• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    梔子栽培品種與近緣種的ITS2序列分析

    2021-11-18 13:23:52鄧紹勇李康琴賈全全陳宜均朱培林楊春霞
    關(guān)鍵詞:近緣親緣梔子

    鄧紹勇,李康琴,賈全全,陳宜均,朱培林,楊春霞

    (江西省林業(yè)科學(xué)院,江西 南昌 330032)

    【研究意義】我國天然分布梔子屬(Gardenia)植物有6 種[1],其中僅梔子(G.jasminoides)分布廣泛且普遍栽培,它是重要的觀賞、藥用、色素和油用資源植物,有著悠久的栽培歷史[2]。梔子不僅是傳統(tǒng)的香花植物,深受人們喜愛,梔子的成熟干燥果實(shí)又是常用的大宗中藥材原料,入藥具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血散淤的功效,現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)梔子具有保肝、抗炎、鎮(zhèn)痛及改善心腦血管病等方面的作用[3]。開展梔子栽培品種和近緣種ITS2 序列變異程度、遺傳距離和親緣關(guān)系研究,為梔子屬植物品種鑒定、親緣關(guān)系提供科學(xué)依據(jù),為梔子屬植物品種鑒定、遺傳育種及多樣性保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】梔子在長期的栽培利用過程中,形成了豐富穩(wěn)定的變異類型[4-5]。在形態(tài)組織方面,黃穎雅[6]研究了梔子和水梔子在組織構(gòu)造和粉末特征等方面的變異特征,楊雄志[7]研究了重瓣梔子、水梔子和梔子原種它們的根皮層中石細(xì)胞、莖纖維及草酸鈣柱晶、方晶和簇晶等的區(qū)別,戈群妹等[8]發(fā)現(xiàn)重瓣梔子花具有兩類非蜜腺的分泌結(jié)構(gòu),鄧紹勇等[9]對梔子品種進(jìn)行了系統(tǒng)的分類整理,并從數(shù)量分類視角對梔子栽培品種與近緣種親緣關(guān)系進(jìn)行了探討[10];在細(xì)胞學(xué)水平方面,楊兆起等[11]發(fā)現(xiàn)梔子和水梔子長短染色體構(gòu)成不同。郝大翠等[12]發(fā)現(xiàn)大花梔子、狹葉梔子和梔子的核型不同且花粉粒育性從低到高變化,花重瓣的觀賞型梔子有染色體數(shù)目加倍的現(xiàn)象;在分子水平方面,楊銳培[13]采用RAPD 標(biāo)記分析江西樟樹形態(tài)上區(qū)別明顯的14 個梔子樣品發(fā)現(xiàn)分子聚類結(jié)果和表型聚類結(jié)果類似,葛菲等[14]采用RAPD 標(biāo)記分析發(fā)現(xiàn)梔子與重瓣梔子親緣關(guān)系最近,與雀舌梔子親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。伍美慧等[15]發(fā)現(xiàn)通過matK引物擴(kuò)增的序列對梔子屬種內(nèi)和種間的鑒定成功率相對更高,認(rèn)為cpDNA 條形碼較適合梔子屬物種鑒別的?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】ITS2位于5.8S 和28S rRNA 之間,堿基信息較多且核苷酸順序變化較大,信息位點(diǎn)豐富。ITS2條形碼技術(shù)是當(dāng)前常見的分子鑒定技術(shù)之一,其片段普遍較短且在物種水平的變異較快,技術(shù)簡便高效,不受樣品形態(tài)性狀限制等優(yōu)點(diǎn),在藥材真?zhèn)舞b定、親緣關(guān)系和系統(tǒng)進(jìn)化等研究中都有廣泛的應(yīng)用[16]。如吳波等[17]發(fā)現(xiàn)ITS2DNA 條形碼可以準(zhǔn)確有效地用于吳茱萸藥材3 種不同基原植物及偽品楝葉吳茱萸的親緣關(guān)系研究和真?zhèn)舞b別,陳鏡安等[18]研究得出其可作為鑒定竹節(jié)參與其非同屬混偽品DNA 條形碼之一,王麗芝等[16]同樣以ITS2序列分析探討了川芎的起源以及川芎種質(zhì)間的親緣關(guān)系。在對梔子進(jìn)行分類鑒定研究方面,前人除了采用形態(tài)及數(shù)量分類方法外,伍美慧等[15]楊中揚(yáng)等[19]采用國際通用的植物DNA 條形碼引物(ITS2、matK、rbcL及psbA-trnH)構(gòu)建了梔子的DNA 條形碼,黃易等[20]研究認(rèn)為ITS2序列較適用于梔子及其近緣茜草科植物、混偽品物種的鑒別。因此,采用ITS2序列分析梔子栽培品種與近緣種的變異情況是很有必要的?!緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究以梔子18 個栽培品種和3 個近緣種共38 個樣品為研究對象,克服了前人對梔子資源DNA 條形碼鑒定研究中樣品過少、研究材料形態(tài)分類界定模糊等不足,通過PCR 擴(kuò)增及測序獲得ITS2 序列數(shù)據(jù),系統(tǒng)探討了梔子栽培品種和近緣種的序列變異程度、遺傳距離和親緣關(guān)系,為梔子屬植物品種鑒定、親緣關(guān)系分析及品種起源提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    試驗(yàn)材料來源于云南、四川、廣西、湖南、江西、浙江和福建等省,除大黃梔子(G.sootepensis)外,均栽植保存于江西省林業(yè)科學(xué)院中藥資源圃內(nèi),共有梔子18個栽培品種[9-10]和3個近緣種共38個樣品(表1)。試驗(yàn)材料均由鄧紹勇副研究員鑒定后,葉片用于DNA的提取。

    表1 試驗(yàn)材料編號、名稱及來源Tab.1 The code,name and origin of Gardenia materials

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 DNA 提取 野外采集植株枝梢嫩葉,置于液氮罐內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室,-70 ℃低溫冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。用Omega 植物基因組DNA 抽提試劑盒,按其說明步驟提取樣品的總DNA。DNA 濃度和質(zhì)量由分光光度計(jì)(Nanodrop ND-2000)(thermo electron corporation,USA)及10 g/L 瓊脂糖凝膠電泳檢測,Lamda HindⅢMarker(Mbi Fermentas,Shenzhen,Guangdong,China)作為標(biāo)準(zhǔn)分子量。

    1.2.2 PCR 擴(kuò)增及測序 PCR 擴(kuò)增和測序的正向引物為5′-GCATCGATGAAGAACGCAGC-3′,反向引物為5′-TCCTCCGCTTATTGATAT-3′,PCR 反應(yīng)體系和程序參考黃易等[20]的具體方法,引物合成和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后的測序工作均由生工生物工程(上海)股份有限公司完成。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    測序后的峰圖用CodonCode Aligner v6.0.1 進(jìn)行拼接校對,并將引物區(qū)剔除。采用Lasergene EditSeq 11.1 對所有樣品ITS2 序列的平均堿基組成百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì),并用MEGA7.0(molecular evolutionary genetics analysis)進(jìn)行比對分析,統(tǒng)計(jì)保守位點(diǎn)數(shù)和變異位點(diǎn)等,基于K2P模型分析梔子栽培品種與近緣種的遺傳距離,用UPGMA 法構(gòu)建梔子栽培品種與近緣種的系統(tǒng)聚類樹,并以Bootstrap 方法(1000 次重復(fù))檢驗(yàn)各分枝的支持率。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 序列變異程度分析

    為分析梔子栽培品種間及與近緣種間的遺傳分化程度和差異大小,本研究采用EditSeq 11.1統(tǒng)計(jì)了38個樣品ITS2 片段的長度范圍和平均堿基組成百分比,分析結(jié)果見表2。狹葉梔子(G.stenophylla)和梔子的ITS2 序列長度均為347 bp,平均GC 含量為66.86%。大黃梔子序列長度為355 bp,GC 含量為67.61%。梔子栽培品種序列長度除‘燃葉’、‘金福水梔’為348 bp 外,其他品種序列長度和梔子一致,均為347 bp,GC 含量為66.28%~67.15%,其中‘白蟾’GC 含量最低(66.28%),‘金元’、‘分關(guān)1 號’、‘眾恒’、‘舞凝’、‘荷花’、‘水梔子’6 個品種GC 含量為66.57%,金福水梔GC 含量為66.62%,‘燃葉’GC 含量為66.67%,‘香雪’、‘大花梔子’、‘小白蟾’、‘花葉梔子’、‘金花梔子’、‘白盞’、‘寬棱水梔’7個品種GC 含量為66.86%,‘雀舌梔子’和‘銀邊雀舌’2個品種GC 含量最高(67.15%)。梔子栽培品種間及與近緣種間的平均GC 含量相差并不明顯。

    表2 梔子栽培品種與近緣種ITS2片段的長度范圍、平均堿基組成Tab.2 Length range and average base composition of ITS2 fragment of cultivars and their related wild species in the genus Gardenia

    用MEGA7.0對梔子栽培品種與近緣種38條ITS2 序列進(jìn)行對比分析,比對后共產(chǎn)生12個變異位點(diǎn),10個堿基插入,各分析樣品的變異位點(diǎn)詳見表3。由表3可知,梔子和狹葉梔子種內(nèi)各有1個變異位點(diǎn),‘金福水梔’品種內(nèi)有3 個變異位點(diǎn);10 個堿基插入有8 個是大黃梔子所獨(dú)有的,且存在5 個特異的變異位點(diǎn)(分別是187,268,274,286,287 bp 處)。分析發(fā)現(xiàn),一部分表型特征有共性的品種之間有共同的變異位點(diǎn),如植株矮小、葉片小而窄長的品種‘雀舌梔子’和‘銀邊雀舌’在50 bp 處,果實(shí)相對較大的品種‘分關(guān)1 號’、‘金福水梔’和‘金元’在84 bp 處等。一些品種還具有特異的變異位點(diǎn),如‘白蟾’在133 bp處、‘小白蟾’在229 bp處等。

    表3 梔子栽培品種與近緣種ITS2 片段的變異位點(diǎn)Tab.3 Variable sites of ITS2 fragment of cultivars and their related wild species in the genus Gardenia

    2.2 序列遺傳距離分析

    采用MEGA7.0軟件,根據(jù)K2P 模型計(jì)算梔子栽培品種與近緣種樣品序列間的遺傳距離(表4),梔子18 個栽培品種和3個近緣種共38個樣品間K2P平均遺傳距離為0.005 5,大黃梔子和‘白蟾’間遺傳距離最大,為0.020 6;梔子、狹葉梔子和大黃梔子8個樣品間的平均遺傳距離為0.005 2,最大遺傳距離為0.017 6,其中梔子和大黃梔子間平均遺傳距離為0.015 6,狹葉梔子和大黃梔子間平均遺傳距離為0.016 1,梔子和狹葉梔子間平均遺傳距離為0.001 4;大黃梔子和梔子18 個栽培品種間遺傳距離介于0.014 6~0.020 6,平均遺傳距離為0.017 9,狹葉梔子、梔子和18 個栽培品種間遺傳距離介于0~0.008 7,平均遺傳距離為0.005 1;梔子18個栽培品種間遺傳距離介于0~0.008 7,平均遺傳距離為0.005 4,其中‘雀舌梔子’、‘銀邊雀舌’、‘分關(guān)1號’、‘眾恒’、‘舞凝’、‘金福水梔’、‘金元’等和‘白蟾’間遺傳距離較大。

    表4 基于ITS2 序列的梔子栽培品種與近緣種的K2P 遺傳距離Tab.4 K2P genetic distance between of G.jasminoides cultivars and their related wild species based on ITS2 sequences

    2.3 梔子栽培品種與近緣種系統(tǒng)聚類樹的構(gòu)建

    用UPGMA 法基于ITS2 序列構(gòu)建梔子栽培品種與近緣種的系統(tǒng)聚類樹。如圖1所示,梔子屬喬木樹種大黃梔子單獨(dú)成一支,與梔子屬其它種以及梔子栽培品種的親緣關(guān)系最遠(yuǎn),而狹葉梔子和野生梔子所有個體總體表現(xiàn)出較近的親緣關(guān)系;分枝較密集、枝條近于平展的梔子品種‘眾恒’、‘舞凝’聚集在一起;花重瓣、花徑較大的‘荷花’、‘白蟾’聚集在一起,而花重瓣、花小、葉片狹小的‘雀舌梔子’、‘銀邊雀舌’聚集在一起,也有花重瓣、花徑相對較小的品種‘小白蟾’、‘燃葉’和花單瓣的‘水梔子’聚集在一起;‘分關(guān)1號’和果實(shí)個體較大的‘金元’、‘金福水梔’聚集在一起,大果品種‘寬棱水梔’、‘金福水梔’、‘大花梔子’也聚集在一起,表現(xiàn)出較近的親緣關(guān)系;狹葉梔子和梔子既有與果實(shí)較小的品種‘香雪’、‘白盞’聚集一起的個體,又有與果實(shí)較大的品種‘寬棱水梔’、‘金福水梔’、‘大花梔子’聚集在一起的個體;葉形相似的狹葉梔子和‘雀舌梔子’、‘銀邊雀舌’并沒聚集在一起,‘香雪’、‘白盞’、‘金花梔子’等非傳統(tǒng)梔子品種,出現(xiàn)時間相對較短,和野生梔子、狹葉梔子表現(xiàn)出較近的親緣關(guān)系。

    圖1 基于ITS2序列構(gòu)建梔子栽培品種與近緣種的UPGMA樹Fig.1 Construction of UPGMA tree of G.jasminoides cultivars and their related wild species based on ITS2 sequences

    3 結(jié)論與討論

    梔子成熟果實(shí)是傳統(tǒng)的中藥和色素原料,因野生資源無法滿足日益增長的市場需要,目前主要靠人工種植。果用梔子在長期人工種植過程中,形成了一些較為穩(wěn)定且有一定種植規(guī)模的品種類型,如廣西等地的長果型水梔子,浙江等地的果大棱寬型水梔子,果實(shí)相對野生梔子較大且產(chǎn)量高的福建省良種‘分關(guān)1號’[10],這些品種在銷售市場上的價格有較大差距,因此,能準(zhǔn)確購買到自己選擇的目標(biāo)品種是種植梔子最為關(guān)鍵的一步,而梔子苗期通過葉片等營養(yǎng)器官性狀無法準(zhǔn)確可靠地鑒定梔子品種。由于DNA 條形碼技術(shù)不受檢材形態(tài)性狀限制,能在植物幼苗階段通過葉片樣品進(jìn)行有效的鑒定,伍美慧等[15]研究了引物序列matK、rbcL和psbA對梔子屬植物的鑒定效果,認(rèn)為matK是適合梔子屬植物鑒別的較好DNA 條形碼。而楊中揚(yáng)[19]研究認(rèn)為在以rbcL引物作為區(qū)分梔子品種的前提下,matK、ITS2、psbA-trnH可以依次將梔子的不同種質(zhì)逐漸細(xì)分下去。相對于其它種類的序列片段,且ITS2區(qū)段具有擴(kuò)增容易、通用性強(qiáng)和成本低等優(yōu)點(diǎn),是目前普遍認(rèn)可的植物DNA 條形碼通用序列。黃易等[20]研究認(rèn)為ITS2序列較適用于梔子混偽品的物種鑒別。因此,在前人探索研究的基礎(chǔ)上,本研究選取了更多性狀穩(wěn)定的梔子品種和3個近緣種,其中大黃梔子是所有供試樣品中唯一的喬木樹種,且各部被毛。研究結(jié)果表明,3種梔子屬植物中,大黃梔子ITS2序列長度最長,為355 bp,而狹葉梔子、梔子和大部分梔子品種的序列長度均為347 bp,序列長度明顯長于黃易等[20]對梔子及其茜草科植物、混偽品種間序列長度為201~235 bp 的結(jié)果。梔子栽培品種間以及和近緣種間的平均GC 含量相差也不明顯,表現(xiàn)出較高的保守性,且均低于黃易等[20]梔子平均GC含量為74.1%的結(jié)果。同時發(fā)現(xiàn)一部分表型特征有共性的品種之間發(fā)現(xiàn)有共同的變異位點(diǎn),如植株矮小、葉片小而窄長的品種‘雀舌梔子’、‘銀邊雀舌’在50 bp處,果實(shí)相對較大的品種‘分關(guān)1號’、‘金福水梔’、‘金元’在84 bp處等;一部分品種具有特異的變異位點(diǎn),如‘白蟾’在133 bp處,‘小白蟾’在229 bp 處等,說明ITS2 序列用于鑒定梔子屬品種及近緣種達(dá)到了一定的預(yù)期效果,這些研究結(jié)果對梔子品種鑒定有較大的應(yīng)用價值。

    在遺傳距離和親緣關(guān)系結(jié)論方面,楊中揚(yáng)[19]研究得出梔子種內(nèi)K2P距離介于0.000~0.011,種內(nèi)平均K2P 距離為0.002 5,黃易等[20]的研究結(jié)果是梔子種內(nèi)K2P 距離介于0.000~0.005,種內(nèi)平均K2P 距離為0.002,其中重慶梔子、四川巴中梔子、水梔子與其他梔子遺傳距離較近,K2P距離為0.005。本文研究得出梔子18個栽培品種和3個近緣種共38個樣品間K2P平均遺傳距離為0.005 5,其中梔子屬種間平均遺傳距離為0.005 2,梔子18個栽培品種間遺傳距離介于0.000 0~0.008 7,平均遺傳距離為0.005 4,與前人研究結(jié)論基本一致。另外,梔子屬種間遺傳距離普遍小于近緣種和品種間的遺傳距離,大于梔子栽培品種之間的遺傳距離,大黃梔子和‘白蟾’間遺傳距離最大。系統(tǒng)聚類顯示大黃梔子單獨(dú)成一支,與梔子屬其它種和梔子栽培品種親緣關(guān)系最遠(yuǎn),狹葉梔子并沒有和葉型相近的‘雀舌梔子’、‘銀邊雀舌’聚集在一起,而和野生梔子表現(xiàn)出較近的親緣關(guān)系;‘分關(guān)1號’和果實(shí)個體較大的‘金元’、‘金福水梔’聚集在一起,大果品種‘寬棱水梔’、‘金福水梔’、‘大花梔子’也聚集在一起,表現(xiàn)出較近的親緣關(guān)系;‘香雪’、‘白盞’、‘金花梔子’等非傳統(tǒng)梔子品種,出現(xiàn)時間相對較短,和野生梔子、狹葉梔子表現(xiàn)出較近的親緣關(guān)系。部分聚類結(jié)果和以表型數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)的數(shù)量分類結(jié)果類似,但并沒有像數(shù)量分類結(jié)果那樣以花重瓣、大果、小果等性狀形成明顯的系統(tǒng)分枝[10],研究結(jié)果對梔子品種起源、資源保護(hù)和種質(zhì)創(chuàng)新等方面有重要的指導(dǎo)價值。

    猜你喜歡
    近緣親緣梔子
    谷子近緣野生種的親緣關(guān)系及其利用研究
    中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所藥用植物親緣學(xué)研究中心
    清熱消暑山梔子
    梔子(趙潤懷 攝)
    菊科藥用植物遺傳多樣性及親緣關(guān)系的ISSR分析
    小白菜種質(zhì)遺傳多樣性與親緣關(guān)系的SRAP 和SSR分析
    北細(xì)辛及其近緣植物葉片顯微結(jié)構(gòu)比較研究
    六月梔子香
    金色年華(2016年11期)2016-02-28 01:42:20
    檢疫性雜草假高粱與近緣植物種子的波譜鑒別方法
    少年情懷,梔子初心
    亚洲国产欧美在线一区| 日韩免费高清中文字幕av| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲欧洲国产日韩| 一边亲一边摸免费视频| 男女国产视频网站| 美女国产高潮福利片在线看| 国产乱人偷精品视频| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲国产精品999| 日韩一本色道免费dvd| 国产极品天堂在线| 中国国产av一级| 日日爽夜夜爽网站| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 老熟女久久久| 午夜福利,免费看| 国产精品一区二区在线观看99| 永久免费av网站大全| 国产永久视频网站| 大香蕉久久成人网| 爱豆传媒免费全集在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 精品久久久久久电影网| 熟女电影av网| 丰满少妇做爰视频| 久久久久久久精品精品| 精品一区二区免费观看| 亚洲天堂av无毛| 十八禁网站网址无遮挡| 国产毛片在线视频| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久国内精品自在自线图片| 精品少妇内射三级| 色吧在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲精品乱久久久久久| a级毛片在线看网站| 女人久久www免费人成看片| 永久网站在线| 国产国语露脸激情在线看| 夫妻午夜视频| 丝袜美足系列| 久久精品国产亚洲网站| 免费人成在线观看视频色| 99国产精品免费福利视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲国产av新网站| 国产成人av激情在线播放 | 26uuu在线亚洲综合色| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 99久久中文字幕三级久久日本| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 最近2019中文字幕mv第一页| 高清毛片免费看| 两个人免费观看高清视频| 女性生殖器流出的白浆| 母亲3免费完整高清在线观看 | 青春草国产在线视频| 亚洲图色成人| 91精品三级在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 国产一区二区在线观看av| 热re99久久国产66热| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 一个人看视频在线观看www免费| 精品熟女少妇av免费看| 草草在线视频免费看| 韩国av在线不卡| 久久亚洲国产成人精品v| 99国产综合亚洲精品| 亚洲国产精品专区欧美| 久久久久久久精品精品| 亚洲四区av| 国产免费一区二区三区四区乱码| 精品视频人人做人人爽| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 一边亲一边摸免费视频| 日韩大片免费观看网站| 日本与韩国留学比较| 男女边摸边吃奶| 久久99一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品国产av在线观看| 久久这里有精品视频免费| 免费少妇av软件| 特大巨黑吊av在线直播| 精品一品国产午夜福利视频| 国产精品久久久久久久电影| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲,一卡二卡三卡| 水蜜桃什么品种好| 国产深夜福利视频在线观看| 人妻一区二区av| 日本黄大片高清| 亚洲怡红院男人天堂| 18禁在线播放成人免费| 水蜜桃什么品种好| 蜜桃在线观看..| 亚洲第一区二区三区不卡| 91久久精品电影网| 亚洲中文av在线| 成人亚洲欧美一区二区av| av在线观看视频网站免费| 在线观看三级黄色| 久久午夜福利片| 五月天丁香电影| 自线自在国产av| 91精品三级在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 久久久久视频综合| 美女福利国产在线| 免费看av在线观看网站| 人妻一区二区av| 成人国产麻豆网| 亚洲国产精品一区三区| 51国产日韩欧美| 亚洲久久久国产精品| 22中文网久久字幕| 夫妻午夜视频| 秋霞在线观看毛片| 精品人妻在线不人妻| 亚洲经典国产精华液单| 国产极品天堂在线| 黄片播放在线免费| 97精品久久久久久久久久精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久国产精品大桥未久av| 女警被强在线播放| 精品少妇内射三级| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 极品教师在线免费播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 真人做人爱边吃奶动态| 高清欧美精品videossex| 飞空精品影院首页| videosex国产| 国产欧美日韩一区二区精品| 多毛熟女@视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产黄色免费在线视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线观看舔阴道视频| 日韩免费av在线播放| 99国产精品免费福利视频| 亚洲人成电影观看| 国产片内射在线| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 999久久久国产精品视频| 十八禁网站免费在线| 久久久久国内视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 香蕉久久夜色| 在线永久观看黄色视频| 电影成人av| 高清av免费在线| 我要看黄色一级片免费的| 新久久久久国产一级毛片| 久久久国产精品麻豆| 国产av又大| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲精品在线美女| 久久天堂一区二区三区四区| 狠狠狠狠99中文字幕| 黄色片一级片一级黄色片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜福利视频精品| 亚洲美女黄片视频| 久久99一区二区三区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产野战对白在线观看| 久久中文字幕一级| 国产男女内射视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 黄色视频,在线免费观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲精品国产区一区二| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲国产av新网站| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲自偷自拍图片 自拍| a级毛片黄视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲免费av在线视频| 亚洲av成人一区二区三| 悠悠久久av| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美日韩成人在线一区二区| aaaaa片日本免费| 国产男女内射视频| 夫妻午夜视频| 女性被躁到高潮视频| 国产精品久久久av美女十八| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲全国av大片| 国产淫语在线视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲国产av影院在线观看| 制服人妻中文乱码| 激情视频va一区二区三区| 亚洲av美国av| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人免费无遮挡视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 性高湖久久久久久久久免费观看| 老司机午夜福利在线观看视频 | www.自偷自拍.com| 91av网站免费观看| 怎么达到女性高潮| 在线观看一区二区三区激情| 99re在线观看精品视频| 丝袜人妻中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 免费在线观看影片大全网站| 十八禁网站免费在线| av网站在线播放免费| 悠悠久久av| 精品福利永久在线观看| 国产精品久久久久成人av| 深夜精品福利| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 成人国产一区最新在线观看| 久久性视频一级片| 亚洲专区国产一区二区| 性色av乱码一区二区三区2| 一级毛片女人18水好多| 一进一出好大好爽视频| 欧美成人免费av一区二区三区 | 国产精品影院久久| 99香蕉大伊视频| 9热在线视频观看99| 国产在线免费精品| 亚洲国产av新网站| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 免费观看人在逋| 最新在线观看一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 伦理电影免费视频| 真人做人爱边吃奶动态| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲人成77777在线视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 一区二区三区激情视频| 黄色视频,在线免费观看| 老司机福利观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲成人国产一区在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产精品一区二区在线不卡| 999久久久精品免费观看国产| 欧美激情极品国产一区二区三区| bbb黄色大片| 成人永久免费在线观看视频 | 色视频在线一区二区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久中文字幕一级| 欧美国产精品一级二级三级| 精品人妻1区二区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 黑人欧美特级aaaaaa片| 另类精品久久| 一级,二级,三级黄色视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 黄色 视频免费看| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 夜夜骑夜夜射夜夜干| av在线播放免费不卡| 超色免费av| 久久99热这里只频精品6学生| 自线自在国产av| cao死你这个sao货| 精品一区二区三区av网在线观看 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 在线观看免费午夜福利视频| 成年人午夜在线观看视频| 久久中文看片网| 视频区图区小说| 一本大道久久a久久精品| 少妇精品久久久久久久| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产一区二区三区综合在线观看| 十八禁人妻一区二区| 亚洲国产欧美网| 免费少妇av软件| 免费看十八禁软件| 午夜日韩欧美国产| av在线播放免费不卡| 中文欧美无线码| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 久久久久久人人人人人| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲视频免费观看视频| 大码成人一级视频| 日本黄色视频三级网站网址 | 国产精品一区二区精品视频观看| 黄片小视频在线播放| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成人影院久久| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 最新美女视频免费是黄的| 欧美成人午夜精品| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 操美女的视频在线观看| 国产精品免费视频内射| 久久久欧美国产精品| 日韩大码丰满熟妇| 高清av免费在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 午夜福利影视在线免费观看| 国产精品久久久久久精品古装| 国产一区二区三区综合在线观看| 免费不卡黄色视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产伦人伦偷精品视频| 色视频在线一区二区三区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产精品 国内视频| 免费在线观看日本一区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产成人影院久久av| 精品一区二区三区av网在线观看 | 国产精品一区二区精品视频观看| 国产三级黄色录像| 午夜久久久在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产不卡一卡二| 国产精品一区二区在线观看99| 午夜精品久久久久久毛片777| 高清在线国产一区| 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品国产区一区二| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品免费大片| 国产精品久久久久久精品古装| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产激情久久老熟女| 一二三四在线观看免费中文在| 啦啦啦 在线观看视频| 日本一区二区免费在线视频| 激情在线观看视频在线高清 | 日日爽夜夜爽网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产99久久九九免费精品| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久性视频一级片| 欧美激情久久久久久爽电影 | 人人妻人人澡人人看| 水蜜桃什么品种好| 99国产综合亚洲精品| 国产精品一区二区在线不卡| 男女午夜视频在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 又紧又爽又黄一区二区| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲国产看品久久| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美性长视频在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 99久久国产精品久久久| 中文亚洲av片在线观看爽 | 中文字幕精品免费在线观看视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久 成人 亚洲| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美精品一区二区大全| 中文字幕高清在线视频| 老司机影院毛片| 丝袜美足系列| 一夜夜www| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 丝袜美足系列| 99国产精品免费福利视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久久久久久久久免费视频了| 男人舔女人的私密视频| cao死你这个sao货| 丝袜美足系列| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产男女内射视频| av天堂在线播放| 国产精品偷伦视频观看了| 成年人午夜在线观看视频| 午夜福利免费观看在线| 黄色a级毛片大全视频| 国产高清激情床上av| 国产麻豆69| 欧美日韩黄片免| 国产精品 国内视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产精品九九99| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 高清毛片免费观看视频网站 | 久久中文字幕一级| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲男人天堂网一区| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲第一av免费看| 极品人妻少妇av视频| 999精品在线视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 曰老女人黄片| 亚洲av电影在线进入| 精品少妇久久久久久888优播| 久久久精品免费免费高清| 色婷婷av一区二区三区视频| 在线观看免费视频日本深夜| 捣出白浆h1v1| 脱女人内裤的视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产成人影院久久av| 欧美激情久久久久久爽电影 | 又大又爽又粗| 中文字幕av电影在线播放| 久久精品国产a三级三级三级| a级毛片在线看网站| 亚洲午夜理论影院| 欧美在线黄色| 欧美日韩一级在线毛片| 又紧又爽又黄一区二区| 91成年电影在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 一二三四社区在线视频社区8| 中文字幕色久视频| 不卡av一区二区三区| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 香蕉丝袜av| 国产av国产精品国产| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 青青草视频在线视频观看| 国产精品九九99| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲av国产av综合av卡| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 成年女人毛片免费观看观看9 | 另类精品久久| 又大又爽又粗| 久久国产精品影院| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一本综合久久免费| 成在线人永久免费视频| 天堂动漫精品| 欧美久久黑人一区二区| 久久中文看片网| 国产精品 欧美亚洲| 国产真人三级小视频在线观看| 中文字幕色久视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久久久国内视频| 女同久久另类99精品国产91| 久久亚洲真实| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产在线视频一区二区| 国产在视频线精品| 最新的欧美精品一区二区| 黄色 视频免费看| 在线av久久热| 一进一出好大好爽视频| 亚洲成人手机| 久久免费观看电影| 男人舔女人的私密视频| 99久久精品国产亚洲精品| 黄色 视频免费看| 一区二区三区精品91| 国产视频一区二区在线看| 69精品国产乱码久久久| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美大码av| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 最新美女视频免费是黄的| 成人亚洲精品一区在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 成年人免费黄色播放视频| 不卡av一区二区三区| 国产精品成人在线| tube8黄色片| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 两性夫妻黄色片| 曰老女人黄片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲午夜理论影院| 国产男女超爽视频在线观看| 久久 成人 亚洲| 在线天堂中文资源库| 亚洲情色 制服丝袜| 露出奶头的视频| av免费在线观看网站| 中文欧美无线码| av线在线观看网站| 亚洲精品国产一区二区精华液| 99国产精品免费福利视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 在线观看www视频免费| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久精品91无色码中文字幕| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产片内射在线| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产精品免费视频内射| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲精品一二三| 精品卡一卡二卡四卡免费| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美久久黑人一区二区| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美亚洲日本最大视频资源| 老司机福利观看| 日韩三级视频一区二区三区| 女性被躁到高潮视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产高清激情床上av| 亚洲成人手机| 高清毛片免费观看视频网站 | 无限看片的www在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 波多野结衣av一区二区av| 久久热在线av| 中文字幕人妻丝袜制服| 黄色 视频免费看| 亚洲avbb在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 99热网站在线观看| 天堂动漫精品| 9热在线视频观看99| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲精品一二三| av电影中文网址| 亚洲熟女精品中文字幕| h视频一区二区三区| 国产1区2区3区精品| 久久精品成人免费网站| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 999精品在线视频| 国产男女内射视频| 亚洲人成77777在线视频| 精品国产亚洲在线| 国产亚洲欧美精品永久| 国产一区二区激情短视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产成人免费观看mmmm| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品国产高清国产av | 午夜日韩欧美国产| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产精品久久久av美女十八| 丁香六月欧美| 一级,二级,三级黄色视频| 精品亚洲成国产av| 制服人妻中文乱码| 久久99一区二区三区| 国产深夜福利视频在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 人成视频在线观看免费观看| 97在线人人人人妻| 日本av手机在线免费观看| a级毛片在线看网站| 免费黄频网站在线观看国产| 啦啦啦在线免费观看视频4| 免费看十八禁软件| 在线观看一区二区三区激情| 美女福利国产在线| 中文欧美无线码| 午夜福利乱码中文字幕| 美国免费a级毛片| 欧美日韩福利视频一区二区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 我要看黄色一级片免费的| 日本一区二区免费在线视频| 精品乱码久久久久久99久播| 激情在线观看视频在线高清 | 超碰成人久久|