投喂頻率對黃顙魚幼魚生長性能、化學(xué)成分、消化酶活性和氨基酸組成的影響

馮鵬霏 馬華威 何金釗 唐東姣 陳秀荔 陳 濤 余艷玲 彭 敏 楊春玲 潘傳燕*

(1.廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院，廣西水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點實驗室，南寧 530021；2.廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)引育種中心，南寧 530031；3.全州縣全州鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，桂林 541599; 4.南寧學(xué)院，南寧 530299)

投喂是水產(chǎn)養(yǎng)殖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，投喂頻率直接關(guān)系著養(yǎng)殖對象的生長性能和養(yǎng)殖效益。研究表明，投喂頻率對水產(chǎn)動物的生長、成活率、飼料效率、體成分和生理指標(biāo)等有顯著影響[1]。在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，適宜的投喂頻率可促進(jìn)養(yǎng)殖對象生長，減小個體差異[2-5]；投喂頻率不合理會導(dǎo)致養(yǎng)殖對象生長緩慢、規(guī)格參差不齊、抵抗力下降等[5-8]。在養(yǎng)殖管理過程中，投喂制度不合理，就會出現(xiàn)飼料投喂頻率過高或過低的現(xiàn)象，導(dǎo)致人工成本和飼料成本增加，降低了養(yǎng)殖效益。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，科學(xué)的投喂頻率成為降低成本、提高養(yǎng)殖效益和改善水質(zhì)環(huán)境的有效途徑之一。于赫男等[9]研究表明，不合理的投喂頻率使凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)受到應(yīng)激壓力，導(dǎo)致其抗氧化指標(biāo)產(chǎn)生明顯變化。

黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)俗稱鯰魚胡子，又名黃臘丁、黃骨魚等，是我國淡水養(yǎng)殖主要品種之一，具有產(chǎn)量大、生長快、環(huán)境適應(yīng)能力強、易養(yǎng)殖、營養(yǎng)豐富、味道鮮美、可養(yǎng)殖地域廣等優(yōu)點。我國的黃顙魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，市場需求不斷上升，養(yǎng)殖前景廣闊。目前，生產(chǎn)上沒有科學(xué)合理的投喂制度做指導(dǎo)，對黃顙魚幼魚的飼喂管理情況較混亂。關(guān)于黃顙魚的營養(yǎng)與飼料研究較多[10-11]，而對黃顙魚幼魚的投飼管理缺乏系統(tǒng)研究，投喂頻率對黃顙魚幼魚生長性能、化學(xué)成分和消化酶活性等的研究尚未見報道。因此，本試驗旨在研究投喂頻率對黃顙魚幼魚生長性能、化學(xué)成分、消化酶活性和氨基酸組成的影響，確定科學(xué)合理的投喂頻率，以有效促進(jìn)黃顙魚幼魚生長，提高飼料利用率和黃顙魚品質(zhì)，并為黃顙魚幼魚的高效養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗魚和飼料

本試驗所用黃顙魚幼魚采自廣西南寧宏大恒洋水產(chǎn)科技有限公司，試驗用魚規(guī)格整齊、健康、活力良好，平均體重為(2.0±0.1) g。試驗用飼料為佛山市金浦飼料實業(yè)有限公司提供的黃顙魚飼料。

1.2 試驗設(shè)計

試驗在廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院水族實驗室進(jìn)行，黃顙魚幼魚在實驗室暫養(yǎng)7 d以適應(yīng)實驗室環(huán)境，暫養(yǎng)結(jié)束后饑餓24 h，選擇720尾健康幼魚開始投喂試驗，設(shè)3個試驗組，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)60尾魚。3個試驗組的投喂頻率分別為1(09:00)、2(08:00、17:00)、3次/d(07:00、12:00、18:00)，分別標(biāo)記為F1、F2和F3組。試驗期為8周。飼料投喂量為試驗魚體重的5%，試驗期間根據(jù)試驗魚體重及時調(diào)整，各試驗組的飼料投喂量根據(jù)投喂頻率平均分配。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗期間，根據(jù)試驗設(shè)計方案按時投喂，并在每天12:00和18:00將缸底的殘餌和糞便吸出，防止污染缸內(nèi)水體。每天換水量控制在1/3左右。觀察黃顙魚幼魚的活動情況，記錄幼魚的死亡數(shù)量。養(yǎng)殖條件為：水溫控制在27～30 ℃，溶解氧濃度6.5～8.0 mg/L，pH 7.00±0.01，氨氮濃度(0.04±0.01) mg/L。試驗期間，每2周稱重1次，并根據(jù)試驗魚體重調(diào)整飼料投喂量。

1.4 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后進(jìn)行稱重取樣，稱重取樣之前將試驗魚饑餓24 h，各試驗組隨機挑選20尾幼魚進(jìn)行稱重，計算增重率和飼料系數(shù)；各組隨機取10尾幼魚，于冰板上解剖，分離胃和腸道并分別放入1.5 mL離心管內(nèi)，用于測定消化酶活性；取背肌放入1.5 mL離心管內(nèi)，用于測定氨基酸組成；并將5尾全魚放于凍存管中，用于測定全魚化學(xué)成分。肌肉和全魚于-80 ℃冰箱保存。

1.5 指標(biāo)測定

1.5.1 全魚化學(xué)成分測定

試驗測定黃顙魚幼魚全魚化學(xué)成分,包括水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分含量。采用105 ℃干燥法(GB/T 5009.3—2003)測定水分含量，采用凱氏定氮法(GB/T 5009.3—2003)測定粗蛋白質(zhì)含量，采用索氏抽提法(GB/T 5009.6—2003)測定粗脂肪含量，采用550 ℃灼燒法(GB/T 5009.4—2003)測定粗灰分含量。

1.5.2 胃和腸道消化酶活性測定

每組隨機選取10尾幼魚，于冰板上解剖，分離胃和腸道，將其分別勻漿后進(jìn)行冷凍離心，2 500 r/min離心10 min，取其上清液，在24 h內(nèi)測定胃和腸道消化酶活性。胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測定。

組織中淀粉酶活性單位定義：每毫克組織蛋白在37 ℃與底物反應(yīng)30 min，水解10 mg淀粉定義為1個酶活性單位，用U/mg prot表示。

組織中胰蛋白酶活性單位定義：在pH 8.0和37 ℃的條件下，每毫克組織蛋白中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003定義為1個酶活性單位，用U/mg prot表示。

組織中脂肪酶活性單位定義：每毫克組織蛋白在37 ℃與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物定義為1個酶活性單位，用U/mg prot表示。

1.5.3 肌肉氨基酸組成測定

使用日立L-8900全自動氨基酸分析儀測定黃顙魚幼魚的肌肉氨基酸組成及含量。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)用Excel 2016初步整理，然后用SPSS 17.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，先做單因素方差分析(one-way ANOVA)，如果差異顯著，再進(jìn)行Duncan氏法多重比較，顯著水平為P<0.05。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 投喂頻率對黃顙魚幼魚生長性能的影響

由表1可知，F(xiàn)1組的成活率和增重率顯著低于F2和F3組(P<0.05)，F(xiàn)2和F3組之間沒有顯著差異(P>0.05)。F1組的飼料系數(shù)顯著高于F2和F3組(P<0.05)，F(xiàn)2和F3組之間沒有顯著差異(P>0.05)。

表1 投喂頻率對黃顙魚幼魚生長性能的影響

2.2 投喂頻率對黃顙魚幼魚全魚化學(xué)成分的影響

由表2可知，各組之間全魚粗灰分含量沒有顯著差異(P>0.05)。F2組的全魚水分含量顯著低于F1組(P<0.05)。F1組的全魚粗蛋白質(zhì)含量顯著低于F2和F3組(P<0.05)，F(xiàn)2和F3組之間沒有顯著差異(P>0.05)。F1組的全魚粗脂肪含量顯著低于F2和F3組(P<0.05)，F(xiàn)2和F3組之間沒有顯著差異(P>0.05)。

表2 投喂頻率對黃顙魚幼魚全魚化學(xué)成分的影響

2.3 投喂頻率對黃顙魚幼魚胃和腸道消化酶活性的影響

由表3可知，F(xiàn)1組的胃和腸道胰蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶活性均顯著高于F2和F3組(P<0.05)，F(xiàn)2和F3組之間沒有顯著差異(P>0.05)。各試驗組的腸道胰蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶活性均高于胃。F1組的胃和腸道胰蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶活性最高，隨著投喂頻率的增加，胃和腸道消化酶(除胃α-淀粉酶外)活性呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢。

2.4 投喂頻率對黃顙魚幼魚肌肉氨基酸組成的影響

由表4可知，F(xiàn)2和F3組的肌肉總氨基酸、天門冬氨酸、蘇氨酸、賴氨酸、組氨酸和谷氨酸含量顯著高于F1組(P<0.05)，肌肉精氨酸含量顯著低于F1組(P<0.05)，F(xiàn)2和F3組之間沒有顯著差異(P>0.05)。F2組的肌肉纈氨酸含量顯著高于F1和F3組(P<0.05)。F2組的肌肉亮氨酸和異亮氨酸含量顯著高于F1組(P<0.05)。F3組的肌肉脯氨酸含量顯著高于F1組(P<0.05)。各組之間肌肉蛋氨酸、絲氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸和丙氨酸含量沒有顯著差異(P>0.05)。其中，鮮味氨基酸(谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸和天門冬氨酸)含量占總氨基酸含量的39.06%～39.20%。

3 討 論

投喂頻率是魚類養(yǎng)殖生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，對魚類的生長、飼料利用率、化學(xué)成分和消化酶活性等有直接影響[12-13]。適宜的投喂頻率會促進(jìn)魚類的生長[14]，提高飼料利用率，進(jìn)而提高養(yǎng)殖效益[15-16]。已有學(xué)者對多種水產(chǎn)動物的投喂頻率進(jìn)行了研究。投喂頻率顯著影響大黃魚(Larimichthyscrocea)幼魚的生長和飼料效率[17]。瓦氏黃顙魚(Pelteobagrusvachelli)幼魚的特定生長率會隨投喂頻率的增加而顯著升高[18]。杜海明等[19]認(rèn)為鳡(Elopichthysbambusa)幼魚的最佳投喂頻率為3次/d。當(dāng)投喂頻率達(dá)到2次/d以后，條石鯛(Oplegnathusfasciatus)幼魚的消化酶活性差異不顯著[20]。本試驗研究了投喂頻率對黃顙魚幼魚生長性能、化學(xué)成分、消化酶活性和氨基酸組成的影響。

表3 投喂頻率對黃顙魚幼魚胃和腸道消化酶活性的影響

表4 投喂頻率對黃顙魚幼魚肌肉氨基酸組成的影響

3.1 投喂頻率對黃顙魚幼魚生長性能的影響

投喂頻率會影響魚類的增重率、攝食率和飼料利用率[6]。在一定的范圍內(nèi)，魚類的生長速度會隨著投喂頻率的增加而加快，之后的生長速度處于相對平穩(wěn)的狀態(tài)[21]。本研究中，投喂頻率從1次/d增加到2次/d時，黃顙魚幼魚的增重率顯著提高，飼料系數(shù)顯著降低；投喂頻率從2次/d增加到3次/d時，黃顙魚幼魚的增重率和飼料系數(shù)沒有顯著變化。結(jié)果表明，黃顙魚幼魚在2次/d的投喂頻率下生長最快，飼料轉(zhuǎn)化率最高。同樣，大口黑鱸(Micropterussalmoides)[22]和大西洋鮭(Salmosalar)[23]的生長性能也在2次/d的投喂頻率下達(dá)到最佳。

3.2 投喂頻率對黃顙魚幼魚全魚化學(xué)成分的影響

魚體化學(xué)成分常被用作魚類營養(yǎng)品質(zhì)的評估標(biāo)準(zhǔn)。養(yǎng)殖魚類的化學(xué)成分是由內(nèi)因和外因共同決定的，其中蛋白質(zhì)和灰分與魚類的生長階段有關(guān)，而脂肪則主要由外因決定，如飼料成分、投喂頻率等[24]。魚體化學(xué)成分還存在個體差異，養(yǎng)殖條件也會影響魚體化學(xué)成分[25]。已有研究指出，投喂頻率影響魚類的全魚化學(xué)成分。投喂頻率為2次/d時，大雜交鱘幼魚全魚粗蛋白質(zhì)含量最高，而全魚粗脂肪含量隨投喂頻率增加而升高[26]。在本研究中，投喂頻率為1次/d時，黃顙魚幼魚的全魚粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量均顯著低于其他投喂頻率組，粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量在投喂頻率為2次/d時達(dá)到最高，這說明投喂頻率顯著影響了黃顙魚幼魚的魚體化學(xué)成分。一般認(rèn)為，提高投喂頻率，魚類的攝食量會增加，過多的能量就轉(zhuǎn)化為脂肪和蛋白質(zhì)。該結(jié)果與在團頭魴(Megalobramaamblycephala)[27]、香魚(Plecoglossusaltivelis)[28]、奧尼羅非魚(Oreochromisniloticus×O.aureus)[29]的研究結(jié)果一致，這表明適當(dāng)提高投喂頻率是提高魚類脂肪含量的有效方式之一。

3.3 投喂頻率對黃顙魚幼魚胃和腸道消化酶活性的影響

消化酶是魚類消化系統(tǒng)中的關(guān)鍵物質(zhì)，直接關(guān)系著魚類對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，通常通過測定消化酶活性來了解魚類的消化能力。投喂頻率對魚類的消化酶活性有顯著影響。投喂頻率為1次/2 d和1次/d時，條石鯛幼魚的主要消化酶活性顯著高于其他投喂頻率組[21]。在本試驗中，F(xiàn)1組的胃和腸道胰蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶活性均顯著高于F2和F3組，而F2和F3組之間無顯著差異。這可能是因為投喂頻率為1次/d時，食物較少，黃顙魚幼魚需要分泌更多的消化酶或者提高消化酶活性來充分消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)，甚至利用自身的蛋白質(zhì)或者脂肪才能維持自身的正常代謝活動；而當(dāng)投喂頻率增加至2和3次/d時，食物充足，黃顙魚幼魚分泌較少的消化酶或者用較低的消化酶活性就能吸收維持正常生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，這也是這2個投喂頻率下黃顙魚幼魚的胃和腸道消化酶活性沒有顯著差異的原因。這與其他研究人員對條石鯛[20]、瓦氏黃顙魚[18]、奧尼羅非魚[29]的研究結(jié)果一致。本試驗各組腸道的胰蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶活性均高于胃。這可能是由于黃顙魚幼魚對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收更多的集中在腸道的緣故。腸道中的胰蛋白酶活性遠(yuǎn)高于胃，還可能是由于胃本身的酸性環(huán)境導(dǎo)致胰蛋白酶的活性不高。

3.4 投喂頻率對黃顙魚幼魚肌肉氨基酸組成的影響

氨基酸是蛋白質(zhì)的基本單元，魚類的氨基酸組成決定了其魚肉品質(zhì)和鮮味程度，氨基酸的種類和含量是魚類營養(yǎng)品質(zhì)的重要評判標(biāo)準(zhǔn)。在本試驗中，除蛋氨酸、絲氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸和丙氨酸外，其他氨基酸的含量在3個組都有不同程度的差異。隨著投喂頻率的增加，總氨基酸、天門冬氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、賴氨酸、組氨酸、纈氨酸、異亮氨酸和谷氨酸含量都呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢，和全魚粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量的變化趨勢一致，這也說明黃顙魚幼魚在食物充足時，過多的能量以蛋白質(zhì)和脂肪的形式儲存。同樣，在團頭魴[20]、尼羅系吉富羅非魚幼魚(Oreochromisniloticus)[30]的相關(guān)研究中也出現(xiàn)了類似的結(jié)果。

4 結(jié) 論

投喂頻率對黃顙魚幼魚生長性能、化學(xué)成分、消化酶活性和氨基酸組成均有一定影響，從促進(jìn)生長、提高飼料利用率和魚肉品質(zhì)的角度考慮，黃顙魚幼魚的適宜投喂頻率為2次/d。