石榴果實(shí)及果皮抗氧化成分的測(cè)定

楊紅澎 李曦 徐彤 蔣與剛

摘 要：目的：比較新鮮石榴皮、干石榴皮、石榴帶籽果實(shí)和去籽果實(shí)中綠原酸、總花青素、總黃酮和維生素C的含量差異。方法：采用紫外分光光度法測(cè)定綠原酸、總花青素、總黃酮，2，6-二氯靛酚滴定法測(cè)定維生素C。結(jié)果：鮮果皮中的綠原酸、總花青素、維生素C含量都高于干果皮。去籽果實(shí)中綠原酸、總花青素類成分、維生素C含量均高于帶籽果肉，說明可能石榴籽中這3種成分含量很少甚至沒有。而總黃酮含量帶籽果肉高于去籽果肉2倍，說明石榴籽里含有黃酮，且含量高于果肉。石榴皮中綠原酸和總花青素類成分含量都較高，超過3%。結(jié)論：在今后的石榴皮和果肉活性成分提取時(shí)，側(cè)重點(diǎn)應(yīng)該有所不同。

關(guān)鍵詞：石榴;綠原酸;總花青素;總黃酮;維生素C

石榴具有生津止渴、收斂止瀉、止血、殺蟲和解酒等功效[1-5]。石榴果皮和果汁中含有大量的花青素類和黃酮類化合物[3]。石榴皮約占石榴質(zhì)量的20%～30%[4]，石榴皮中多酚含量約為其干重的10.4%～21.3%，石榴皮中沒食子酸和兒茶素的含量均較高。石榴汁中多酚的含量約為2.1 g/L，包括沒食子酸、綠原酸、咖啡酸原兒茶酸、兒茶素及香豆酸等。此外，石榴中的單糖類、多糖類、蹂質(zhì)、有機(jī)酸、維生素、微量元素等對(duì)人體的營(yíng)養(yǎng)健康也起重要作用。本研究測(cè)定了新鮮石榴皮、干石榴皮及去籽果肉和帶籽果肉中常見抗氧化活性成分的含量差異。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

石榴，采集于四川省會(huì)理縣，干石榴皮為陰干樣品，新鮮石榴皮、石榴籽和果肉作為樣品直接用于測(cè)定;標(biāo)準(zhǔn)品：綠原酸，中國(guó)食品藥品檢定研究所 （110753-201314）;花青素矢車菊-3-O-葡萄糖苷，北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司（7084-24-4）;槲皮素，中國(guó)食品藥品檢定研究所（100081-201408）;試劑：2，6-二氯靛酚、偏磷酸、草酸，均為分析純。

1.2 儀器

AEZ00電子天平，瑞士METTLER公司;紫外分光光度計(jì)，北京普析 TU-1901;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮RE-2000A。

1.3 方法

1.3.1 綠原酸的測(cè)定 將果皮或果肉剝離并剪碎，按固液比1∶15稱取樣品200 g。先用石油醚熱回流提取2次每次2 h，再用75%乙醇提取上步提取后的殘?jiān)?0℃熱回流提取3次每次3 h，將提取液混合后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫回收溶劑，當(dāng)溶劑完全回收后先用少量乙醇多次溶解提取物定容到100 mL。原溶液稀釋200倍測(cè)定吸光度。稱取10 mg綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品配置成1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后依次稀釋配制成綠原酸濃度為0.005 、0.01 、0.02 、0.03 、0.04 、0.05 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在267 nm處測(cè)吸光度。以綠原酸含量為橫坐標(biāo)、以吸光度值為縱坐標(biāo)作圖，圖1結(jié)果顯示，在此比色體系下，綠原酸濃度介于0～0.05 mg/mL時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍良好。

1.3.2 總黃酮的測(cè)定 將果皮或果肉剝離并剪碎，按固液比1∶15稱取樣品200 g。先用石油醚熱回流提取2次每次2 h，再用75%乙醇提取上步提取后的殘?jiān)?0℃熱回流提取3次，每次3 h，將提取液混合后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫回收溶劑，當(dāng)溶劑完全回收后先用少量乙醇多次溶解提取物定容到100 mL。原溶液稀釋1 000倍測(cè)定吸光度。稱取槲皮素10 mg標(biāo)準(zhǔn)品配置成1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后依次稀釋配制成槲皮素濃度為0.002、0.004、0.006、0.008、0.01、0.015 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在257 nm測(cè)吸光度。以槲皮素含量為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)作圖，圖2結(jié)果顯示，在此比色體系下，槲皮素濃度介于0～0.015 mg/mL時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍良好。

1.3.3 花青素的測(cè)定 將果皮或果肉剝離并剪碎，按固液比1：15稱取樣品200 g。用75%乙醇60℃避光旋轉(zhuǎn)回流提取3次，每次6 h。將提取液混合后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀避光低溫回收溶劑，當(dāng)溶劑完全回收后先用少量乙醇多次溶解提取物定容到100 mL。原溶液稀釋200倍測(cè)定吸光度。稱取花青素10 mg標(biāo)準(zhǔn)品配置成1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后依次稀釋配制成總花青素濃度為0.005、0.001、0.002、0.04、0.06、0.08 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在281 nm處測(cè)吸光度。以花青素含量為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)作圖，圖3結(jié)果顯示，在此比色體系下，花青素濃度介于0～0.08 mg/mL時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍良好。

1.3.4 維生素C的測(cè)定 維生素C按國(guó)標(biāo)水果、蔬菜維生素C含量測(cè)定法：543 （2，6-二氯靛酚滴定法）GB 6195-86 測(cè)定。液浸提劑的制備：稱取6 g偏磷酸，配置300 mL偏磷酸的2%溶液（W/V），稱取6 g草酸，配置300 mL草酸的2%溶液（W/V）。樣液制備：稱取具有代表性樣品100 g，放入組織搗碎機(jī)中，加100 mL浸提劑，迅速搗成勻漿。成10～40 g獎(jiǎng)狀樣品，用浸提劑將樣品移入100 mL容量瓶，并稀釋至刻度，搖勻過濾。滴定：吸取100 mL濾液放入50 mL錐形瓶中，用以標(biāo)定過的2，6-濾靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉紅色15 s不褪色為止。同時(shí)做空白試驗(yàn)。計(jì)算公式如式（1）：

維生素C（mg/100g）=（V-V0）·T·AW×100（1）

式（1）中，V—滴定樣液時(shí)消耗染料溶液的體積（mL）;V0—滴定空白時(shí)消耗染料溶液的體積（mL）;T—2，6-二氯靛酚染料滴定度（mL）;A—稀釋倍數(shù);W—樣品重量（g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 綠原酸的含量

表4顯示，果皮里的綠原酸含量高于果肉，鮮果皮中綠原酸百分含量高于干果皮，去籽果肉中綠原酸含量高于帶籽果肉。

2.2 總黃酮的含量

表5顯示，果皮里的總黃酮含量高于果肉，干果皮總黃酮含量高于鮮果皮的原因是水分蒸發(fā)后使成分比發(fā)生變化。帶籽果肉總黃酮含量高于果肉，說明籽中也有黃酮。

2.3 花青素類成分的含量

表6顯示，果皮里的花青素類成分含量高于果肉，干果皮中花青素類成分含量低于鮮果皮。去籽果肉中花青素類成分含量高于帶籽果肉。

2.4 維生素C的含量

表7測(cè)定結(jié)果顯示，果皮里的維生素C含量高于果肉，干果皮中維生素C含量低于鮮果皮。果肉與帶籽果肉張維生素C含量一致，說明籽中不含維生素C。

3 結(jié)論與討論

目前，在石榴果皮中已經(jīng)鑒定了 40 多種成分，尤以酚類和類黃酮最為豐富;果肉中主要含有類黃酮成分、花青素及維生素[6]。本研究測(cè)定結(jié)果顯示，鮮果皮中的綠原酸、總花青素、維生素C含量都高于干果皮。去籽果實(shí)中綠原酸、總花青素、維生素C含量均高于帶籽果肉，說明可能籽中這3種成分含量很少甚至沒有。而總黃酮含量帶籽果肉高于去籽果肉2倍，說明石榴籽里含有黃酮，且含量高于果肉。從測(cè)定結(jié)果可以看出，石榴皮中綠原酸和總花青素類成分含量都較高，超過3%，這說明，在今后的石榴皮和果肉活性成分提取時(shí)，側(cè)重點(diǎn)應(yīng)該有所不同。研究表明，石榴皮、果肉、石榴籽具有降糖、降血脂、降血壓、抗病毒、保護(hù)肝臟、抗疲勞、改善關(guān)節(jié)彈力、皮膚彈性、強(qiáng)化動(dòng)脈、靜脈和毛細(xì)血管等作用，而且對(duì)關(guān)節(jié)炎和運(yùn)動(dòng)傷害的炎癥、眼部疾病，如糖尿病視網(wǎng)膜病變和視力下降也有一定作用[5]。研究表明，綠原酸和黃酮類成分槲皮素、蘆?。ㄩ纹に氐氖|香糖苷）間具有協(xié)同抗氧化作用[6]。石榴中的這些成分在功效上是否有一定的協(xié)同作用值得深入研究。◇

參考文獻(xiàn)

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Determination on Antioxidant Components in Fruit and Peel from Puhica granatum

YANG Hong-peng1，2，LI Xi1，XU Tong1，JIANG Yu-gang1

（1Institute of Environmental and Operational Medicine，Academy of Military Medicine Sciences，Academy of Military Sciences，Tianjin 300010，China;2College of Agronomy & Resources and Environment，Tianjin Agricultural University College，Tianjin 300384，China）

Abstract：Objective The contents difference of chlorogenic acid，total anthocyanins，total flavonoids and vitamin C in fresh pomegranate peel，dried pomegranate peel，pulp with seed and pulp without seed were compared.Method Chlorogenic acid，total anthocyanins and total flavonoids were determined by UV spectrophotometry，and vitamin C was determined by 2，6-dichloroindophenol titration.Result The results showed that the contents of chlorogenic acid，total anthocyanins and vitamin C in fresh peel were higher than those in dry peel.The contents of chlorogenic acid，total anthocyanins and vitamin C in pulp without seeds were higher than those in pulp with seeds，which indicated that the contents of chlorogenic acid，total anthocyanins and vitamin C in fruits with seeds were less or even absent.The content of total flavonoids in the pulp with seeds was twice higher than that in the pulp without seeds，indicating that there were flavonoids in pomegranate seeds，and the content was higher than that in flesh.The contents of chlorogenic acid and total anthocyanins in pomegranate peel were higher than 3%.Conclusion In the future，the emphasis should be different in the extraction of active components from pomegranate peel and pulp.

Keywords：Puhica granatum;chlorogenic acid;total anthocyanins;total flavonoids;vitamin C