榕江縣某雞場雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

楊晶晶 姜兆芳/貴州省榕江縣動物疫病預(yù)防控制中心 557200

禽大腸桿菌病是由致病性大腸埃希氏菌引起的一種細菌性傳染病，幼禽對本病最易感，一年四季均可發(fā)生，對養(yǎng)禽業(yè)危害極大。2020 年7 月，貴州省榕江縣某養(yǎng)雞場原雞存欄2150 羽，因近期暴雨，導(dǎo)致雞群淋雨、擠壓，發(fā)生不明原因傳染病，病雞表現(xiàn)為精神沉郁，不食，翅下垂，部分病雞眼睛表現(xiàn)濕潤渾濁，剖檢可見心包積液，心外膜有明顯小出血點，肝臟腫大，表面有小出血點，盲腸、喉管、氣管有不同程度出血點，病情程慢性，已陸陸續(xù)續(xù)死亡近800 羽，經(jīng)對該場2只病雞的心、肝、脾、眼滲出物進行采樣，涂片鏡檢，細菌學(xué)分離及生化鑒定，診斷為雞大腸桿菌病，為尋求有效治療藥物進行了藥敏試驗，現(xiàn)報道如下。

1 材料

1.1 病料來源貴州省榕江縣某養(yǎng)雞場病雞2 只。

1.2 試驗器材麥康凱培養(yǎng)基、普通培養(yǎng)基、溫箱、顯微鏡、微量生化管（購自杭州濱和微生物試劑有限公司）、藥敏片（購自杭州微生物試劑有限公司）、革蘭氏染液。

2 試驗方法

2.1 細菌涂片鏡檢無放血方法處死病雞，將死雞用84消毒液浸泡后，無菌打開腹腔，用無菌操作法取心臟、肝臟、脾臟、腸內(nèi)容物分別涂片，革蘭氏染色，置于顯微鏡下觀察。

2.2 細菌分離培養(yǎng)無菌操作法采集心臟、肝臟、脾臟、腸內(nèi)容物接種麥康凱培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)24h，觀察細菌生長情況，無菌取單個標準菌落，劃線接種于普通瓊脂培養(yǎng)基，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

2.3 生化試驗取普通瓊脂培養(yǎng)基上單個菌落接種微量生化管，置于37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。

2.4 藥敏試驗取普通培養(yǎng)皿上單個菌落，用“十字法”劃線接種于新鮮普通培養(yǎng)皿，用無菌鑷子將各種抗菌藥物圓紙片分別貼于培養(yǎng)基表面，各片距離要相等，置于37℃培養(yǎng)24h，觀察抑菌圈。

3 結(jié)果

3.1 細菌涂片鏡檢無菌操作法取死雞心、肝、脾、腸內(nèi)容物涂片，革蘭氏染色后，顯微鏡下觀察呈紅色、兩端鈍圓的短桿菌，為革蘭氏陰性菌。

3.2 細菌分離培養(yǎng)無菌操作取死雞心、肝、脾、腸內(nèi)容物接種麥康凱培養(yǎng)基，置于37℃24h 培養(yǎng)后，菌落形態(tài)呈圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑濕潤，紅色菌落。

3.3 生化試驗將普通培養(yǎng)基標準單個菌落接種到微量生化管，置于37℃24h 培養(yǎng)后，結(jié)果見表1，葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖變?yōu)辄S色，呈陽性，枸櫞酸鹽、硫化氫無變化，呈陰性，對位二甲基苯甲醛無變化，吲哚反應(yīng)呈陰性。參考腸桿菌屬的生化特性，鑒定為大腸埃希氏菌。

表1 分離菌株的生化試驗結(jié)果

3.4 藥敏試驗由表2 可知，分離的大腸埃希氏菌對環(huán)丙沙星、氧氟沙星高度敏感，對多西環(huán)素、復(fù)方新諾明、氨芐西林、四環(huán)素、萬古霉素、青霉素不敏感。

表2 藥敏試驗標準結(jié)果

4 分析與討論

從試驗結(jié)果來看，因青霉素的抗菌窄普性，因此所分離的大腸埃希氏菌對青霉素不敏感。四環(huán)素、多西環(huán)素與氨芐西林因藥物種類繁多，使用方便，價格低廉，且廣泛銷售，養(yǎng)殖場方面也存在濫用抗生素現(xiàn)象，導(dǎo)致產(chǎn)生耐藥性。而對環(huán)丙沙星、氧氟沙星等氟喹諾酮類抗生素，因市面上少有分離株對其高度敏感。雷變蘭等人的試驗研究表明獸用制劑的質(zhì)量與細菌耐藥性的產(chǎn)生也有密切關(guān)系。因此，在進行藥物治療時，用藥敏試驗進行篩選，選擇對菌株敏感的藥物，同時也要選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的藥物治療才有效果。

禽大腸桿菌病是由一類致禽類急性系統(tǒng)性疾病的病原性大腸桿菌引起，主要表現(xiàn)為氣囊炎、肺炎、心包炎、肝周炎、腹膜炎、輸卵管炎等，主要血清型有O1：K1、O2：K1、O78：K80 等，氣候變化，飼養(yǎng)管理不當，如飼養(yǎng)密度過大，雞舍通風不良，濕度大，衛(wèi)生差等均是促進本病發(fā)生的因素，因此，加強飼養(yǎng)管理，改善飼養(yǎng)環(huán)境，搞好圈舍衛(wèi)生，加強消毒滅源，才能有效控制本病的發(fā)生。本次試驗可為榕江縣本地流行的禽大腸桿菌病的防治提供科學(xué)指導(dǎo)，也為本地流行的禽致病性大腸桿菌血清型鑒定奠定基礎(chǔ)。