aufhammer W,Kuebler E,Bury M. Nitrogen uptake and nitrogen residuals of winter oil-seed rape and fallout rape[J]. Journal of Agronomy & Crop Science,1994,172(4):255-264.

    [7]Rathke G W,Christen O,Diepenbrock W. Effects of nitrogen source and rate on productivity and quality of winter oilseed rape (Brassica napus L.) grown in different crop rotations[J]. Field Crops Research,2005,94(2/3):103-113.

    [8]王漢中. 以新需求為導(dǎo)向的油菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略[J]. 中國油料作物學(xué)報,2018,40(5):613-617.

    [9]朱培賢,王周玉,宋文亮. 關(guān)中西部觀賞油菜品種利用[J]. 種子世界,2017(12):45-47.

    [10]田飛,張星星,程尚明,等. 觀賞油菜選育與油菜景觀構(gòu)建[J]. 種子,2019,38(3):116-119.

    [11]張寧,郭榮發(fā). 水稻氮高效種質(zhì)資源篩選及其耐低氮脅迫機理研究進展[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,41(5):66-70.

    [12]Bouchet A S,Laperche A,Bissuel-Belaygue C,et al. Nitrogen use efficiency in rapeseed:a review[J]. Agronomy for Sustainable Development,2016,36(2):38.

    [13]丁廣大,王改麗,葉祥盛,等. 甘藍型油菜氮高效的生理與分子遺傳基礎(chǔ)研究進展[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2017,36(2):130-139.

    [14]Zeng C L,Wan H P,Wu X M,et al. Genome-wide association study of low nitrogen tolerance traits at the seedling stage of rapeseed[J]. Biologia Plantarum,2021,65:10-18.

    [15]洪娟. 油菜氮高效種質(zhì)的篩選及其生理機制的初步研究[D]. 武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2007:57-59.

    [16]顧熾明,韓配配,胡瓊,等. 甘藍型油菜苗期氮效率評價及基因型差異[J]. 中國油料作物學(xué)報,2018,40(6):851-860.

    [17]Wang J,Dun X L,Shi J Q,et al. Genetic dissection of root morphological traits related to nitrogen use efficiency in Brassica napus L. under two contrasting nitrogen conditions[J]. Frontiers in Plant Science,2017,8:1709.

    [18]萬何平,李群,高云雷,等. 一種基于水培技術(shù)的高效低成本油菜小孢子繼代培養(yǎng)方法[J]. 中國油料作物學(xué)報,2016,38(5):588-591.

    [19]Lian X M,Xing Y Z,Yan H,et al. QTLs for low nitrogen tolerance at seedling stage identified using a recombinant inbred line population derived from an elite rice hybrid[J]. Theoretical and Applied Genetics,2005,112(1):85-96.

    [20]Kant S,Bi Y M,Rothstein S J. Understanding plant response to nitrogen limitation for the improvement of crop nitrogen use efficiency[J]. Journal of Experimental Botany,2011,62(4):1499-1509.

    [21]Gao K,Chen F J,Yuan L X,et al. A comprehensive analysis of root morphological changes and nitrogen allocation in maize in response to low nitrogen stress[J]. Plant,Cell & Environment,2015,38(4):740-750.

    [22]Prester T,Seitz G,Landbeck M,et al. Improving nitrogen-use efficiency in European maize[J]. Crop Science,2003,43(4):1259-1265.

    [23]Barraclough P B,Howarth J R,Jones J,et al. Nitrogen efficiency of wheat:Genotypic and environmental variation and prospects for improvement[J]. European Journal of Agronomy,2010,33(1):1-11.

    [24]Bouchet A S,Nesi N,Bissuel C,et al. Genetic control of yield and yield components in winter oilseed rape (Brassica napus L.) grown under nitrogen limitation[J]. Euphytica,2014,199(1):183-205.

    [25]Huang G,Yi K K,Wu Y R,et al. QTLs for nitrate induced elongation and initiation of lateral roots in rice (Oryza sativa L.)[J]. Plant and Soil,2004,263:229-237.

    [26]Tocquin P,Corbesier L,Havelange A,et al. A novel high efficiency,low maintenance,hydroponic system for synchronous growth and flowering of Arabidopsis thaliana[J]. BMC Plant Biology,2003,3:2.

    [27]Christen O,Sieling K. The effect of different preceding crops on the development,growth and yield of winter barley[J]. Journal of Agronomy and Crop Science,1993,171:114-123.

    [28]Christen O,Sieling K,Hanus H. The effect of different preceding crops on the development,growth and yield of winter wheat[J]. European Journal of Agronomy,1992,1(1):21-28.

    [29]馬鵬,張宇杰,林鄲,等. 油—稻輪作下前茬氮肥投入與稻季氮肥運籌對稻田土壤養(yǎng)分、碳庫及作物產(chǎn)量的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2020,36(4):896-904.

    [30]Sylvester-Bradley R,Kindred D R. Analysing nitrogen responses of cereals to prioritize routes to the improvement of nitrogen use efficiency[J]. Journal of Experimental Botany,2009,60(7):1939-1951.

    [31]劉后利,王兆木. 實用油菜栽培學(xué)[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1987:236-237.

    基金項目:國家重點研發(fā)計劃(編號:2016YFD0100202-25);湖北省漢江流域特色生物資源保護開發(fā)與利用工程技術(shù)研究中心開放基金(編號:06450003);江漢大學(xué)博士啟動基金(編號:06450002)。

    作者簡介:萬何平(1988—),男,湖北武漢人,博士,講師,主要從事油菜遺傳研究。E-mail:362057164@qq.com。

    通信作者:曾長立,博士,教授,主要從事油菜種質(zhì)資源鑒定與利用。E-mail:973345988@qq.com。

    猜你喜歡
    聚類分析
    基于譜聚類算法的音頻聚類研究
    基于Weka的江蘇13個地級市溫度聚類分析
    我國中部地區(qū)農(nóng)村居民消費行為階段特征分析
    基于多元統(tǒng)計方法的高??蒲袪顩r評價分析
    價值工程(2016年31期)2016-12-03 22:21:20
    基于聚類分析的無須人工干預(yù)的中文碎紙片自動拼接
    淺析聚類分析在郫縣煙草卷煙營銷方面的應(yīng)用
    基于聚類分析研究貴州省各地區(qū)經(jīng)濟發(fā)展綜合評價
    商情(2016年39期)2016-11-21 08:45:54
    新媒體用戶行為模式分析
    農(nóng)村居民家庭人均生活消費支出分析
    基于省會城市經(jīng)濟發(fā)展程度的實證分析
    中國市場(2016年33期)2016-10-18 12:16:58
    嫩草影院新地址| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| av.在线天堂| 国产精品一区二区性色av| 特级一级黄色大片| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲av免费在线观看| 日本 av在线| 日本黄色视频三级网站网址| 91久久精品电影网| 国产精品人妻久久久影院| 岛国在线免费视频观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 国产三级中文精品| 成人三级黄色视频| 变态另类丝袜制服| 制服丝袜大香蕉在线| 日韩亚洲欧美综合| 欧美潮喷喷水| 此物有八面人人有两片| 嫩草影院精品99| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 欧美潮喷喷水| 嫩草影视91久久| 国产高清视频在线观看网站| 人妻少妇偷人精品九色| 国产av麻豆久久久久久久| 久久香蕉精品热| 草草在线视频免费看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产精品女同一区二区软件 | 午夜福利18| 国产一区二区在线av高清观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| av黄色大香蕉| 动漫黄色视频在线观看| 长腿黑丝高跟| 国产麻豆成人av免费视频| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩中文字幕欧美一区二区| 深夜精品福利| 搡老妇女老女人老熟妇| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 毛片女人毛片| 日本一本二区三区精品| 三级国产精品欧美在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 午夜激情欧美在线| 赤兔流量卡办理| 三级国产精品欧美在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 一进一出抽搐动态| 欧美日本视频| 久久精品91蜜桃| 日韩欧美 国产精品| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲黑人精品在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲国产精品成人综合色| 精品久久久久久久末码| 久9热在线精品视频| 性欧美人与动物交配| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 天堂网av新在线| 韩国av一区二区三区四区| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲 国产 在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 欧美黑人巨大hd| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲av电影不卡..在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 夜夜爽天天搞| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产精品一区二区三区四区久久| 精品人妻熟女av久视频| 国产亚洲精品av在线| 97碰自拍视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产在视频线在精品| 在线a可以看的网站| 婷婷六月久久综合丁香| 中亚洲国语对白在线视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产精品永久免费网站| av在线蜜桃| 国产高清视频在线观看网站| aaaaa片日本免费| 91在线观看av| 一a级毛片在线观看| 亚洲五月天丁香| 日本三级黄在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久九九热精品免费| 亚洲av成人精品一区久久| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 淫秽高清视频在线观看| 校园春色视频在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 波多野结衣高清作品| 国产淫片久久久久久久久| 美女被艹到高潮喷水动态| 12—13女人毛片做爰片一| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 精品人妻熟女av久视频| 特级一级黄色大片| 亚洲综合色惰| 日韩亚洲欧美综合| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 黄色视频,在线免费观看| 国产视频内射| 亚洲,欧美,日韩| 免费看a级黄色片| 免费观看人在逋| 免费看日本二区| 黄色一级大片看看| 久久99热这里只有精品18| 99riav亚洲国产免费| 国产高清三级在线| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成人午夜高清在线视频| 久久久久久久久久久丰满 | 日本a在线网址| 亚洲美女搞黄在线观看 | 亚洲18禁久久av| 成人av在线播放网站| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲精品在线观看二区| 日韩av在线大香蕉| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产爱豆传媒在线观看| 日本a在线网址| 国产av一区在线观看免费| 中文亚洲av片在线观看爽| 天堂√8在线中文| 国产成人av教育| 亚洲无线观看免费| 一进一出好大好爽视频| 51国产日韩欧美| av在线亚洲专区| 日本 av在线| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| avwww免费| 在线观看午夜福利视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 日韩欧美精品v在线| 色播亚洲综合网| 天堂影院成人在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 18+在线观看网站| 精品久久久久久,| 久久6这里有精品| 亚洲美女搞黄在线观看 | 国产国拍精品亚洲av在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 人人妻人人看人人澡| 午夜福利在线在线| 亚洲国产精品成人综合色| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产午夜福利久久久久久| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 免费无遮挡裸体视频| 99热网站在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 国产乱人伦免费视频| 深夜精品福利| 老司机福利观看| .国产精品久久| 国产男人的电影天堂91| 免费看av在线观看网站| 国产熟女欧美一区二区| 舔av片在线| 亚洲欧美激情综合另类| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 午夜福利高清视频| 最新中文字幕久久久久| 制服丝袜大香蕉在线| av黄色大香蕉| 国产三级中文精品| 男人的好看免费观看在线视频| 人人妻人人看人人澡| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精华一区二区三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 长腿黑丝高跟| 婷婷丁香在线五月| 欧美+亚洲+日韩+国产| 岛国在线免费视频观看| 人人妻人人看人人澡| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 麻豆国产av国片精品| 国产免费男女视频| 色哟哟·www| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线天堂最新版资源| 亚洲精品国产成人久久av| 老司机福利观看| 国产午夜福利久久久久久| 午夜亚洲福利在线播放| 精品久久久噜噜| 亚洲乱码一区二区免费版| a在线观看视频网站| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩中字成人| 51国产日韩欧美| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 变态另类丝袜制服| 亚洲天堂国产精品一区在线| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲人与动物交配视频| 一级黄色大片毛片| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲三级黄色毛片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产一区二区激情短视频| 老司机福利观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| a级毛片a级免费在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲av中文av极速乱 | 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩强制内射视频| 观看免费一级毛片| 村上凉子中文字幕在线| 午夜免费激情av| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 又爽又黄无遮挡网站| 小说图片视频综合网站| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日日夜夜操网爽| 成人国产一区最新在线观看| ponron亚洲| 在线a可以看的网站| 草草在线视频免费看| 超碰av人人做人人爽久久| 国产人妻一区二区三区在| netflix在线观看网站| 丰满的人妻完整版| 成年免费大片在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 最近中文字幕高清免费大全6 | 三级国产精品欧美在线观看| 精品久久久久久久末码| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品久久久久久精品电影| 久99久视频精品免费| 欧美激情久久久久久爽电影| 露出奶头的视频| 国产在视频线在精品| 国产男靠女视频免费网站| videossex国产| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 黄色丝袜av网址大全| 村上凉子中文字幕在线| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久人妻熟女aⅴ| 最近中文字幕高清免费大全6| 久热这里只有精品99| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产精品伦人一区二区| 中文字幕av成人在线电影| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 色5月婷婷丁香| 一级毛片 在线播放| 日本一二三区视频观看| 亚洲,欧美,日韩| 五月玫瑰六月丁香| 性色av一级| 黄色日韩在线| 在线观看免费高清a一片| 国产毛片在线视频| 黑人猛操日本美女一级片| 久久久久久久久久久丰满| 日本av免费视频播放| 熟女人妻精品中文字幕| 日本黄大片高清| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 夫妻午夜视频| 黄色欧美视频在线观看| 国产一区二区三区av在线| 久久韩国三级中文字幕| 超碰97精品在线观看| 18禁在线播放成人免费| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产成人免费观看mmmm| 精品人妻熟女av久视频| 国产精品不卡视频一区二区| 日本午夜av视频| 91久久精品国产一区二区成人| 国产 一区 欧美 日韩| 身体一侧抽搐| 国产男人的电影天堂91| 亚洲精品日本国产第一区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 免费高清在线观看视频在线观看| 五月天丁香电影| 一边亲一边摸免费视频| 国产精品一二三区在线看| 男女免费视频国产| 午夜福利视频精品| 国产成人freesex在线| 一级a做视频免费观看| 精品亚洲成a人片在线观看 | 国产精品久久久久久精品古装| 永久免费av网站大全| 国产黄片视频在线免费观看| 色5月婷婷丁香| 九色成人免费人妻av| av在线app专区| 少妇被粗大猛烈的视频| 中文字幕制服av| 在线观看av片永久免费下载| 日本欧美国产在线视频| 最近中文字幕2019免费版| 天美传媒精品一区二区| 高清视频免费观看一区二区| 国产视频首页在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 99热网站在线观看| 妹子高潮喷水视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 高清黄色对白视频在线免费看 | 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲国产精品一区三区| 久久婷婷青草| 国产亚洲欧美精品永久| 国产一区有黄有色的免费视频| 日韩伦理黄色片| 国产乱来视频区| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久国内精品自在自线图片| 欧美日韩综合久久久久久| 久久99热这里只频精品6学生| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| videos熟女内射| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 最黄视频免费看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 22中文网久久字幕| 国产黄色视频一区二区在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 麻豆成人午夜福利视频| 国产永久视频网站| 青春草国产在线视频| 只有这里有精品99| 成人二区视频| 精品国产三级普通话版| 亚洲国产精品国产精品| 国产精品一及| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 在线播放无遮挡| 搡老乐熟女国产| 中国美白少妇内射xxxbb| 青春草亚洲视频在线观看| 91狼人影院| 黄色怎么调成土黄色| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国精品久久久久久国模美| 国产欧美亚洲国产| 亚洲高清免费不卡视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 亚洲四区av| 寂寞人妻少妇视频99o| 日本欧美国产在线视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 99热全是精品| 国产真实伦视频高清在线观看| 欧美3d第一页| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美高清性xxxxhd video| 99久久精品热视频| 少妇精品久久久久久久| 大码成人一级视频| 赤兔流量卡办理| 久久影院123| 久久av网站| 视频中文字幕在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日韩欧美精品免费久久| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产精品国产三级专区第一集| 免费看av在线观看网站| 草草在线视频免费看| videos熟女内射| 大码成人一级视频| 国产精品人妻久久久久久| 深爱激情五月婷婷| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 2021少妇久久久久久久久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 久久久久性生活片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 高清在线视频一区二区三区| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲国产精品999| 午夜免费鲁丝| 欧美日韩综合久久久久久| 在现免费观看毛片| 男人舔奶头视频| 秋霞在线观看毛片| 男女下面进入的视频免费午夜| 99久久人妻综合| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美日韩综合久久久久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 成人亚洲精品一区在线观看 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 在线观看一区二区三区激情| 日日撸夜夜添| 人妻 亚洲 视频| 我要看日韩黄色一级片| 久久久精品免费免费高清| 超碰av人人做人人爽久久| 女人久久www免费人成看片| 丰满少妇做爰视频| av福利片在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 免费高清在线观看视频在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 日韩国内少妇激情av| 亚洲av男天堂| 成人综合一区亚洲| 777米奇影视久久| 97超碰精品成人国产| 精品一区二区免费观看| 青春草视频在线免费观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲性久久影院| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美 日韩 精品 国产| 中国美白少妇内射xxxbb| 日韩中文字幕视频在线看片 | 久久99精品国语久久久| 成年av动漫网址| 亚洲精品日韩av片在线观看| 老熟女久久久| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲av成人精品一区久久| 一本色道久久久久久精品综合| 精品久久久噜噜| 亚洲国产欧美在线一区| 日韩一区二区视频免费看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产色爽女视频免费观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产精品99久久久久久久久| 97热精品久久久久久| 久久久久久久久久人人人人人人| 简卡轻食公司| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久精品久久久久久久性| 亚洲精品,欧美精品| 老熟女久久久| 亚洲av男天堂| 免费看不卡的av| 亚洲国产欧美人成| 亚洲最大成人中文| 最近中文字幕高清免费大全6| 一个人看的www免费观看视频| 久久 成人 亚洲| 蜜桃在线观看..| 最近中文字幕高清免费大全6| 91狼人影院| 丰满少妇做爰视频| 九九在线视频观看精品| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲不卡免费看| 久久久久精品久久久久真实原创| 成人一区二区视频在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 18禁在线播放成人免费| 午夜免费观看性视频| 亚洲天堂av无毛| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 久久热精品热| 男人和女人高潮做爰伦理| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 黄色一级大片看看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 日本wwww免费看| a级毛色黄片| 全区人妻精品视频| 精品久久久精品久久久| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 毛片女人毛片| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲,一卡二卡三卡| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产黄片视频在线免费观看| 久热这里只有精品99| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产欧美日韩精品一区二区| 日本黄大片高清| 一区二区三区免费毛片| 久久av网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产免费又黄又爽又色| 精品午夜福利在线看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一区在线观看完整版| 久久精品夜色国产| 永久免费av网站大全| 观看美女的网站| 日韩视频在线欧美| 久久久国产一区二区| 国产日韩欧美亚洲二区| 97超视频在线观看视频| 如何舔出高潮| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲国产色片| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 蜜桃在线观看..| 欧美性感艳星| 欧美97在线视频| 黑人高潮一二区| 嘟嘟电影网在线观看| 久久精品人妻少妇| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 身体一侧抽搐| 综合色丁香网| 久热这里只有精品99| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲人成网站高清观看| 一区二区av电影网| 国产一级毛片在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 干丝袜人妻中文字幕| 在线观看av片永久免费下载| 国产精品99久久99久久久不卡 | 激情五月婷婷亚洲| 欧美高清成人免费视频www| av国产久精品久网站免费入址| 国产有黄有色有爽视频| 久热久热在线精品观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 人妻 亚洲 视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 两个人的视频大全免费| 亚洲人与动物交配视频| 国产成人91sexporn| tube8黄色片| 视频中文字幕在线观看| 老司机影院毛片| 热re99久久精品国产66热6| 黄片wwwwww| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久ye,这里只有精品| 全区人妻精品视频| 美女高潮的动态| 亚洲怡红院男人天堂| 伦精品一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 在线播放无遮挡| 国产精品久久久久成人av| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲人成网站在线播| 日本wwww免费看| 美女中出高潮动态图| 欧美成人一区二区免费高清观看| 日本与韩国留学比较| 男人爽女人下面视频在线观看| 只有这里有精品99| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 大码成人一级视频| 国产伦在线观看视频一区| 久久精品久久精品一区二区三区| 免费观看在线日韩| 久久精品夜色国产|