高效液相色譜法測定隱形眼鏡護(hù)理液中聚乙烯吡咯烷酮

徐萍華，張莉，韓銀，鮑嬌慧，諸丹，徐暢

（浙江省醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，杭州 310018）

聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone，簡稱為PVP）是一種非離子型高分子化合物，是N-乙烯基酰胺類聚合物中有特色且被研究得最深、最廣泛的精細(xì)化學(xué)品品種之一。PVP 作為一種合成水溶性高分子化合物，具有水溶性高分子化合物的一般性質(zhì)，如膠體保護(hù)作用、成膜性、粘結(jié)性、吸濕性、增溶或凝聚作用。但PVP 最具特色的是其優(yōu)異的溶解性能及生理相容性［1-10］，也因此倍受人們重視。PVP 不參與人體新陳代謝，又具有優(yōu)良的生物相容性，對皮膚、粘膜、眼等不形成任何刺激。PVP用于隱形眼鏡，可增加鏡片的親水性和潤滑性，這使得PVP 在隱形眼鏡護(hù)理液中得到了廣泛應(yīng)用。

GB 19192—2003 《角膜接觸鏡護(hù)理液衛(wèi)生要求》第4 條明確提出對角膜接觸鏡護(hù)理液有效成分含量檢測的技術(shù)要求［11］。聚乙烯吡咯烷酮作為隱形眼鏡護(hù)理液的有效成分之一，應(yīng)明確其實(shí)際加入的有效量，并建立有效、快捷、準(zhǔn)確的分析測定方法。

目前PVP 含量的測定方法主要有紫外分光光度法［12-14］、凝膠色譜檢測法［15-16］，但是這些方法的靈敏度不高，方法條件復(fù)雜，操作過程繁瑣，且干擾不易消除。角膜接觸鏡護(hù)理液中基體復(fù)雜，樣品的雜質(zhì)峰干擾相對嚴(yán)重，難以準(zhǔn)確定量，目前此樣品尚無有效的檢測方法。筆者采用SAX 色譜柱對隱形眼鏡護(hù)理液樣品進(jìn)行分離，在220 nm 波長處進(jìn)行PVP 的定量分析，經(jīng)過一系列方法學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證，證明該方法準(zhǔn)確、簡單、高效。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜儀：U 3000 型，美國賽默飛世爾科技公司。

紫外分光光度計(jì)：UV2550 型，日本島津儀器有限公司。

超純水機(jī)：MC24T30CN 型，出水電阻率為18.2 MΩ，默克密理博（中國）有限公司。

電子天平：ME104E 型，感量為0.1 mg，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

氯化鈉：色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

PVP 對照品：純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）不小于99.0%，美國Sigma Aldrich 公司。

角膜接觸鏡護(hù)理液樣品：市售。

1.2 儀器工作條件

檢測器：二極管陣列檢測器；色譜柱：Oligo-SAX 強(qiáng)陰離子交換柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，美國賽默飛世爾科技公司）；流動相：20 mmol／L 氯化鈉 水溶液；流量：1.0 mL／min；柱溫：30 ℃；波長：220 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。

1.3 樣品處理

根據(jù)角膜接觸鏡護(hù)理液樣品中PVP 的標(biāo)示含量，若PVP 標(biāo)示含量在0.01～0.5 mg／mL 之間，可直接進(jìn)樣；若PVP 標(biāo)示含量大于0.5 mg／mL，取適量護(hù)理液樣品，用超純水稀釋至約0.05 mg／mL，作為供試液，待測。

1.4 溶液配制

PVP 標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取PVP 對照品約0.1 g，用超純水配成1 mg／mL 的儲備液。

PVP 系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：采用逐級稀釋法，用超純水配制PVP質(zhì)量濃度分別為0.01、0.025、0.050、0.10、0.25、0.50 mg／mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器工作條件的優(yōu)化

2.1.1 色譜柱

常規(guī)檢測中，一般采用普通的C18反相色譜柱進(jìn)行物質(zhì)分離，而大分子量的樣品，采用凝膠尺寸排阻色譜進(jìn)行分離。試驗(yàn)考察了TSK—Gelα3000 型親水性凝膠色譜柱(300 mm×7.8 mm，7 μm，日本TSK 公司)和Oligo-SAX 強(qiáng)陰離子交換柱的分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用TSK—Gelα3000 型凝膠色譜柱進(jìn)行分離時，峰形拖尾嚴(yán)重且不對稱，而在Oligo-SAX 強(qiáng)陰離子交換色譜柱下，PVP 能實(shí)現(xiàn)完好的分離，且無拖尾現(xiàn)象產(chǎn)生。因此采用Oligo-SAX 強(qiáng)陰離子交換柱進(jìn)行檢測分析，可快速有效地分離PVP。

2.1.2 流動相

當(dāng)采用純水作為流動相時，色譜峰雖能分離，但出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，因此需要配制一定的緩沖溶液對PVP 進(jìn)行洗脫。試驗(yàn)采用氯化鈉溶液作為流動相，考察氯化鈉的質(zhì)量濃度分別為0、10、20、50、100 mmol／L 時對PVP 含量測定的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)溶液中氯化鈉的質(zhì)量濃度為20 mmol／L 時，拖尾現(xiàn)象消失，但隨著氯化鈉濃度的增大，PVP 的分離沒有其它變化。為了延長色譜柱的壽命，宜選用較低濃度的流動相，因此，采用20 mmol／L 氯化鈉溶液作為流動相較為適宜。

2.1.3 檢測波長

分別取PVP 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液與空白基質(zhì)溶液（按照隱形眼鏡護(hù)理液的配方，配制不含PVP 的隱形護(hù)理液作為空白基質(zhì)溶液），在波長為200～300 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示PVP 在波長220 nm 附近有較大吸收，且空白基質(zhì)溶液吸收較小，因此選擇220 nm 作為PVP 含量的檢測波長。

圖1 PVP 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液與空白基質(zhì)溶液紫外吸收圖

2.2 色譜行為

按照1.2 儀器工作條件，對0.05 mg／mL PVP標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測護(hù)理液的供試液進(jìn)行測定，色譜圖分別見圖2 和圖3。由圖2 和圖3 可知，PVP 的保留時間為0.933 min。

圖2 PVP 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

常規(guī)護(hù)理液中主要有消毒劑（如聚胺丙基雙胍等）、清潔劑（如泊洛沙姆）、螯合劑（如乙二胺四乙酸二鈉鹽）、保濕潤滑劑（羥丙基甲纖維素、透明質(zhì)酸酸鈉等）及其它緩沖鹽溶液，這些添加成分均可能對PVP 的測定產(chǎn)生影響［17-18］。按照1.2 儀器工作條件，對空白基質(zhì)溶液進(jìn)行測定（圖4），并與PVP 標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜（圖2）進(jìn)行對照，在目標(biāo)物峰位置處無明顯干擾，表明該護(hù)理液中其它成分不影響PVP 含量的測定，方法具有專屬性。

圖4 空白基質(zhì)溶液色譜圖

2.4 線性方程與檢出限

在1.2 儀器工作條件下，分別測定0.01、0.025、0.050、0.10、0.25、0.50 mg／mL 的PVP 系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以PVP 的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。以3 倍信噪比（S／N=3）對應(yīng)的濃度值作為檢出限，10 倍信噪比（S／N=10）對應(yīng)的濃度值作為定量限。PVP 的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表1。由表1 可知，PVP 的質(zhì)量濃度在0.01～0.5 mg／mL 范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 0，檢出限為0.000 3 mg／mL，定量限為0.001 mg／mL，表明該方法靈敏度較高，適于定量。

表1 PVP 的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

2.5 精密度試驗(yàn)

取適量隱形眼鏡護(hù)理液樣品，按照1.3 方法進(jìn)行處理，在1.2 儀器工作條件下進(jìn)行6 次平行測定，試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2 可知，6 次測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%，表明該方法具有較高的精密度，滿足分析要求。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取適量隱形眼鏡護(hù)理液樣品，按照1.3 方法進(jìn)行處理，在1.2 儀器工作條件下，對該溶液分別進(jìn)行隔日測定，測定6 次，試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3 可知，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%，表明該方法具有較好的重復(fù)性。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)

按照所建方法，對已測的護(hù)理液樣品進(jìn)行3 種濃度水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)，計(jì)算PVP 的回收率和平均回收率，試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 PVP 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

由表4 可知，加標(biāo)樣品中PVP 的回收率為90.1%～104%，平均回收率為98.4%，表明該法具有良好的準(zhǔn)確度。

3 結(jié)語

隱形眼鏡護(hù)理液中聚乙烯吡咯烷酮含量分析方法的建立，為生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量控制提供了有效的科學(xué)依據(jù)，為后續(xù)行業(yè)內(nèi)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)方法的制訂提供了理論基礎(chǔ)。相比較常規(guī)的凝膠色譜-示差檢測法，本方法采用強(qiáng)陰離子交換柱分離，220 nm 波長下進(jìn)行測定PVP 的含量，精密度及準(zhǔn)確度良好，分離效果更好，靈敏度更高，專屬性更強(qiáng)。