化學(xué)發(fā)光法在HIV初篩呈陽(yáng)性反應(yīng)無(wú)償獻(xiàn)血者中的應(yīng)用

于艷濤，李 交，符發(fā)雄，葉偉亮，劉志泉，梁麗雯，朱慧娟，陳永飛，羅嬌娜，歐陽(yáng)海寧 （佛山市順德區(qū)中心血站檢驗(yàn)科，廣東佛山 528300）

艾滋病是一種危害性極大的傳染性疾病，是由于患者感染人類免疫缺陷病毒（HIV）引起，目前在臨床醫(yī)學(xué)中還沒(méi)有有效的治療方法。為預(yù)防及杜絕血液傳播而導(dǎo)致HIV相關(guān)疾病，國(guó)家衛(wèi)生部門(mén)要求獻(xiàn)血者在輸血前均需接受HIV 抗體檢測(cè)。在血站日常篩查工作中，第4 代HIV 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）的假陽(yáng)性率較高[1]，會(huì)造成血液資源的浪費(fèi)以及假陽(yáng)性獻(xiàn)血者的恐慌。對(duì)熱衷于支持無(wú)償獻(xiàn)血事業(yè)的固定獻(xiàn)血者，我們應(yīng)做好相應(yīng)的歸隊(duì)管理。因此本站收集了ELISA 檢測(cè)HIV 抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)但感染狀態(tài)不確定的無(wú)償獻(xiàn)血者樣本，通過(guò)增加化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）檢測(cè)，以確認(rèn)ELISA 法陽(yáng)性反應(yīng)性無(wú)償獻(xiàn)血者的血清學(xué)狀態(tài)，對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者歸隊(duì)要求進(jìn)行評(píng)估，同時(shí)為將來(lái)ELISA 篩查HIV 呈陽(yáng)性反應(yīng)獻(xiàn)血者的歸隊(duì)檢測(cè)積累數(shù)據(jù)資料。

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集我站2018年7月至2020年12月ELISA篩查HIV 陽(yáng)性且自愿咨詢檢測(cè)的無(wú)償獻(xiàn)血者100 例，男65例，女35例，年齡19～50歲，平均（35.2±8.7）歲，其中經(jīng)當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心（CDV）應(yīng)用免疫印跡法（WB）確證HIV抗體陽(yáng)性者10例。

1.2 儀器與試劑

羅氏公司CLIA 分析儀cobas 6000(e 601 模塊)，F(xiàn)AME 全自動(dòng)酶標(biāo)儀（北京澳斯邦公司），Xantus 全自動(dòng)加樣儀（深圳愛(ài)康公司）。化學(xué)發(fā)光質(zhì)控品、定標(biāo)液和艾滋病毒抗原/抗體檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自羅氏公司。北京萬(wàn)泰人類免疫缺陷病毒抗體抗原檢測(cè)試劑盒（ELISA），法國(guó)伯樂(lè)人類免疫缺陷病毒抗體抗原檢測(cè)試劑盒（ELISA），試劑均在有效期內(nèi)。

1.3 方法

對(duì)研究期間所有采集的無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本經(jīng)兩種酶免試劑ELISA初篩檢測(cè)，操作均按儀器和試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。復(fù)檢至少有1 種試劑仍為陽(yáng)性反應(yīng)性的標(biāo)本送至順德區(qū)CDV 通過(guò)WB 進(jìn)行確證。同時(shí)對(duì)于呈反應(yīng)性但感染狀態(tài)不確定的無(wú)償獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行CLIA檢測(cè)。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

羅氏cobas 6000 化學(xué)發(fā)光免疫分析法：以S/CO值≥1.0 判定為陽(yáng)性，S/CO 值＜1.0 判定為陰性；酶聯(lián)法：吸光度≥cut off 值為陽(yáng)性，吸光度＜cut off 值為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測(cè)HIV抗體結(jié)果的比較

CLIA 法檢測(cè)HIV 抗體陽(yáng)性符合率明顯高于ELISA法（P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 兩種方法檢測(cè)HIV抗體結(jié)果的比較

2.2 ELISA檢測(cè)HIV抗體陽(yáng)性結(jié)果分析

ELISA 檢測(cè)100 例HIV 抗體陽(yáng)性者S/CO 值與WB 結(jié)果符合率比較，以WB 檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，ELISA檢測(cè)100 例HIV 抗體陽(yáng)性者中，S/CO 值為10.0～＜30.0 的標(biāo)本陽(yáng)性符合率明顯高于其他組（P＜0.01），見(jiàn)表2。

表2 ELISA檢測(cè)HIV抗體陽(yáng)性S/CO值與WB結(jié)果符合率的比較

2.3 CLIA檢測(cè)HIV抗體反應(yīng)性結(jié)果分析

ELISA 檢測(cè)100 例HIV 抗體反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行CLIA 復(fù)檢，CLIA 結(jié)果按陰性、假陽(yáng)性、陽(yáng)性S/CO 值分布分區(qū)與WB結(jié)果陽(yáng)性符合率比較，S/CO值≥100.0的陽(yáng)性符合率顯著高于其他組（P＜0.01），見(jiàn)表3。

表3 CLIA檢測(cè)HIV抗體陽(yáng)性者S/CO值與WB結(jié)果符合率的比較

2.4 無(wú)償獻(xiàn)血者參與血站獻(xiàn)血者歸隊(duì)管理情況

在WB 確證的90 例HIV 抗體陰性獻(xiàn)血者中，25例自愿參加了獻(xiàn)血者歸隊(duì)檢測(cè)，占比27.8%。獻(xiàn)血者歸隊(duì)標(biāo)本均進(jìn)行ELISA 檢測(cè)，其中仍有10 例結(jié)果為陽(yáng)性。

3 討論

目前HIV 檢測(cè)方法分為篩查試驗(yàn)(ELISA、CLIA)和補(bǔ)充試驗(yàn)(確證試驗(yàn)和核酸試驗(yàn))[2-3]。常規(guī)用于血站HIV 血液篩查的ELISA 方法，由于其成本低、操作簡(jiǎn)單，而被血站廣泛應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查[4]。CLIA是一種新型的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，因其靈敏度高、特異性好[5]、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)而被臨床廣泛應(yīng)用，但其檢測(cè)成本較高，現(xiàn)在尚未在無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查中普遍推廣。本研究將CLIA 用于ELISA 檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)性的無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本，探討其應(yīng)用于獻(xiàn)血者歸隊(duì)管理中的可行性。我站2018年7月至2020年12月無(wú)償獻(xiàn)血者HIV 感染率為0.108‰，低于廣州[6]（0.229‰），與中山[7]（0.120‰）接近，說(shuō)明本地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者大部分為HIV 感染低危人群，我們更應(yīng)做好HIV 抗體反應(yīng)性無(wú)償獻(xiàn)血者的歸隊(duì)管理工作。獻(xiàn)血者經(jīng)常規(guī)檢測(cè)法ELISA 篩查HIV 陽(yáng)性的100 例標(biāo)本再行CLIA 檢測(cè)，結(jié)果與WB 確證結(jié)果比較，ELISA 假陽(yáng)性90 例，CLIA假陽(yáng)性1例，ELISA檢測(cè)的假陽(yáng)性率顯著高于CLIA。

當(dāng)ELISA 兩種不同檢測(cè)試劑均呈陽(yáng)性反應(yīng)且S/CO 值≥10.0 時(shí)，標(biāo)本的陽(yáng)性符合率較高，預(yù)示HIV 抗體陽(yáng)性的可能性較大。其他區(qū)間的88 例假陽(yáng)性反應(yīng)性標(biāo)本中單試劑陽(yáng)性反應(yīng)性標(biāo)本占絕大部分，導(dǎo)致這部分獻(xiàn)血者的血液淘汰，同時(shí)影響后續(xù)的獻(xiàn)血者歸隊(duì)。可能因ELISA檢測(cè)試劑包被抗原多為重組抗原，不同廠家包被抗原選取的片段不一致，造成檢測(cè)結(jié)果不一致[8]；也可能與部分血站為了提高輸血的安全性而設(shè)置臨界值灰區(qū)（下調(diào)臨界值）有關(guān)。本研究中單試劑檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本經(jīng)WB 確證試驗(yàn)均為陰性。呂蒙恩等[9]研究認(rèn)為ELISA檢測(cè)HIV抗原/抗體，設(shè)置灰區(qū)對(duì)提升血液安全的作用有限，還易誤淘汰無(wú)償獻(xiàn)血者。而CLIA 特異性高，假陽(yáng)性率較低。本研究中，CLIA 的1 例假陽(yáng)性發(fā)生在S/CO 值1.0～＜100.0。因此我們?cè)跈z測(cè)時(shí)應(yīng)注意該區(qū)間的陽(yáng)性結(jié)果以保證結(jié)果的可靠性。國(guó)內(nèi)有專家提出高滴度自身抗體會(huì)干擾CLIA 對(duì)HIV 抗體的檢測(cè)，產(chǎn)生一定的假陽(yáng)性[10-11]；也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)CLIA 檢測(cè)標(biāo)本采用高速離心后HIV 抗體的陽(yáng)性復(fù)檢率顯著降低，可避免纖維蛋白、血細(xì)胞及其碎片、血液中可能存在的其他粒子對(duì)抗原、抗體檢測(cè)的影響[12]。而本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中進(jìn)行CLIA檢測(cè)的樣本，未將標(biāo)本進(jìn)行高速離心處理，直接用原來(lái)的血清樣本進(jìn)行復(fù)檢，可能是導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果的原因。因此在應(yīng)用CLIA檢測(cè)HIV篩查呈反應(yīng)性的標(biāo)本且在S/CO值較低時(shí)，應(yīng)重新提高離心速度分離樣本，再行復(fù)檢。

將高靈敏度的ELISA 試劑應(yīng)用于低危獻(xiàn)血者人群的血液篩查，假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)無(wú)可避免。但每一份假陽(yáng)性結(jié)果都可能會(huì)給無(wú)償獻(xiàn)血者造成身心傷害和精神困擾。獻(xiàn)血者歸隊(duì)作為健康公民參加無(wú)償獻(xiàn)血的選擇權(quán)，我們血站工作者有必要做好無(wú)償獻(xiàn)血者歸隊(duì)管理。本文ELISA 檢測(cè)HIV 抗體陽(yáng)性的100 例無(wú)償獻(xiàn)血者中，經(jīng)CDC 確證有90 例假陽(yáng)性者，其中25 例主動(dòng)參與了歸隊(duì)管理檢測(cè)，說(shuō)明假陽(yáng)性獻(xiàn)血者中仍有27.8%愿意繼續(xù)參與無(wú)償獻(xiàn)血，這對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血事業(yè)有重要的意義。血站現(xiàn)行的歸隊(duì)管理檢測(cè)策略是應(yīng)用篩查項(xiàng)目呈陽(yáng)性的ELISA 試劑再次進(jìn)行雙孔復(fù)檢。連續(xù)隨訪兩次，結(jié)果仍為HIV 抗體陽(yáng)性，獻(xiàn)血者可永久屏蔽獻(xiàn)血資格[13]。本研究參與歸隊(duì)的25 名獻(xiàn)血者中仍有10 名獻(xiàn)血者檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)（假陽(yáng)性結(jié)果）而無(wú)法順利歸隊(duì)。因此，為了減少假陽(yáng)性檢出率，有必要對(duì)ELISA 篩查呈陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本再行CLIA 方法復(fù)檢，降低假陽(yáng)性率，從而減輕對(duì)獻(xiàn)血者造成不必要的身心傷害和精神困擾。從這個(gè)方面來(lái)說(shuō)，CLIA 比ELISA 具有一定的優(yōu)勢(shì)，與段美婷等[14]的研究結(jié)果相似。

綜上所述，CLIA 在無(wú)償獻(xiàn)血者HIV 篩查呈陽(yáng)性的標(biāo)本檢測(cè)中假陽(yáng)性率低于ELISA，由于其成本高未能在無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查檢測(cè)中普遍推廣，但可應(yīng)用于無(wú)償獻(xiàn)血者的歸隊(duì)管理。