基于藥效學(xué)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討烏梅丸治療潰瘍性結(jié)腸炎方劑精簡的可行性?

郭 琴， 王 穎， 王歡歡， 張立石， 柏 冬△

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所， 北京 100700； 2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)是指影響因素眾多且病因未明的慢性非特異性腸道炎癥，與克羅恩病(Crohn’s disease, CD)統(tǒng)稱為炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease, IBD)，臨床上常表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、里急后重、便血等癥狀。文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)[1-3]，中藥復(fù)方烏梅丸對寒熱錯雜的UC療效顯著，該方由烏梅、細(xì)辛、干姜、黃連、當(dāng)歸、附子、花椒、桂枝、人參和黃柏10味藥材配伍而成[4]，原方為丸劑，服用量較大，臨床中常用該湯劑進(jìn)行加減治療UC[5，6]。然而湯劑使用不便，不利于推廣，若依據(jù)該方直接開發(fā)新藥用于UC，方中藥味較多，含有附子、細(xì)辛等有毒中藥，藥效、安全性、質(zhì)量研究、審批風(fēng)險較大，因此在不影響對于UC療效的前提下，對該方的精簡具有實際意義。

烏梅丸根據(jù)藥味可分為酸、苦、甘、辛4種，其組方原則主要針對UC寒熱錯雜證病機，酸味藥澀腸止瀉、平肝柔木；苦味藥清熱燥濕止??；辛味藥溫中散寒，一辛一苦、一散一降、一熱一寒，辛開苦降，為開通之要藥，寒熱之邪均可開瀉；甘味藥益氣補脾，與酸味藥同用則酸甘化陰。方中藥物寒熱并用，補瀉兼施，可實現(xiàn)原方健脾、理氣、祛濕、澀腸止瀉的目的，適宜治療寒熱錯雜、正氣虛弱所引起的腹痛、腹瀉、里急后重之癥。課題組在前期對烏梅丸治療UC的相關(guān)文章進(jìn)行了整理，通過數(shù)據(jù)庫總結(jié)所有口服(湯劑)類文獻(xiàn)(包含口服湯劑、聯(lián)合用藥)，發(fā)現(xiàn)方中烏梅、黃連、人參、干姜使用頻率較高(>90%)，且這4味分別是酸、苦、甘、辛藥味的代表藥物，初步將烏梅丸精簡為烏梅、人參、黃連和干姜，且由于烏梅丸原方中酸、苦、甘、辛4個藥味的用量依次是30 g、12 g、12 g、29 g，因此將精簡方中4個藥物的用量擬定為原方中4個藥味的用量。

本研究以2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid, TNBS)致UC大鼠為UC模型，通過結(jié)腸損傷程度、白細(xì)胞介素(interleukin, IL)-1β和環(huán)氧化酶(cyclooxygenase, COX)-2水平評價烏梅丸全方和精簡方的藥效，從藥效學(xué)實驗探討烏梅丸精簡方是否具有替代全方的可能性。而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基于藥物和疾病間相互作用的整體性和系統(tǒng)性，能夠在體外虛擬篩選潛在的藥效物質(zhì)、作用靶點和通路，并構(gòu)建“疾病-基因-靶點-藥物”多層次網(wǎng)絡(luò)，初步預(yù)測出疾病與藥物的作用機制[7]。因此本研究在藥效學(xué)驗證的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接的方法，探討烏梅丸全方和精簡方作用于UC的機制，以期望說明烏梅丸精簡方的可行性和合理性。本研究已通過中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所實驗動物倫理委員會審查，批號JCS2018012。

1 材料

1.1 動物

健康雄性SD大鼠，鼠齡2個月(體質(zhì)量220～240 g)，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，合格證號SCXK(京)2018-0001。動物飼養(yǎng)環(huán)境溫度和濕度分別為24 ℃和28%，每籠大鼠5 只，用混合配方飼料，由北京科澳協(xié)力飼料有限公司喂養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水，每日更換飲水，保持大鼠生活環(huán)境通風(fēng)及清潔衛(wèi)生。

1.2 藥品

烏梅(Prunusmume，171215)、細(xì)辛(AsarumsieboldiiMiq.，180506)、干姜(Zingiberoj-jicinaleRosc.，180119)、黃連(CoptischinensisFranch.，171123)、當(dāng)歸(Angelicasinensis，180603)、附子(AconitumcarmichaeliDebx.，180512)、花椒(ZanthoxylumbungeanumMaxim.，180117)、桂枝(CinnamomumcassiaPresl，171229)、人參(PanaxginsengC.A.Mey.，180228)和黃柏(PhellodendronchinenseSchneid.，180507)均購自北京同仁堂藥店，由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院劉春生教授鑒定為正品。

1.3 試劑及儀器

柳氮磺吡啶腸溶片(Sulfasalazine，上海信誼嘉華藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H31020557)；TNBS(美國Sigma公司，P2297)；戊巴比妥鈉(美國Merck公司，P11011)；COX-2 Elisa試劑盒(美國USCN life science公司，SEA699Ra)；IL-1β Elisa試劑盒(美國R&D systems公司，RTA00)。分析天平(AR2130，美國OHAUS公司)；高速低溫離心機(3K15，美國Sigma公司)；電動勻漿器(Pro200，美國PRO Scientific Inc公司)；酶標(biāo)儀(Elx800，美國BioTek公司)；洗板機(Elx50/8，美國BioTek公司)。

2 方法

2.1 藥效學(xué)實驗

2.1.1 藥物的制備 全方：烏梅30 g，細(xì)辛3 g，干姜9 g，黃連6 g，當(dāng)歸6 g，附子6 g，花椒5 g，桂枝6 g，人參6 g，黃柏6 g。精簡方：烏梅30 g，人參12 g，黃連12 g，干姜29 g。分別按上述處方劑量稱取藥材，加8 倍水煎煮1 h，第2次6 倍量水煎煮1 h合并濾液，水浴濃縮至稠膏，70 ℃減壓真空干燥6 h得干浸膏粉，稱重并粉碎過篩，共煎煮30倍劑量，共獲得干膏624 g，合20.8 g浸膏/劑。

2.1.2 大鼠UC模型的制備[8]大鼠(實驗前禁食不禁水24 h)用戊巴比妥鈉(40 mg/kg)麻醉，按5 % TNBS 0.6 mL加0.25 mL的無水乙醇比例配制TNBS乙醇灌腸液，取仰臥位，將1根聚乙烯管(直徑約2 mm)經(jīng)肛門插入腸道，深度8 cm, 將0.3 mL的TNBS乙醇灌腸液注入腸道，保持肛門高30 s，30 min后有大量糞便排出，再按上述方法經(jīng)肛門注入TNBS乙醇灌腸液0.85 mL，保持肛門高位5 min，防止液體流出，另正常對照組大鼠以等量生理鹽水取代TNBS灌腸液灌腸, 其余過程相同。

2.1.3 分組、給藥和取材 將腹瀉程度類似的大鼠隨機分為正常對照組、模型組、全方組、精簡方組、陽性藥柳氮磺嘧啶組(SASP組)。造模后第2天進(jìn)行灌胃治療，正常對照組和模型組灌服純凈水，全方組、精簡方組分別灌服烏梅丸全方浸膏和精簡方浸膏3.6 g/kg(2 倍臨床劑量)，給藥量計算公式：0.018×20.8 g浸膏/劑÷0.2 kg×2=3.6 g/kg，SASP組灌服柳氮磺嘧啶0. 4 g/kg[8]。

治療2 周后，各組麻醉后剖開腹腔，截取結(jié)腸約2 cm測定長度、稱重，拍照評價結(jié)腸損傷程度。鋁箔紙包裹后液氮速凍，-70 ℃冰箱保存。

2.1.4 結(jié)腸黏膜損傷評分 表1示，取材后根據(jù)所拍攝縱向剖開腸組織潰瘍形成及炎癥的情況進(jìn)行評分，病變范圍每增加1 cm計分加1。評分由2 人同時評判取平均值。

表1 結(jié)腸組織損傷情況評分表[9,10]

2.1.5 細(xì)胞因子IL-1β和COX-2的測定 使用液氮研缽將凍存的腸組織研碎成粉末，轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，稱重并加入10 倍體積的PBS溶液進(jìn)行勻漿，然后取上清液根據(jù)Elisa試劑盒說明書測定腸組織中IL-1β和COX-2水平。

2.2 統(tǒng)計學(xué)方法

2.3 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

2.3.1 有效成分的篩選 于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(TCMSP，https://tcmspw.com/tcmsp.php)檢索烏梅丸全方和精簡方中各個藥味的化學(xué)成分，以生物利用度(OB)≥30 %和類藥性(DL)≥0.18為條件篩選有效成分，并將《中華人民共和國藥典》(2015版)[11]中各藥的指標(biāo)性成分作為有效成分。

2.3.2 疾病靶點的收集 借助TTD(Therapeutic Target Database, http://bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/)、CTD(Comparative Toxicogenomics Database, http://ctdbase.org/)和Geen Card數(shù)據(jù)庫(https://www.genecards.org/)檢索疾病“Ulcerative colitis”(潰瘍性結(jié)腸炎)的靶點，與2.2.1項下的藥物靶點作交集。

2.3.3 藥物-成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 通過Cytoscape3.8.0軟件對2.2.1和2.2.2項下的藥物、有效成分、靶點和疾病進(jìn)行關(guān)聯(lián)，構(gòu)建烏梅丸全方和精簡方治療潰瘍性結(jié)腸炎的網(wǎng)絡(luò)機制。

2.3.4 蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(protein-protein interaction, PPI)的構(gòu)建 將烏梅丸全方和精簡方與疾病的交集靶點分別輸入STRING數(shù)據(jù)庫(http://string-db.org/)，構(gòu)建烏梅丸全方和精簡方作用于UC的PPI網(wǎng)絡(luò)，并將其導(dǎo)入Cytoscape3.8.0軟件進(jìn)行拓?fù)浞治觥?/p>

2.3.5 基因本體論 (gene ontology，GO)和京都基因與基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析 基于DAVID數(shù)據(jù)庫(https://david.ncifcrf.gov/)對烏梅丸全方和精簡方與UC相關(guān)的靶點分別進(jìn)行GO和KEGG分析，并對富集交結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

2.3.6 分子對接驗證 根據(jù)拓?fù)浞治鼋Y(jié)果，以核心成分為配體、核心靶點為受體進(jìn)行分子對接。在RCSB PDB數(shù)據(jù)庫(http://www.rcsb.org/)檢索核心靶點的3D結(jié)構(gòu)，去除水分子和其原配體并加極性氫。從PubChem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)下載配體的3D文件，優(yōu)化構(gòu)象。使用Auto Dock Vina軟件(美國Scripps研究所Olson實驗室)對受體和配體進(jìn)行分子對接，設(shè)置能量范圍(energy range)為10、精度(exhaustiveness )為20，迭代次數(shù)(num modes)為100，通過比較結(jié)合自由能的高低評價受體和配體的結(jié)合情況，使用Pymol軟件對結(jié)果進(jìn)行可視化。

3 結(jié)果

3.1 藥效學(xué)結(jié)果

3.1.1 結(jié)腸組織損傷情況 表2示，模型組大鼠的結(jié)腸組織明顯變粗，結(jié)腸質(zhì)量長度比顯著升高(P<0.01)，各組動物經(jīng)藥物治療后腸管增厚程度均有所減輕，結(jié)腸損傷指數(shù)、質(zhì)量長度比均有所下降(P<0.05)，且各治療組之間無顯著性差異。

表2 各組大鼠結(jié)腸損傷情況比較

3.1.2 細(xì)胞因子IL-1β和COX-2水平 表3示，模型大鼠結(jié)腸組織中IL-1β、COX-2均顯著增高(P<0.01)，各組動物經(jīng)藥物治療后IL-1β、COX-2水平均有所下降(P<0.05)，但三者之間無顯著性差異。

表3 各組大鼠結(jié)腸中IL-1β和COX-2水平比較

3.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

3.2.1 烏梅丸精簡方和全方有效成分及其靶點、疾病靶點的收集結(jié)果 圖1示，通過TCMSP數(shù)據(jù)庫得到烏梅丸全方和精簡方的有效成分為73和41個，有效成分的靶點有120和113 個?；赥TD數(shù)據(jù)庫、CTD數(shù)據(jù)庫和Geen Card數(shù)據(jù)庫共檢索到17 018 個疾病靶點。將疾病靶點與烏梅丸全方和精簡方有效成分的靶點取交集得到的韋恩圖，全方、精簡方與UC共同調(diào)控的靶點分別有117和105 個，與精簡方比較全方多調(diào)控了12 個靶點。

圖1 UC與烏梅丸全方、精簡方韋恩圖

3.2.2 藥物-成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建結(jié)果 圖2示，將烏梅丸全方、精簡方的有效成分及其靶點與疾病靶點導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件后，構(gòu)建藥物-成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)，其中綠色部分代表有效成分，綠色三角形代表重復(fù)性成分，紫色箭形代表全方、精簡方與UC共同調(diào)控的靶點，淺粉色箭形代表全方與UC共同調(diào)控的靶點，淺黃色箭形為非交集靶點。從圖中可以看出，烏梅丸全方、精簡方有效成分和UC共同調(diào)控的靶點共有105 個，對于UC靶點的調(diào)控，烏梅丸全方比精簡方僅多了12 個靶點，說明從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分子角度來看，烏梅丸全方和精簡方對于UC疾病具有較強的調(diào)控作用，且全方和精簡方對于UC調(diào)控的靶點重復(fù)性很高。

圖2 藥物-成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)圖

3.2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和拓?fù)浞治鼋Y(jié)果 圖3示，利用STRING數(shù)據(jù)庫構(gòu)建了蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖，全方的PPI網(wǎng)絡(luò)由115 個節(jié)點和1056 條邊構(gòu)成，精簡方的PPI網(wǎng)絡(luò)由103 個節(jié)點和888 條邊構(gòu)成，將其導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件?；贑ytoHubba插件以度(Degree)值為條件進(jìn)行拓?fù)浞治?，篩選出全方和精簡方排名前10的核心靶點，與有效成分進(jìn)行關(guān)聯(lián)，得到的核心靶點-核心成分網(wǎng)絡(luò)圖，全方和精簡方有9 個相同的核心靶點。

圖3 核心靶點-核心成分網(wǎng)絡(luò)圖

3.2.4 GO和KEGG富集結(jié)果 GO分析：圖4示，其中橙色柱代表分子功能(molecular function)，綠色柱代表生物過程(biological process)，藍(lán)色柱代表細(xì)胞組成(cellular component)。在分子功能方面，全方和精簡方主要對酶結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子活性和序列特異性DNA結(jié)合、類固醇激素受體等分子功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，且全方還對藥物結(jié)合結(jié)合和RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄因子活性、配體激活的序列特異性DNA結(jié)合等分子功能顯著調(diào)節(jié)；在生物過程方面，全方和精簡方主要調(diào)節(jié)RNA聚合酶II啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控和等生物過程，且精簡方還對信號傳導(dǎo)和凋亡過程負(fù)調(diào)控的生物過程具有重要調(diào)節(jié)作用；在細(xì)胞組成方面，全方和精簡方都對胞質(zhì)溶膠和核質(zhì)具有調(diào)節(jié)作用，從以上可以看出，烏梅丸全方和精簡方主要通過調(diào)控酶結(jié)合、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄等生物功能來治療UC。

圖4 GO富集分析圖

KEGG分析：圖5示，該氣泡圖中靶點富集到通路中的數(shù)目越多則氣泡越大，從綠色至黃色，再至紅色的顏色過渡中，表示P值越來越大。全方和精簡方顯著調(diào)節(jié)的前20 條通路相同，其中與UC有關(guān)的通路主要有腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)信號通路、缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor，HIF)-1信號通路和腫瘤抑制基因(tumor suppressor gene，p53)信號通路等，圖6示，對富集得到的一些主要通路進(jìn)行整合，其中胱天蛋白酶(caspase，CASP)3、原癌基因(proto-oncogene c-fos，F(xiàn)OS)、IL-6和表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)4個核心靶點出現(xiàn)在這幾條主要通路中，說明烏梅丸主要通過CASP3、FOS、IL6和EGFR等核心靶點作用于TNF信號通路、結(jié)直腸癌信號通路和p53信號通路等通路來治療UC。

圖5 KEGG富集分析圖

圖6 烏梅丸全方和精簡方作用于UC的主要通路圖

3.2.5 分子對接驗證結(jié)果 圖4、5示，綜合拓?fù)浞治龊屯犯患Y(jié)果，由于FOS的晶體結(jié)構(gòu)沒有明顯適合對接的口袋位置，因此最終選擇IL6、CASP3和EGFR作為受體，25 個核心成分作為配體進(jìn)行分子對接，對接盒子的參數(shù)設(shè)置，受體和配體對接的最低結(jié)合自由能的絕對值越大，說明二者結(jié)合的親和力越高。一般認(rèn)為，絕對值在6～7.5之間表示受體和配體有一定的結(jié)合活性，7.5～9之間表示有較好的結(jié)合活性，大于9表示有強烈的結(jié)合活性。圖7示，根據(jù)對接結(jié)果，22 個核心成分與3 個靶點都有較強的親和力，對受體和配體最低結(jié)合自由能絕對值大于9的進(jìn)行可視化。

表4 3個靶點對接盒子參數(shù)比較

4 討論

UC主要以直腸和結(jié)腸黏膜及黏膜下層的炎癥改變?yōu)橹饕±硖卣?，結(jié)腸黏膜損傷現(xiàn)象包括水腫、充血、潰瘍以及大量炎癥細(xì)胞浸潤等[12]。因此，在藥效實驗時需要對大鼠的結(jié)腸損傷情況進(jìn)行評價；IL-1β作為一種能夠激活多種免疫和炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子，主要由單核細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等分泌產(chǎn)生[13]，UC患者血清、糞便和結(jié)腸組織中IL-1β水平明顯高于正常機體[14，15]；COX-2是一種與炎癥密切相關(guān)、可將花生四烯酸代謝成前列腺素的誘導(dǎo)型環(huán)氧化酶，在正常腸黏膜的表達(dá)較低，而在UC患者的腸黏膜表達(dá)明顯升高[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常組大鼠比較，模型組大鼠的結(jié)腸組織明顯變粗，結(jié)腸質(zhì)量長度比顯著升高，結(jié)腸組織中IL-1β和COX-2水平顯著升高，烏梅丸丸全方組、精簡方組和陽性藥物組大鼠的腸組織損傷情況均有所改善，結(jié)腸質(zhì)量長度比下降，IL-1β和COX-2水平降低，且給藥的3個組并無顯著差異，說明烏梅丸全方和精簡方都對TNBS誘導(dǎo)的UC大鼠有治療作用，雖然全方組大鼠結(jié)腸損傷的改善情況較好，但二者差別細(xì)微。因此從藥效實驗可認(rèn)為，烏梅丸精簡方能夠替代全方治療UC，對于精簡方是否具有可行性及其內(nèi)在機制，則可借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接進(jìn)行更深層次的探討分析。

表5 核心成分與3個靶點對接的最低結(jié)合自由能(kcal/mol)

中藥復(fù)方治療疾病有多成分、多靶點的特點，內(nèi)在機制和作用過程極其復(fù)雜，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)使研究人員從“一藥一靶點”的傳統(tǒng)觀念轉(zhuǎn)向“藥物-靶點網(wǎng)絡(luò)”模式[17]。該模式符合中醫(yī)的整體觀念，因此本研究使用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對烏梅丸精簡方的可行性進(jìn)行分析。本研究發(fā)現(xiàn)，烏梅丸全方和精簡方的核心靶點基本類似，主要有IL-6、CASP3和EGFR等。GO富集發(fā)現(xiàn)，全方和精簡方主要調(diào)節(jié)酶結(jié)合、信號傳導(dǎo)、凋亡過程和轉(zhuǎn)錄等生物功能。KEGG富集發(fā)現(xiàn)，全方和精簡方作用的UC有關(guān)的通路主要有細(xì)胞凋亡、TNF信號通路、HIF-1信號通路、大腸癌和p53信號通路等，在通路中，IL-6、CASP3、FOS和EGFR等靶點也起到了核心作用。

IL-6是一種多功能細(xì)胞因子，在機體免疫應(yīng)答、炎癥等過程中具有調(diào)節(jié)作用，在UC的發(fā)生和發(fā)展過程中，其表達(dá)水平與UC嚴(yán)重程度密切相關(guān)且呈正相關(guān)[18，19]。CASP3是一種蛋白酶，其家族在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用，UC發(fā)生時，腸道黏膜屏障的完整性破壞，存在上皮細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象[20]，CASP3表達(dá)明顯增加[21]。GO和KEGG結(jié)果顯示，烏梅丸全方和精簡方作用于細(xì)胞凋亡這條通路，因此調(diào)控CASP3的表達(dá)對控制UC和細(xì)胞凋亡具有重要意義。EGFR是一種受體酪氨酸激酶，與配體結(jié)合參與細(xì)胞發(fā)育中的許多重要活動，如細(xì)胞增殖、分裂和凋亡等[22]。EGFR的過量表達(dá)在UC及其相關(guān)癌變中起重要作用，對EGFR的研究有助于預(yù)防、診斷和治療UC[23]。因此文獻(xiàn)表明，IL6、CASP3、FOS和EGFR等核心靶點在UC的發(fā)生和發(fā)展過程中具有重要意義，烏梅丸全方和精簡方主要通過作用于這些靶點來治愈UC。

圖7示，烏梅丸全方和精簡方主要通過細(xì)胞凋亡、TNF信號通路、HIF-1信號通路、結(jié)直腸癌信號通路和p53信號通路等來改善UC。烏梅丸全方和精簡方主要通過激活核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)和IκB激酶(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase, IKKB)靶點調(diào)控TNF信號通路，在調(diào)控該信號通路的同時也作用于磷脂酰肌醇-3-羥激酶(PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)信號通路，進(jìn)一步調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、信號傳導(dǎo)等生物過程，改善黏膜損傷。TNF-α作為促炎和調(diào)節(jié)因子，能促進(jìn)促炎因子的釋放，可與干擾素一起改變腸上皮細(xì)胞的屏障功能，增強腸黏膜和血管壁的通透性，破壞腸黏膜的完整性并形成潰瘍[24]。HIF是體內(nèi)氧穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子, 嚴(yán)格監(jiān)管人體內(nèi)氧氣水平[25]，在HIF-1信號通路中起關(guān)鍵性作用。UC最嚴(yán)重并發(fā)癥之一就是UC-CRC，KEGG富集結(jié)果顯示，烏梅丸全方和精簡方還作用于結(jié)直腸信號通路，說明烏梅丸全方和精簡方可能具有預(yù)防UC發(fā)生癌變的潛在作用。p53是一種重要的腫瘤抑制因子，其介導(dǎo)的信號通路參與信號傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡和增殖等過程。Kobayashi等[26]認(rèn)為，p53的表達(dá)與UC的病理機制密切相關(guān)，其表達(dá)可能是UC與相關(guān)結(jié)腸癌發(fā)生早期的良好生物標(biāo)志物和診斷工具。

對靶點和成分拓?fù)浞治霭l(fā)現(xiàn)，烏梅丸全方和精簡方的核心成分相似性極高，主要有黃酮類(槲皮素、山奈酚)、生物堿類(小檗堿、吳茱萸次堿、黃連堿、甲基黃連堿)、木脂素類(芝麻素)和三萜類(人參皂苷rh2)等成分，陳大朋等[27]篩選具有靶向抑制JAK受體的天然單體化合物，發(fā)現(xiàn)以上這些成分對炎性腸病有治療作用，而分子對接結(jié)果也顯示，以黃酮類為代表的核心成分與UC關(guān)鍵靶點(IL-6、CASP3和EGFR等)具有較高的結(jié)合活性。

綜上所述，從藥效學(xué)角度來看，烏梅丸全方對TNBS誘導(dǎo)的UC大鼠治療作用雖比精簡方略好，但無顯著性差異；從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)角度來看，烏梅丸全方和精簡方作用于UC的核心靶點、核心成分和通路呈高度相似性。雖然烏梅丸全方比精簡方對于UC的效果更好，但差異不大，在一定條件下對于UC的治療，烏梅丸精簡方更具有可行性。