血清IFN-α、aCL和抗β2-GPⅠ抗體與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血小板減少的相關(guān)性*

陳華良 廖永強(qiáng) 任妹 朱靜茹

(萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科;2.風(fēng)濕免疫科，江西 萍鄉(xiāng) 337000)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)在臨床上的病因尚不明確，是一種慢性全身性自身免疫性疾病?；颊咭匝瀹a(chǎn)生多種具有免疫活性的自身抗體為特征，促使免疫系統(tǒng)攻擊自身組織，造成全身多臟器和組織受損[1-3]。其中，血小板減少是SLE患者的常見表現(xiàn)，且是評估SLE患者疾病活動(dòng)性的重要指標(biāo)之一，但SLE患者血小板減少原因尚不清楚?？功?糖蛋白Ⅰ(β2-GPI)抗體和抗心磷脂抗體(aCL)作為抗磷脂抗體綜合征的診斷指標(biāo)，能促進(jìn)血小板聚集增加患者血栓形成風(fēng)險(xiǎn)[4]。研究還發(fā)現(xiàn)，抗磷脂綜合征患者接受干擾素α(IFN-α)治療后，血清抗磷脂抗體滴度明顯減低[5]。在SLE患者體內(nèi)，IFN-α與抗磷脂抗體及與血小板減少的關(guān)系是否相關(guān)尚不清楚。本研究探討血清IFN-α、aCL和β2-GPI抗體與SLE患者血小板減少的相關(guān)性,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2018年1月～2019年12月我院門診及住院診治的SLE患者65例，均為女性，年齡14～75歲，平均(42.4±28.6)歲，所有患者均符合美國類風(fēng)濕病學(xué)會2009年修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，活動(dòng)性判定以SLEDAI-2000為標(biāo)準(zhǔn)[7]。其中血小板減少SLE患者20例(PLT<100×109/L,A組)，平均年齡(35.8±19.7)歲，無血小板減少組45例(101×109/L～370×109/L，B組)，平均年齡(40.2±21.5)歲。選取同期16例排除免疫因素引起的脾功能亢進(jìn)(hypersplenism,HS)患者為疾病對照組(C組)，平均年齡(38.2±14.5)歲，所有入組病例均符合相應(yīng)的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)。另選取同期我院體檢中心的健康體檢者60人(D組)，均為女性，平均年齡(40.9±16.7)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①認(rèn)知能力正常，可配合研究。②造血、凝血等血液系統(tǒng)功能正常。③各項(xiàng)生命體征處于穩(wěn)定狀態(tài)。④對本次研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠及哺乳期女性。②合并惡性腫瘤。③患有精神類疾病。④參與同期其他醫(yī)療研究。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，且屬自愿參與，四組性別、年齡組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法 抗aCL(IgG/IgM/總抗體)、抗β2-GPⅠ(IgG/IgM/總抗體)和抗雙鏈DNA抗體檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，試劑盒購自歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司。血清樣本以201∶1稀釋，樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及陰陽質(zhì)控100 μL加入至抗β2-GPⅠ的杯孔中，設(shè)置孵育溫度為18～25℃；30 min后，洗滌拍干(重復(fù)3次)，加入酶結(jié)合物，再次以18～25 ℃的溫度孵育30 min；洗滌拍干(重復(fù)3次)，加入100 μL基質(zhì)液，在18～25 ℃溫度下孵育15 min；100 μL終止液終止反應(yīng)?？功?-GPⅠ抗體標(biāo)準(zhǔn)品濃度為2、20、200 RU/mL，≥20 RU/mL為陽性；抗aCL抗體標(biāo)準(zhǔn)品濃度為2、12、120 PLU/mL，≥12 PLU/mL為陽性。酶標(biāo)儀為Bio-Rad Model 680，450 nm為主波長,620 nm為次波長。IFN-α檢測ELISA，試劑購自R&D Systems China；CRP、補(bǔ)體C3和C4檢測采用免疫比濁法，試劑購自自貝克曼庫爾特(中國)公司，所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。收集患者及健康對照的一般資料(性別、年齡)及實(shí)驗(yàn)室檢查，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)主要為血常規(guī)及骨髓穿刺活檢結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 SLE患者的一般資料及臨床特征 SLE患者平均病程為(14.8±9.6)月,主要臨床癥狀為面部紅斑、對光敏感、關(guān)節(jié)痛及免疫功能紊亂,A組臨床癥狀比B組更為嚴(yán)重(P<0.05)，見表1。

表1 SLE患者一般資料及臨床特征[n(×10-2)]Table 1 General information and clinical features of SLE patients

2.2 四組患者血清IFN-α水平、aCL和抗β2-GPI抗體滴度檢測結(jié)果分析 A組患者血清IFN-α水平、抗aCL抗體(IgG/IgM/總抗)和抗β2-GPI抗體(IgG/IgM/總抗)滴度均顯著高于其余三組(均P<0.01)；B組患者血清IFN-α水平、抗aCL抗體(IgG/IgM/總抗)和抗β2-GPI抗體(IgG/IgM/總抗)滴度均顯著高于C組和D組(均P<0.01)，見表2。

表2 各組患者血清IFN-α、抗aCL抗體和抗β2-GPI抗體檢測結(jié)果Table 2 Detection results of serum IFN-α anti-ACL and anti-β2-gpI antibody in each group

2.3 A組與B組患者疾病活動(dòng)性指標(biāo)比較 A組抗dsDNA抗體滴度、CRP濃度和SLEDAI顯著高于B組(均P<0.01)，補(bǔ)體C3和C4顯著低于B組(均P<0.01),見表3。

表3 血小板減少組與無血小板減少組疾病活動(dòng)性指標(biāo)比較Table 3 Comparative analysis of disease activity indexes between thrombocytopenia and normal SLE patients

2.4 SLE患者血清IFN-α水平與aCL和抗β2-GPⅠ總抗體滴度及它們分別與血小板的相關(guān)性 對SLE患者血清IFN-α水平與aCL和抗β2-GPⅠ總抗體滴度及它們分別與血小板的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清IFN-α水平與aCL和抗β2-GPⅠ總抗體滴度呈正相關(guān)(均P<0.01)(圖1A、圖1B)。IFN-α水平、aCL和抗β2-GPⅠ總抗體滴度均與血小板呈顯著負(fù)相關(guān)(均P<0.01)，見圖1C、圖1D、圖1F。

圖1 SLE患者血清IFN-α水平與aCL和抗β2-GPⅠ總抗體滴度及它們分別與血小板的相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis among serum IFN-α level and total antibody titer of ACL and anti-β2-gpⅠ and platelet in SLE patients

3 討論

SLE是自身免疫介導(dǎo)的、以產(chǎn)生多種自身抗體為特點(diǎn)的多器官受累的彌漫性結(jié)締組織病，易繼發(fā)抗磷脂綜合征，抗磷脂綜合征的首發(fā)癥狀常為血小板減少，且為血液系統(tǒng)損傷最常見表現(xiàn)，發(fā)生率約為7%～40%[8]，嚴(yán)重可形成下肢靜脈血栓、動(dòng)脈血栓、誘發(fā)腦血管意外，威脅患者生命[9-10]。SLE患者并發(fā)血小板減少的機(jī)制尚不清楚，自身抗體介導(dǎo)的免疫損傷是引起血小板減少的主要原因[11]。aCL是一種以血小板和內(nèi)皮細(xì)胞膜上帶負(fù)電荷的心磷脂作為靶抗原的自身抗體，aCL持續(xù)陽性的SLE患者更易形成血栓，這與aCL可促進(jìn)血小板聚集有關(guān)[12]。β2-GPI是一種能與活化的血小板或者凋亡小體表面磷脂類物質(zhì)、脫氧核糖核酸(DNA)、帶負(fù)電荷分子如肝素、極低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)等結(jié)合的粘附蛋白。研究表明，β2-GPI及其抗體能促進(jìn)血小板聚集，參與血栓的發(fā)生發(fā)展過程[13]。在SLE患者并發(fā)抗磷脂抗體綜合征患者中，抗β2-GPI抗體檢出率極高，且抗體滴度居高不下，是發(fā)生心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[14]。本文檢測各組的aCL和抗β2-GPI抗體及疾病活動(dòng)性指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)血小板減少組aCL(IgG/IgM/總抗)和抗β2-GPI抗體(IgG/IgM/總抗)滴度顯著高于血小板正常組、脾功能亢進(jìn)組和健康對照組，這與上述報(bào)道一致。我們分析還發(fā)現(xiàn)，血小板減少組SLE患者疾病活動(dòng)性評分和CRP顯著高于血小板正常組，而補(bǔ)體C3和C4顯著低于血小板正常組，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者高滴度抗磷脂抗體與低補(bǔ)體相關(guān)[3]，Ergeta Ktona等[15]研究發(fā)現(xiàn)，血小板減少及疾病活動(dòng)度指標(biāo)是預(yù)測SLE患者疾病進(jìn)展的指標(biāo)，說明aCL、抗β2-GPI抗體、C3、C4，CRP和血小板一起參與疾病的發(fā)生發(fā)展。

SLE患者抗磷脂抗體(aPL)的存在如何導(dǎo)致臨床表現(xiàn)的機(jī)制尚不完全清楚，但是內(nèi)皮細(xì)胞的改變，aPL免疫復(fù)合物的形成、血小板活化和所有的補(bǔ)充系統(tǒng)激活導(dǎo)致促凝血狀態(tài)是臨床常見表現(xiàn)[16-17]。本文對所有SLE患者臨床特征分析發(fā)現(xiàn)，血小板減少組關(guān)節(jié)痛、紅斑和腎功能損傷的發(fā)生率顯著高于血小板正常組，且aPL滴度也顯著升高，與上述研究結(jié)果一致。自身抗體和核酸抗原形成免疫復(fù)合物通過Toll樣受體(TLR-7)刺激漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(pDCs)產(chǎn)生IFN-α[18-19]，IFN-α作用于內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙參與早期動(dòng)脈粥樣硬化的形成[20]。有研究發(fā)現(xiàn)，IFN-α也能活化抗原提呈細(xì)胞，促進(jìn)aPL等自身抗體的產(chǎn)生和增加細(xì)胞凋亡[21]。本文研究發(fā)現(xiàn)，血小板減少組SLE患者血清IFN-α水平顯著高于血小板正常組，且IFN-α水平與aCL和抗β2-GPI抗體總滴度均呈正相關(guān)，這與上述報(bào)道一致。我們還發(fā)現(xiàn)，SLE患者血清IFN-α水平、aCL和抗β2-GPI抗體總滴度均與血小板呈負(fù)相關(guān)，說明在SLE患者體內(nèi)，IFN-α或許可通過TLR-7或9信號通路調(diào)節(jié)aCL和抗β2-GPI抗體表達(dá)，一同參與血栓的發(fā)生發(fā)展。

4 結(jié)論

SLE患者血清IFN-α水平與aCL和抗β2-GPI抗體總滴度均呈正相關(guān)，而IFN-α水平、aCL和抗β2-GPI抗體總滴度均與血小板呈負(fù)相關(guān)。說明IFN-α或許可以通過某種信號通路調(diào)控aCL和抗β2-GPI抗體的產(chǎn)生，與血小板一起參與SLE患者疾病的進(jìn)展。本研究僅為實(shí)驗(yàn)室檢測數(shù)據(jù)分析，具體的調(diào)控機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。