燙狗脊工業(yè)化大生產(chǎn)炮制工藝優(yōu)化研究

尹 磊，黨全偉，朱月健，李冬梅，段體斌，劉國衛(wèi)

(1.安徽普仁中藥飲片有限公司，安徽 亳州 236800；2.中藥提取安徽省技術(shù)創(chuàng)新中心，安徽 亳州 236800；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中一公司，河南 鄭州 450000)

狗脊為蚌殼蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.的干燥根莖。

始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有祛風(fēng)濕、補肝腎、強腰膝等功效。其炮制品又分為生狗脊片、熟狗脊與燙狗脊等，通過去毛、蒸制、炒制等方法去除表面須毛并增加功效；一方面通過機械滾筒或砂燙等方法去除藥材表面金黃色絨毛，減少刺喉傷肺等，同時通過砂燙等進行高溫炮制，炮制后其成分經(jīng)過轉(zhuǎn)化也增強了補肝腎、強腰膝等功效[1-2]。徐鋼等[3]發(fā)現(xiàn)狗脊各炮制品正丁醇提取部位對于成骨細胞有顯著增值作用，且炮制品的增值作用大于生品。鞠成國等[4]分析發(fā)現(xiàn)狗脊及其炮制品和狗脊毛具有鎮(zhèn)痛和不同程度的活血作用。許枬等[5]比較分析燙狗脊炮制前后的氨基酸、揮發(fā)油、鞣質(zhì)等成分變化，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過砂燙后，燙狗脊揮發(fā)油、鞣質(zhì)和游離性氨基酸均有所降低，但水解氨基酸含量增高，同時總糖經(jīng)過高溫轉(zhuǎn)化，其最終生成5-羥甲基糠醛，該成分與氨基酸進一步聚合產(chǎn)生梅拉德反應(yīng)，該反應(yīng)與熟地黃、酒黃精炮制過程類似，成品顏色加深，推測狗脊通過砂燙炮制后可增強其補益作用。白桐菲等[6-7]研究發(fā)現(xiàn)，狗脊砂燙后原兒茶酸和咖啡酸呈現(xiàn)升高趨勢。趙敏杰等[8]分析狗脊炮制過程中的成分變化，發(fā)現(xiàn)水溶性蛋白在炮制后呈一定程度降低，總酚酸和總多糖的含量呈一定程度的升高，其結(jié)果與其他文獻報道一致，說明狗脊炮制過程變化的復(fù)雜性和工藝研究的必要性。

葉森等[9]通過分析市售燙狗脊飲片的質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)原兒茶酸含量差異較大。李丹等[10]采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化燙狗脊炮制工藝，其最佳工藝為砂量比4.67、砂燙時間5.87 min、溫度177.99 ℃。梁志毅等[11]通過分析發(fā)現(xiàn)，微波炮制狗脊過程中含量與顏色有一定關(guān)聯(lián)性，可作為炮制過程中的監(jiān)測依據(jù)。本研究在飲片生產(chǎn)過程中也發(fā)現(xiàn)燙狗脊飲片受炮制工藝參數(shù)影響較大，質(zhì)量難以穩(wěn)定，表面顏色變化較快，為優(yōu)化當(dāng)前工藝參數(shù)和優(yōu)化成品顏色性狀，結(jié)合當(dāng)前藥典檢測指標(biāo)和外觀性狀，分別考察了輔料沙子用量、炒制溫度和時間，以期生產(chǎn)出合格、穩(wěn)定、優(yōu)質(zhì)的燙狗脊成品?，F(xiàn)將研究過程報道如下。

1 材料與試劑

炒藥機(杭州金竺機械有限公司)、紅外測溫儀(山東奧博自動化科技有限公司)、手工篩、UITiMate3000高效液相色譜儀(美國戴安(中國)有限公司)、BSM電子天平(上海卓精電子科技有限公司)、CP214電子天平(奧豪斯儀器(常州)有限公司)、DHG-9101-3A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司)CANON EOS 77D 照相機(日本佳能株式會社)。

原兒茶酸對照品(批號：110809-200604)，對照品購買于中國食品藥品檢定研究院；甲醇、冰醋酸為色譜純；純凈水。

狗脊藥材由安徽普仁中藥飲片有限公司提供，取自待包裝產(chǎn)品庫(批號1904162)，經(jīng)安徽普仁中藥飲片有限公司生藥專家朱月健鑒定為凈制后的生狗脊片。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品處理與檢測方法

2.1.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-1%冰醋酸溶液(5∶95)為流動相；檢測波長為260 nm。理論板數(shù)按原兒茶酸峰計算應(yīng)不低于3 000。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，計算原兒茶酸的含量。供試品溶液與對照品溶液的色譜見圖1。

圖1 樣品HPLC色譜

2.1.2 對照品溶液制備 取原兒茶酸對照品適量，精密稱定，加甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液制成50 μg/1 mL的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 分別取供試樣品粉末(過三號篩)約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液25 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇-1%冰醋酸溶液(70∶30)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 精密度試驗 精密吸取原兒茶酸對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣5次，按照“1.2.4”項下色譜條件測定色譜峰面積。結(jié)果原兒茶酸峰面積的RSD為1.44%，表明儀器精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗 按“1.2.6”項制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，在室溫下分別于0、2、4、8、10、16、24 h進樣測定，記錄峰面積、保留時間。測定原兒茶酸峰面積，計算其RSD為1.26%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.1.6 重復(fù)性試驗 取樣品粉末5份，按“1.2.6”項下方法制備供試品溶液，取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，計算RSD為1.87%。結(jié)果表明采用該方法測定燙狗脊原兒茶酸含量，重復(fù)性良好。

2.2 燙狗脊炮制工藝研究

2.2.1 不同炮制程度對質(zhì)量的影響 燙狗脊：取潔凈后河砂，河砂用量為狗脊片8倍，在河砂溫度180 ℃(紅外測溫儀測定)時，投入凈制后的狗脊飲片炒制，分別在炒制2、3、4、5、6、7 min后取出，篩去河砂，得燙狗脊，觀察樣品性狀并備用。具體炮制條件，見表1。

表1 燙狗脊不同炒制程度炮制條件

2.2.2 不同河砂用量對質(zhì)量的影響 分別取3倍、5倍、8倍潔凈后河砂加熱至滑利狀態(tài)，待河砂溫度為180 ℃時，投入凈制后的狗脊飲片炒制，炒至燙狗脊片表面鼓起，表面呈棕褐色時取出，篩去河砂，得燙狗脊樣品備用。不同河砂用量炮制條件，見表2。

表2 燙狗脊不同河砂用量炮制條件

2.2.3 不同炮制溫度對質(zhì)量的影響 取潔凈后的河砂加熱至滑利狀態(tài)，在不同河砂溫度(紅外測溫儀測定)時投入凈制后的狗脊飲片炒制，炒至狗脊片表面略鼓起、外表面呈棕褐色時取出，篩去河砂，得燙狗脊。固定河砂用量為8倍量，設(shè)計不同河砂溫度對應(yīng)炒制時間，見表3。

表3 燙狗脊不同河砂溫度的炮制條件

2.3 檢測結(jié)果及分析

2.3.1 不同炮制程度檢測結(jié)果及分析 按“2.1.3”項制備供試品溶液，并按“2.1.1”項下色譜條件進行測定，計算含量。測定結(jié)果，見表4；燙狗脊炮制成品顏色變化，見圖2。

表4 不同炒制程度對應(yīng)時間含量測定結(jié)果

圖2 燙狗脊不同炒制程度外觀

對比燙狗脊不同炒制程度的外觀顏色，可以看出G200214-1、G200214-2兩批樣品炒制程度輕，達不到藥典規(guī)定顏色棕褐色的要求；G200214-3、G200214-4兩批樣品炒制程度棕褐色，能夠達到藥典要求；G200214-5、G200214-6兩批樣品炒制顏色較重，炒制過度。對6批不同炒制程度的樣品進行含量檢測，根據(jù)含量結(jié)果看出炒制程度輕時，原兒茶酸含量較低。炒制程度為棕褐色時，原兒茶酸含量較高，升高趨勢明顯；炒制呈灰褐色稍有部分炭化時，原兒茶酸含量降低。

2.3.2 不同河砂用量檢測結(jié)果及分析 按“2.1.3”項制備供試品溶液，并按“2.1.1”項下色譜條件進行測定，計算含量。測定結(jié)果，見表5。

表5 不同河砂用量含量測定結(jié)果

分析檢驗結(jié)果可以看出，不同河砂用量影響燙狗脊炮制過程的含量轉(zhuǎn)化。輔料河砂用量在3～5倍時，不能完全覆蓋狗脊片，導(dǎo)致河砂傳熱不均勻。輔料河砂用量在8倍時，能夠覆蓋狗脊片均勻加熱，從而使內(nèi)在成分的含量發(fā)生轉(zhuǎn)化。

2.3.3 不同河砂溫度對燙狗脊含量影響及檢測結(jié)果分析 按“2.1.3”項制備供試品溶液，并按“2.1.1”項下色譜條件進行測定，計算含量。測定結(jié)果，見表6。

表6 不同河砂溫度含量測定結(jié)果

分析檢驗結(jié)果可以看出，在不同河砂溫度下，炮制的燙狗脊含量有很大變化。隨著河砂溫度提高，原兒茶酸含量先逐步提高然后降低；溫度過高時，燙狗脊鼓起程度明顯降低，顏色不均勻?？傮w河砂溫度在180～190 ℃時，燙狗脊原兒茶酸含量較高，且鼓起程度較高，顏色較均勻，由此確定河砂的適宜溫度為180～190 ℃，炒制時間為4～5 min。

2.4 驗證試驗

根據(jù)上述燙狗脊工藝實驗所得的工藝條件，進行三批次燙狗脊(批號2004242、206292、2008162)大生產(chǎn)，以驗證工藝，所得樣品按照2015版藥典進行檢測，結(jié)果如表7。

表7 3批次燙狗脊大生產(chǎn)原兒茶酸檢測結(jié)果

根據(jù)3批次大生產(chǎn)驗證結(jié)果可知，原兒茶酸含量均高于藥典要求，且成品鼓起程度和顏色較為均一。由此可知實驗所得的燙狗脊生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，可用于燙狗脊飲片大生產(chǎn)。

3 討論

本研究通過實驗探究燙狗脊炮制過程，發(fā)現(xiàn)原料中原兒茶酸的含量和成品性狀包括鼓起程度、表面與斷面顏色、質(zhì)地等受炒制程度、輔料河砂用量、河砂溫度的影響較大。其炒制程度外觀顏色從棕黃色、黃褐色、棕褐色、深棕褐色、巧克力棕色、灰褐色持續(xù)變化。根據(jù)含量檢測結(jié)果，當(dāng)外觀顏色達到棕褐色時，樣品原兒茶酸含量成分最高，且鼓起程度、斷面顏色也較優(yōu)，隨著進一步炒制程度的加深，含量呈分解下降趨勢，直觀反映出炒制程度的變化。

結(jié)合文獻資料與實驗研究，燙狗脊的炮制過程推測是梅拉德反應(yīng)[12]，通過高溫分解轉(zhuǎn)化，其總糖與分解的氨基酸結(jié)合轉(zhuǎn)化形成顏色較深的5-羥甲基糠醛，該成分是梅拉德反應(yīng)標(biāo)志產(chǎn)物之一，具有一定的補益作用，也驗證了狗脊經(jīng)過炮制后增加了其補肝腎作用，但同時其顏色變化也不是越深越好，如同熟地黃、酒黃精等，應(yīng)防止其砂燙過程中發(fā)生炭化，影響質(zhì)量。