歐拉型藏羊源糞腸球菌的分離鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)

陳曉慧，徐淑琴，馬祥兆，賀 曦，賀曉龍，冶貴生

（青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海西寧 810016）

歐拉型藏羊是高寒牧區(qū)優(yōu)勢(shì)畜種之一，具有較強(qiáng)的抗寒性與抗病能力。然而隨著飼養(yǎng)規(guī)模擴(kuò)大，藏羊消化道類疫病多發(fā)且缺乏良好的治療方法，盡管抗生素能治療消化道類疾病，但會(huì)打破腸道菌群平衡狀態(tài)，長(zhǎng)期使用抗生素會(huì)導(dǎo)致畜產(chǎn)品的藥物殘留和耐藥菌株的產(chǎn)生，且引起腸道菌群紊亂。因此開發(fā)以益生菌為原材料的微生態(tài)制劑對(duì)藏羊腸道進(jìn)行調(diào)控成為主流。益生菌是一種天然存在的微生物，它通過改變宿主共生微生物菌群、調(diào)節(jié)免疫、增強(qiáng)腸道屏障功能來賦予健康益處[1]。益生菌的使用被廣泛認(rèn)為是穩(wěn)定或改善腸道系統(tǒng)的一種有前途的方法，在宿主內(nèi)的定植特異性可直接影響微生態(tài)益生菌制劑的臨床應(yīng)用效果，選擇菌種的最好方式是采用分離自同源動(dòng)物腸道的優(yōu)良菌種。長(zhǎng)期以來腸球菌一直被用作益生菌和食品發(fā)酵，腸球菌是哺乳動(dòng)物胃腸道內(nèi)正常微生物群體中的重要組成部分[2]，特別是糞腸球菌（Enterococcus faecalis），研究表明優(yōu)良的糞腸球菌菌株主要來源于動(dòng)物機(jī)體內(nèi)[3]。

糞腸球菌是一種革蘭陽性兼性厭氧菌，是廣泛存在于動(dòng)物腸道內(nèi)的益生菌群[4]。糞腸球菌通過快速定植并耐受胃腸道的復(fù)雜環(huán)境來發(fā)揮益生作用[5]。糞腸球菌在調(diào)節(jié)腸道菌群環(huán)境中發(fā)揮著重要作用[6]，可通過產(chǎn)生細(xì)菌素類抑菌物質(zhì)，抑制大腸桿菌和沙門氏菌等病原菌的生長(zhǎng)，改善腸道微環(huán)境，還能抑制腸道內(nèi)產(chǎn)尿素酶細(xì)菌和腐敗菌的繁殖，減少腸道尿素酶和內(nèi)毒素的含量，使血液中氨和內(nèi)毒素的含量下降，從而提高家畜抗病性和生產(chǎn)性能等[7]。微生態(tài)制劑可有效地調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群的結(jié)構(gòu)組成以及維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)，是目前替代抗生素研究的突破點(diǎn)[8]。不同動(dòng)物腸道中的菌群都有一定特異性，來源與使用對(duì)象相同時(shí)，益生菌可更好地發(fā)揮益生效果。目前關(guān)于藏羊源腸道益生菌的研究報(bào)道很少，本研究對(duì)健康歐拉型藏羊腸道細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)與鑒定，旨在為其歐拉型藏羊源微生態(tài)制劑的研發(fā)提供候選菌株。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

健康歐拉型藏羊腸道內(nèi)容物樣本 來源于青海省海東市民和縣某養(yǎng)殖場(chǎng)；大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌 均來自于青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系高原動(dòng)物疾病研究室；糞腸球菌固體培養(yǎng)基（MRS固體培養(yǎng)基）、糞腸球菌液體培養(yǎng)基（MRS液體培養(yǎng)基）、Pfizer腸球菌選擇性瓊脂、細(xì)菌生化鑒定管 青島海博生物技術(shù)有限公司；革蘭氏染色試劑盒 珠海貝索生物技術(shù)有限公司；藥敏紙片

杭州濱和生物有限公司；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 寶生物工程（大連）有限公司。

立式壓力蒸汽滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠；恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司；恒溫培養(yǎng)搖床

上海藍(lán)豹實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；生物安全柜 新加坡藝思高科技有限公司；DYY-12C型電泳儀電源北京市六一儀器廠；凝膠成像系統(tǒng) 萊普特科學(xué)儀器（北京）有限公司；紫外可見分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌株分離篩選 無菌操作采集歐拉型藏羊腸道內(nèi)容物樣品1 mL置3 mL MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)16～24 h。將通過液體培養(yǎng)過的菌液接種在MRS的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)48 h，觀察菌落形態(tài)，選取不同形態(tài)，大小，顏色的單個(gè)菌落劃線于Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基，厭氧培養(yǎng)48 h，純化三次或三次以上，直到培養(yǎng)基菌落單一、穩(wěn)定為止。

1.2.2 形態(tài)學(xué)鑒定 將純化后所得疑似菌株，通過革蘭氏染色，于光學(xué)顯微鏡100×油鏡下觀察其形態(tài)特征。

1.2.3 生化鑒定 按照菌株生化鑒定標(biāo)準(zhǔn)試劑盒說明書對(duì)分離菌株EF1-mh進(jìn)行生化試驗(yàn)測(cè)定。

1.2.4 分子生物學(xué)鑒定 參照細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒說明書提取分離菌株EF1-mh基因組DNA。以提取的分離菌株EF1-mh基因組DNA為模板，采用16S rDNA通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。引物序列為：

27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'。PCR擴(kuò)增體系為（50 μL）：上、下游引物各1 μL，模板DNA 2 μL，Premix Taq 25 μL，ddH2O 22 μL。擴(kuò)增條件為：95 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，35個(gè)循環(huán)，72 ℃末端延伸10 min，4 ℃保存；同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照。將得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在1500 bp左右，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至生物公司進(jìn)行測(cè)序。

16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建及同源性分析：使用DNA star軟件中的Seq Man進(jìn)行序列拼接、校對(duì)，利用BLAST網(wǎng)站和GeneBank數(shù)據(jù)庫中收錄的糞腸球菌參考序列，對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行同源性比對(duì)分析，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.5 生長(zhǎng)曲線測(cè)定和產(chǎn)酸能力試驗(yàn) 取2%分離菌株EF1-mh菌懸液接種于5 mL MRS液體培養(yǎng)基內(nèi)，37 ℃，150 r/min恒溫培養(yǎng)24 h，從0 h開始，每隔2 h取樣一次，使用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)600 nm處的吸光度值OD，并測(cè)定pH，每時(shí)間點(diǎn)取樣做三次重復(fù)，記錄數(shù)據(jù)，繪制曲線圖。

1.2.6 藥敏試驗(yàn) 采用K-B紙片擴(kuò)散法[9]，檢測(cè)分離菌株EF1-mh對(duì)30種抗生素的敏感性。將待測(cè)菌株均勻涂布于MRS固體培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)18 h，挑取單個(gè)菌落于5 mL MRS液體培養(yǎng)基中37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)12～16 h，將糞腸球菌增殖液稀釋至0.5麥?zhǔn)蠞岫?，使用無菌棉簽涂布在MRS瓊脂平板上，待瓊脂表面水分稍干，將藥敏紙片平整地貼在平板上，37 ℃倒置培養(yǎng)18～24 h，以藥敏紙片為中心測(cè)定抑菌圈直徑，統(tǒng)計(jì)記錄抑菌結(jié)果：敏感（S）、中等敏感（I）、耐藥（R）三種形式記錄。

1.2.7 抑菌試驗(yàn) 使用牛津杯法[10]測(cè)定分離菌株EF1-mh對(duì)大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙門氏菌（Salmonella）和產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens）的抑菌能力。以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌為指示菌，將致病菌菌液濃度稀釋至1×108CFU/mL，分別取100 μL均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，無菌操作放置牛津杯，利用牛津杯進(jìn)行打孔，受試菌懸液12000 r/min離心10 min，收集上清液，取200 μL加至孔內(nèi)，4 ℃預(yù)擴(kuò)散12 h，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，測(cè)量抑菌圈直徑。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用DNA star軟件中的Seq Man進(jìn)行序列拼接、校對(duì)，利用BLAST網(wǎng)站和GeneBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行同源比對(duì)分析；使用MEGA 7.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹；Excel 2019進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 糞腸球菌鑒定結(jié)果

2.1.1 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果 經(jīng)過MRS固體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，該菌株菌落呈乳白色，表面光滑，邊緣整齊（圖1A），經(jīng)Pfizer腸球菌選擇性瓊脂分離培養(yǎng)篩選到陽性疑似菌，呈棕黑色菌落，周圍有棕色圈（圖1B）。通過革蘭氏染色鏡檢，油鏡（100×）下可見藍(lán)紫色球菌，初步判斷為革蘭陽性球菌，呈短鏈狀或成對(duì)排列，通常不運(yùn)動(dòng)，菌體沒有芽孢和菌毛，符合糞腸球菌的菌體形態(tài)特征[11]（圖1C）。

圖1 分離菌株EF1-mh 形態(tài)學(xué)結(jié)果Fig.1 Morphological results of strain EF1-mh

2.1.2 生化鑒定結(jié)果 對(duì)分離菌株EF1-mh進(jìn)行生化鑒定，結(jié)果顯示，水楊苷、麥芽糖、L-精氨酸雙水解酶、葡萄糖、果糖、半乳糖、蕈糖、膽汁七葉苷、乳糖、纖維二糖、蔗糖、甲基紅、馬尿酸鹽指標(biāo)均為陽性；甘露醇、山梨醇、棉子糖、木糖、硫化氫、L-鼠李糖、蛋白胨水、菊糖、阿拉伯糖、吲哚試驗(yàn)、西蒙氏枸櫞酸鹽、松三糖、VP實(shí)驗(yàn)、硝酸鹽、葡萄糖酸鹽指標(biāo)均為陰性。

生化鑒定結(jié)果見表1，結(jié)果表明該分離菌能分解麥芽糖、葡萄糖、果糖等；可利用水楊苷；具有L-精氨酸雙水解酶活性；膽汁七葉苷瓊脂指示劑結(jié)果呈黑色；不能分解甘露醇、山梨醇、棉子糖、L-鼠李糖、阿拉伯糖等；不產(chǎn)生硫化氫；吲哚試驗(yàn)、VP試驗(yàn)呈陰性；不利用西蒙氏枸櫞酸鹽和葡萄糖酸鹽做為能源，不能還原硝酸鹽，參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[12]分離菌株EF1-mh符合糞腸球菌的生化特征，且與鐘浪等[13]篩選的牦牛源糞腸球菌生化特性研究結(jié)果相符。

表1 生化鑒定試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Biochemical identification results

2.1.3 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果 使用16S rDNA通用引物對(duì)疑似糞腸球菌分離菌株EF1-mh DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，擴(kuò)增結(jié)果如圖2，目的條帶大小為1500 bp左右，符合預(yù)期設(shè)定。使用NCBI在線軟件對(duì)16S rDNA序列進(jìn)行BLAST同源性比對(duì)，結(jié)果顯示分離菌株EF1-mh 16S測(cè)序長(zhǎng)度為1461 bp，經(jīng)過同源性比對(duì)分析得知分離菌株EF1-mh與GeneBank中11株糞腸球菌同源性在96.3%～97.2%之間，其中與糞腸球菌MH793511.1同源性最高，為97.2%，與糞腸球菌KC819130.1的同源性次之，為97.0%（如圖3）。分離菌株EF1-mh與參考菌株16S rDNA基因序列所繪制的系統(tǒng)發(fā)育樹（如圖4），且在系統(tǒng)發(fā)育樹上與糞腸球菌MT35 6183.1劃分為同一支，從分子水平確定該分離菌株EF1-mh為糞腸球菌。

圖2 分離菌株EF1-mh 16S rDNA基因PCR擴(kuò)增Fig.2 PCR amplification of 16S rDNA gene in isolated strain EF1-mh

圖3 菌株同源性比對(duì)分析Fig.3 Sequence homology of strains

圖4 菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Phylogenetic tree of strains

2.2 生長(zhǎng)曲線測(cè)定和產(chǎn)酸能力試驗(yàn)結(jié)果

生長(zhǎng)曲線能夠體現(xiàn)細(xì)菌的數(shù)量變化、生長(zhǎng)與代謝狀況，研究表明，腸球菌生長(zhǎng)代謝速度快，繁殖力強(qiáng)。在本試驗(yàn)中，如圖5所示，糞腸球菌EF1-mh在接種培養(yǎng)基后約6 h后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，并持續(xù)到14 h；16～18 h基本進(jìn)入穩(wěn)定期，生長(zhǎng)速度降低即緩慢生長(zhǎng)。任曉燕等[14]使用分光光度計(jì)和活菌計(jì)數(shù)2種方法對(duì)糞腸球菌生長(zhǎng)曲線進(jìn)行測(cè)定，兩種方法結(jié)果一致，即糞腸球菌對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期是6～14 h，穩(wěn)定期是16～18 h，18 h后進(jìn)入衰亡期。并且糞腸球菌EF1-mh生長(zhǎng)能力與石春衛(wèi)等[15]篩選的糞腸球菌在24 h內(nèi)的生長(zhǎng)能力趨勢(shì)一致，這表明篩選出的糞腸球菌可在營(yíng)養(yǎng)充足的環(huán)境下快速生長(zhǎng)，滿足優(yōu)良益生菌的特性。

圖5 菌株生長(zhǎng)曲線和和產(chǎn)酸能力Fig.5 Strain growth curves and acid production capacity of strains

糞腸球菌EF1-mh在MRS肉湯中培養(yǎng)6 h后pH下降，產(chǎn)酸能力弱，在18 h趨于穩(wěn)定pH達(dá)到約在4.2左右，幾乎不產(chǎn)酸，表明分離菌株EF1-mh具有弱產(chǎn)酸能力，并且所測(cè)得EF1-mh菌株產(chǎn)酸能力結(jié)果與桑夢(mèng)琪等[16]、劉金艷[17]測(cè)定的糞腸球菌產(chǎn)酸能力結(jié)果一致，pH從約6.0降至4.2左右。研究表明糞腸球菌作為動(dòng)物腸道內(nèi)乳酸類腸球菌的原生菌種，能分泌L型乳酸，還可把部分糖類的無氮浸出物轉(zhuǎn)化為乳酸供機(jī)體使用[18]。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

糞腸球菌EF1-mh對(duì)苯唑西林、頭孢呋辛、頭孢氨芐、頭孢拉定、多西環(huán)素、米諾環(huán)素表現(xiàn)出中度敏感；對(duì)青霉素、氨芐西林、羧芐西林、哌拉西林、頭孢曲松、頭孢唑啉、頭孢哌酮、四環(huán)素、新霉素、慶大霉素、丁胺卡那、卡那霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、紅霉素、麥迪霉素、克林霉素、萬古霉素、氯霉素表現(xiàn)出敏感；而對(duì)呋喃唑酮、復(fù)方新諾明、頭孢他啶、多粘菌素B這4種常見抗生素耐藥（表2）。

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Test results of drug sensitivity

近年從健康家畜和微生態(tài)制劑中分離的糞腸球菌均表現(xiàn)出一定的耐藥性，說明在畜牧行業(yè)和飼料行業(yè)中糞腸球菌的耐藥性呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。歐拉型藏羊源糞腸球菌EF1-mh株藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在受試的30種抗菌藥物中，對(duì)苯唑西林、頭孢呋辛、頭孢氨芐、頭孢拉定、多西環(huán)素和米諾環(huán)素表現(xiàn)為中等敏感；對(duì)呋喃唑酮、復(fù)方新諾明、頭孢他啶、多粘菌素B耐藥；腸球菌的固有耐藥性主要是β-內(nèi)酰胺類、克林霉素、氨基糖苷類、甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲惡唑[11]。對(duì)于β-內(nèi)酰胺類藥物的耐藥性是腸球菌的一個(gè)固有特性，糞腸球菌可能不產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶的特性，從而導(dǎo)致對(duì)頭孢他啶具有耐藥性。糞腸球菌EF1-mh株與石春衛(wèi)等[15]從長(zhǎng)春市雙陽地區(qū)某豬場(chǎng)28日齡健康仔豬新鮮糞便中分離的糞腸球菌，以及朱利霞等[19]從河北省圍場(chǎng)縣某牛場(chǎng)病死犢牛中分離出的糞腸球菌B2019的藥敏試驗(yàn)結(jié)果有所不同，這可能是由于動(dòng)物的品種和地理環(huán)境的差異性，來源于不同動(dòng)物樣品的糞腸球菌在耐藥性方面存在差異。

2.4 抑菌試驗(yàn)結(jié)果

腸球菌可以有效抑制腸道病原菌，維護(hù)宿主腸道健康。其中，糞腸球菌和屎腸球菌也屬于益生菌，具有益生的功能，對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)和健康具有良好的作用。糞腸球菌作為一種益生菌，在醫(yī)學(xué)和食品工程領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[20]。糞腸球菌通過黏附于腸道表面形成保護(hù)屏障，可在腸道上皮細(xì)胞上形成生物膜，保護(hù)腸上皮細(xì)胞免受有害物質(zhì)侵襲[18]，并且可產(chǎn)生有機(jī)酸、細(xì)菌素（acteriocins），包括腸溶素A和腸道菌素（enterocins）Gr17等抑菌物質(zhì)，來調(diào)節(jié)腸道內(nèi)環(huán)境，發(fā)揮益生作用[21-22]。這些細(xì)菌素，即所謂的腸道菌素，大多是由核糖體合成機(jī)制產(chǎn)生的一些小的陽離子抗菌肽，對(duì)于一些革蘭氏陽性腐敗菌和致病菌有抗菌活性[23]。研究表明，大多數(shù)細(xì)菌素只對(duì)親緣性較近的革蘭氏陽性菌效果好，此外一些細(xì)菌素也對(duì)特定的革蘭氏陰性菌有抑制作用，例如大腸桿菌和沙門氏菌，這可能與革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分有關(guān)，革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁主要僅由肽聚糖組成，不能形成有效的屏障；而革蘭氏陰性菌外有一層磷脂膜和脂多糖結(jié)構(gòu)，這使得抑菌物質(zhì)不能輕易滲透細(xì)胞壁，有些細(xì)菌素還可以抑制某些病毒的生長(zhǎng)[24-25]。糞腸球菌可產(chǎn)生一類特異性細(xì)菌素，其抗菌譜窄，能夠防止病原微生物接觸腸黏膜細(xì)胞。并且糞腸球菌還可產(chǎn)生具有廣譜抗菌特性的細(xì)菌素，對(duì)假單孢菌、沙門菌及志賀氏菌有較好的抑制作用。Hugas等[26]研究證實(shí)，糞腸球菌能夠有效抑制金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)。候璐[27]通過給斷奶仔豬中飼喂糞腸球菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其糞便中大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的數(shù)量減少。

本試驗(yàn)與上述研究結(jié)果相符，如表3所示，糞腸球菌EF1-mh所產(chǎn)抑菌物不但對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌有較強(qiáng)的抑制作用，且對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌均有很好的抑制效果。具有抑菌能力的糞腸球菌上清會(huì)在牛津杯周圍形成一個(gè)透明的抑菌圈，抑菌圈的直徑越大，說明對(duì)應(yīng)菌株對(duì)致病菌的抑制能力越強(qiáng)；不具備抑菌能力的糞腸球菌上清在牛津杯周圍沒有抑菌圈，細(xì)菌均勻生長(zhǎng)。抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，糞腸球菌EF1-mh株上清液可有效抑制腸道致病菌的生長(zhǎng)，對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌4株腸道致病菌都具有抑制作用，抑菌效果較好。其中產(chǎn)氣莢膜梭菌抑菌圈直徑最大，說明糞腸球菌EF1-mh對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌抑菌能力最強(qiáng)。益生菌對(duì)致病菌的抑制作用是益生菌的一個(gè)重要益生特征，理想的益生菌菌株應(yīng)該是分離自同源動(dòng)物胃腸道，具有一定的耐受能力[28]。不同動(dòng)物腸道中的菌群具有特異性，菌株的來源與使用對(duì)象一致，可以更好地發(fā)揮益生作用[29]，因此，從健康歐拉型藏羊腸道內(nèi)容物中分離的糞腸球菌EF1-mh株具有很好的益生性，更易于在歐拉型藏羊腸道內(nèi)定植并發(fā)揮作用，為后期開發(fā)歐拉型藏羊源微生態(tài)制劑提供了候選菌株。

表3 抑菌試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Antibacterial test results

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從健康的歐拉型藏羊腸道中分離得到了一株糞腸球菌EF1-mh，該菌株是無芽孢、無菌毛的革蘭氏陽性球菌，能分解麥芽糖、葡萄糖、果糖等，不能分解甘露醇、山梨醇、棉子糖、L-鼠李糖、阿拉伯糖等，具有L-精氨酸雙水解酶活性，膽汁七葉苷瓊脂指示劑結(jié)果呈黑色，不產(chǎn)生硫化氫，吲哚試驗(yàn)、VP試驗(yàn)呈陰性，不利用西蒙氏枸櫞酸鹽和葡萄糖酸鹽作為能源，不能還原硝酸鹽。糞腸球菌EF1-mh株具有較強(qiáng)的生長(zhǎng)能力和較弱的產(chǎn)酸能力。糞腸球菌EF1-mh株對(duì)苯唑西林、頭孢呋辛、頭孢氨芐、頭孢拉定、多西環(huán)素、米諾環(huán)素表現(xiàn)出中度敏感；對(duì)呋喃唑酮、復(fù)方新諾明、頭孢他啶、多粘菌素B表現(xiàn)出耐藥，并且該菌株其上清液可明顯抑制腸道致病菌，其中對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑菌能力最強(qiáng)。