馬尾松松材線蟲(chóng)病抗性無(wú)性系的篩選和遺傳多樣性分析

高景斌，徐六一，葉建仁

(1.安徽林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 合肥 230031；2.松材線蟲(chóng)病預(yù)防與控制技術(shù)國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031；3.安徽省林業(yè)科學(xué)研究院，安徽 合肥 230031；4.南京林業(yè)大學(xué)，江蘇 南京 210037)

松材線蟲(chóng)是20世紀(jì)80年代初由境外傳入我國(guó)的一種重大的檢疫性森林病害。1982年首次報(bào)道以來(lái)，已擴(kuò)散到我國(guó)17個(gè)省721個(gè)縣級(jí)行政區(qū)[1-2]，自然感染至少16種松樹(shù)[3]，其中，馬尾松是受松材線蟲(chóng)病的危害最嚴(yán)重的樹(shù)種。安徽省是發(fā)生馬尾松松材線蟲(chóng)病重災(zāi)區(qū)之一。因松材線蟲(chóng)病流行環(huán)節(jié)多，國(guó)內(nèi)外至今無(wú)理想防治技術(shù)，松材線蟲(chóng)病抗病育種則有望成為解決松材線蟲(chóng)病發(fā)生的根本途徑[4]。馬尾松是我國(guó)重要的鄉(xiāng)土樹(shù)種，主要分布在長(zhǎng)江流域，中國(guó)的西南部地區(qū)，淮河和漢水流域以南，以及長(zhǎng)江中下游，是貧瘠山地造林重要的林木樹(shù)種，具有較好的園林觀賞價(jià)值[5]，同時(shí)也是培育抗松材線蟲(chóng)病種質(zhì)資源的重要樹(shù)種之一[6]。目前抗松材線蟲(chóng)病馬尾松培育主要有兩種方式：一種是通過(guò)在健康母樹(shù)采種，通過(guò)培育實(shí)生苗培育抗性松樹(shù)苗[6-7]，這是目前最主要的培育抗性松樹(shù)的方法；另外一種則是通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖抗性馬尾松，目前技術(shù)還在繼續(xù)完善[8]。筆者通過(guò)運(yùn)用SCAR分子標(biāo)記引物，運(yùn)用MuPS(Multiplex-PCR of SCAR markers)反應(yīng)體系技術(shù)分析安徽省馬尾松抗性候選單株種質(zhì)資源的遺傳信息，從分子水平上揭示抗性候選單株在DNA序列上的差異性，分析抗性馬尾松的遺傳特性[9-13]，測(cè)定馬尾松抗性候選單株間的親緣關(guān)系[14-18]，旨在將研究結(jié)果反饋到馬尾松抗性種子園管理中，及時(shí)調(diào)整和除去生長(zhǎng)性狀表現(xiàn)差和抗病性弱的建園無(wú)性系，指導(dǎo)抗性雜交親本選定等，提高種子園抗病子代的水平，同時(shí)為抗性無(wú)性系的資源鑒定評(píng)價(jià)和良種繁育提供一定的理論依據(jù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)抗性無(wú)性系的科學(xué)管理，為優(yōu)良抗性種子園的建立奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 參試材料來(lái)源

2000年，安徽省實(shí)施馬尾松抗松材線蟲(chóng)病育種項(xiàng)目，分別在安徽省廣德縣、潛山縣等10個(gè)縣、市的馬尾松林分中選擇具有潛在抗松材線蟲(chóng)病特征的馬尾松母樹(shù)，并按單株采種和按家系育苗，最終獲得324個(gè)自由授粉家系在圃地作進(jìn)一步的表型測(cè)定。通過(guò)2003—2004年松材線蟲(chóng)人工接種試驗(yàn)，從251個(gè)家系中初篩出1 201個(gè)對(duì)馬尾松松材線蟲(chóng)病表型較好的候選單株(每個(gè)家系選擇3～5個(gè)有抗性表型的單株)，匯集種植在安徽省林業(yè)高科技中心，建立馬尾松抗松材線蟲(chóng)病候選單株種植園。該種植園地貌系丘陵平原，土壤較肥沃，適宜多種樹(shù)木生長(zhǎng)，周邊20多公里范圍內(nèi)無(wú)馬尾松林分分布，具良好的自然隔離條件。

為檢測(cè)這批入選家系及其單株抗馬尾松松材線蟲(chóng)病的穩(wěn)定性，采用濕地松為砧木嫁接方法，將初篩單株繁殖成嫁接無(wú)性系，用于再次接種松材線蟲(chóng)和進(jìn)行抗性再評(píng)估。初選的1 201個(gè)無(wú)性系經(jīng)再次抗性評(píng)價(jià)，篩選出110個(gè)高抗性無(wú)性系(來(lái)自初篩材料中的81個(gè)家系)，分別用于馬尾松抗松材線蟲(chóng)病種子園營(yíng)建和進(jìn)一步分子標(biāo)記研究。

1.2 樣品預(yù)處理

2008年5月，以上述具較強(qiáng)松材線蟲(chóng)病抗性表型的110個(gè)無(wú)性系為試驗(yàn)材料，進(jìn)行分子標(biāo)記分析。從每個(gè)馬尾松抗性候選無(wú)性系采集2～3根發(fā)育正常的新鮮針葉裝入鎖口自封袋，記錄試驗(yàn)材料編號(hào)。帶回實(shí)驗(yàn)室后即用不銹鋼剪刀將針葉剪碎，取30 mg針葉裝入指形管置液氮中處理2 min，再在細(xì)胞破碎機(jī)中破碎，貯存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 DNA的提取純化

參照文獻(xiàn)[19-20]中制備植物基因組DNA的CTAB方法，稍作改良。采用MagExtractor (TOYOBO)提純，調(diào)整濃度后在-20 ℃冰箱中保存。

1.4 SCAR分子標(biāo)記

1.4.1 引物設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用RAPD分子標(biāo)記方法，以具有松材線蟲(chóng)病抗性表型的馬尾松無(wú)性系的基因組DNA為模板，用98對(duì)隨機(jī)引物進(jìn)行擴(kuò)增作引物的初步篩選，將部分多態(tài)性好的片段克隆、基因測(cè)序并且進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，篩選出SCAR分子標(biāo)記引物。經(jīng)過(guò)測(cè)定，其中14對(duì)引物根據(jù)SCAR分子標(biāo)記的堿基大小和序列特征，既能夠獲得較好的擴(kuò)增多態(tài)型，又避免引物間形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，將14對(duì)引物分成M1、M2兩組(表1)，各引物等比例混合后獲得終濃度為0.2 μmol/L。

表1 馬尾松遺傳多樣性研究用引物Table 1 Primers for genetic diversity of Pinus massoniana

表1(續(xù))

1.4.2 MuPS反應(yīng)

PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系(10 μL)：2 μL (40～50 ng) DNA模板，1 μL引物混合液，2 μL ddH2O和5 μL 2×Multiple PCR Master Mix (Qiagen)。上述SCAR反應(yīng)體系的混合物，經(jīng)過(guò)13 000 r/min離心5 min后置于Thermo Fisher Veriti 384型PCR儀上進(jìn)行DNA擴(kuò)增。擴(kuò)增條件如下：95 ℃預(yù)變性15 min，94 ℃變性30 s，60 ℃退火90 s，72 ℃延伸60 s，共30個(gè)循環(huán)，72 ℃完全延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上電泳20 min，制作凝膠片和電泳液中均加入1/20 000的SYBR Safe作為顯色，并在UVP-GelDoc-It2 315成像儀上觀察、拍攝擴(kuò)增圖譜。

1.5 遺傳多樣性分析

對(duì)擴(kuò)增出來(lái)的條帶進(jìn)行計(jì)數(shù)，對(duì)應(yīng)出現(xiàn)擴(kuò)增多態(tài)位點(diǎn)的用“1”標(biāo)記，沒(méi)有的用“0”標(biāo)記，形成由“0”和“1”組成的MuPS型，繪制矩陣圖并轉(zhuǎn)為數(shù)據(jù)，按照順序編寫(xiě)出各抗性候選單株的SCAR分子標(biāo)記圖[21]，統(tǒng)計(jì)每個(gè)引物擴(kuò)增出的位點(diǎn)數(shù)和多態(tài)位點(diǎn)數(shù)。應(yīng)用Popgene 32軟件分析馬尾松抗性候選無(wú)性系之間的系統(tǒng)關(guān)系[22-23]，統(tǒng)計(jì)有效等位基因數(shù)(Ne)、Shannon多樣性指數(shù)(I)、Nei’s基因多樣度(H)。

1.6 馬尾松抗松材線蟲(chóng)病候選無(wú)性系表型性狀調(diào)查

2019年12月，對(duì)本試驗(yàn)參試的110個(gè)馬尾松抗性候選無(wú)性系第18年的樹(shù)高和胸徑進(jìn)行調(diào)查，測(cè)量3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。按照平均實(shí)驗(yàn)形數(shù)法計(jì)算無(wú)性系單株材積(V)，公式為V=(h+3)g1.3fЭ。式中：h為樹(shù)高，g1.3為胸高斷面積，fЭ為平均實(shí)驗(yàn)形數(shù)，馬尾松平均實(shí)驗(yàn)形數(shù)fЭ為0.4[24]。

1.7 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)整理使用Excel 2016，采用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 引物的有效性和MuPS分型分析

2008年，試驗(yàn)隨機(jī)選取16個(gè)樣品，分兩次提取針葉DNA，使用同樣方法和相同引物組Pmscar-M1和Pmscar-M2擴(kuò)增。結(jié)果顯示，同一無(wú)性系在兩次提取的DNA經(jīng)MuPS反應(yīng)獲得相同擴(kuò)增多態(tài)性分型(圖1)。本試驗(yàn)參試的110個(gè)馬尾松無(wú)性系樣品，共獲得92個(gè)MuPS分型，MuPS分型識(shí)別率為83.63%；其中具唯一性MuPS分型碼的無(wú)性系數(shù)有79個(gè)，71.81%的無(wú)性系被完全準(zhǔn)確識(shí)別(表2)。而其余31個(gè)無(wú)性系的MuPS分型情況則較特殊，分成3種情形：其一，涉及20個(gè)無(wú)性系屬于兩兩結(jié)對(duì)形成10組，每一組的兩無(wú)性系共享一個(gè)MuPS分型碼，即兩個(gè)無(wú)性系的MuPS分型碼同型；其二，是3個(gè)無(wú)性系共享同一個(gè)MuPS分型碼；其三，是有8個(gè)無(wú)性系分為2組，每一組均有4個(gè)無(wú)性系共享一個(gè) MuPS分型。這31個(gè)無(wú)性系不能為唯一性的MuPS分型碼所識(shí)別，原因可能比較復(fù)雜。

1．休32-4； 2.休31-5； 3.和1-2-5； 4.休8-4； 5.休11-1； 6.休32-4；7.廣55-2；8.小3-5； 9.廣57-4；10.廣56-3；11.廣54-1；12.廣52-1；13.廣33-4；14.廣33-5；15.休2-4；16. 小1-5。圖1 14對(duì)引物對(duì)部分馬尾松無(wú)性系的電泳譜帶Fig.1 The electrophoretic patterns of partial clones of P. massoniana with 14 primers

表2 110個(gè)馬尾松無(wú)性系的MuPS型Table 2 The MuPS patterns of 110 clones of P. massoniana

2.2 篩選引物對(duì)參試無(wú)性系的識(shí)別率分析

通過(guò)對(duì)引物識(shí)別能力及多態(tài)位點(diǎn)出現(xiàn)率分析可見(jiàn)，本試驗(yàn)篩選的14對(duì)引物對(duì)識(shí)別率變動(dòng)為0.90%～90.00%，不同引物對(duì)于該批馬尾松無(wú)性系辯識(shí)率的差異十分顯著。其中，引物053和引物025對(duì)區(qū)分馬尾松的不同無(wú)性系有很高的辯識(shí)率，分別達(dá)到90.00%和78.18%。同時(shí)，這兩個(gè)引物檢測(cè)到的多態(tài)位點(diǎn)出現(xiàn)率也相對(duì)較高，分別為16.63%和14.45%，而引物039的識(shí)別率和多態(tài)位點(diǎn)的檢出率均最低(表3)。

表3 不同引物對(duì)馬尾松無(wú)性系的識(shí)別率和多態(tài)位點(diǎn)檢出率Table 3 The percentage of identification and polymorphic sites detected by 14 primers for 110 clones of P. massoniana %

2.3 抗松材線蟲(chóng)病候選無(wú)性系遺傳多樣性分析

利用Popgene 32軟件對(duì)參試的110個(gè)無(wú)性系中具有單一MuPS型的79個(gè)無(wú)性系進(jìn)行遺傳多樣性參數(shù)分析表明(表4)，Ne的最大值為1.998 1，最小值為1.012 8；H的最大值為0.499 5，最小值為0.012 6；I的最大值為0.692 7，最小值為0.038 5。各位點(diǎn)的Ne值均大于I值，且I值均大于H值，但這3個(gè)遺傳指標(biāo)在各位點(diǎn)的大小順序基本一致。所有位點(diǎn)的Ne為1.508 1，H為0.302 3，I為0.459 1。這3個(gè)遺傳多樣性參數(shù)均表明，雖然本試驗(yàn)經(jīng)兩輪松材線蟲(chóng)接種篩選，家系數(shù)量由251個(gè)降到81個(gè)，用于群體遺傳參數(shù)估算的初選無(wú)性系(家系內(nèi)單株)數(shù)量也由1 201個(gè)降低到79個(gè)無(wú)性系(具單一的MuPS分型)，即僅用了初選無(wú)性系中6.5%的無(wú)性系(松材線蟲(chóng)接種和自然死亡淘汰了93.5%的無(wú)性系)用于遺傳多樣性分析，結(jié)果顯示該經(jīng)松材線蟲(chóng)接種篩選后保留下來(lái)的人工群體中仍然具有相對(duì)較高的遺傳多樣性，在未來(lái)的馬尾松抗松材線蟲(chóng)病育種方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

表4 79個(gè)馬尾松抗松材線蟲(chóng)病候選無(wú)性系的遺傳多樣性分析Table 4 Analysis of genetic diversity of 79 clones of P. massoniana with phenotypic resistant to pine wilt disease

2.4 馬尾松抗性候選無(wú)性系生長(zhǎng)性狀和接種松材線蟲(chóng)后的保存率

2019年，對(duì)110個(gè)馬尾松抗性候選無(wú)性系的生長(zhǎng)和保存率調(diào)查結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析結(jié)果如表6所示。結(jié)果顯示，通過(guò)兩次松材線蟲(chóng)接種15 a后，110個(gè)馬尾松抗性候選無(wú)性系中保存下來(lái)且正常生長(zhǎng)的無(wú)性系有83個(gè)，死亡的無(wú)性系有27個(gè)，保存率為75.46%。在正常生長(zhǎng)的抗性候選無(wú)性系間的樹(shù)高生長(zhǎng)變異幅度為4.6～10.7 m，平均樹(shù)高為6.07 m；胸徑生長(zhǎng)變異幅度為6.7～21.7 cm，平均胸徑為10.63 cm；單株材積的變異幅度為0.012 3～0.189 4 m3，平均值為0.071 8 m3。參試馬尾松抗性候選無(wú)性系間的樹(shù)高、胸徑和材積生長(zhǎng)差異均達(dá)到極顯著水平，說(shuō)明保存下來(lái)的馬尾松抗性候選無(wú)性系間，在顯示對(duì)松材線蟲(chóng)病具有抗性的同時(shí)，樹(shù)高、胸徑和材積生長(zhǎng)上也存在顯著差異。其中，材積生長(zhǎng)量排在前10位的無(wú)性系分別為休3-3、休20-5、和12-5、和9-5、廣34-5、廣18-2、廣17-3、休2-4、廣54-2和廣33-5(表5)。本試驗(yàn)中生長(zhǎng)量最好的休3-3無(wú)性系的單株材積(0.189 3 m3)為材積生長(zhǎng)最低無(wú)性系廣27-2(0.012 3 m3)的15倍以上。這一結(jié)果說(shuō)明，這批資源不僅具有抗松材線蟲(chóng)病的潛在優(yōu)勢(shì)，而且還保持了較好的材積生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，是馬尾松抗松材線蟲(chóng)病育種的重要儲(chǔ)備遺傳資源。

表5 馬尾松抗松材線蟲(chóng)病候選無(wú)性系18年生樹(shù)高、胸徑和材積生長(zhǎng)情況Table 5 Tree height, DBH and single tree volume growth of 110 clones of P. massoniana with phenotypic resistant to pine wilt disease

表6 馬尾松抗松材線蟲(chóng)病候選無(wú)性系生長(zhǎng)性狀方差分析Table 6 Analysis of variance of growth traits in resistant of P. massoniana with phenotypic resistant to pine with disease

3 討 論

無(wú)論是自然選擇壓力的天然群體，還是經(jīng)歷人工選擇壓力下形成的人工群體，遺傳多樣性參數(shù)，是林木遺傳育種工作者制定育種策略，開(kāi)展林木遺傳改良的重要依據(jù)。針對(duì)種內(nèi)不同天然群體或人工群體(不管是由天然群體中選擇形成的，還是通過(guò)人工雜交創(chuàng)制人工群體)的遺傳參數(shù)、遺傳變異分布格局和變異程度，都是有效開(kāi)展某一樹(shù)種，或一個(gè)樹(shù)種中某一特殊性狀進(jìn)行改良，以及更好地開(kāi)展育種創(chuàng)新研究的重要基礎(chǔ)資訊[25]。利用分子遺傳標(biāo)記研究樹(shù)種內(nèi)群體的遺傳多樣性，在松屬樹(shù)種上得到了廣泛應(yīng)用，如云南松(P.yunnanensis)、馬尾松、黃山松(P.taiwanensis)、紅松(P.koraiensis)、油松(P.tabulaeformis)和樟子松(P.sylvestris)等[26-28]。這些松樹(shù)天然林群體分子水平遺傳變異的特點(diǎn)及其形成原因的分析，以及對(duì)種子園構(gòu)建過(guò)程中的遺傳增益的影響等研究在松屬樹(shù)種的種質(zhì)資源收集和保存、種群重建，以及進(jìn)一步遺傳改良策略的制定等方面有發(fā)揮了重要作用[29-30]。但有關(guān)馬尾松的人工選擇群體，在多次人工接種松材線蟲(chóng)的人工選擇壓力下遺傳參數(shù)的研究的報(bào)道不多。

本研究在2000年啟動(dòng)的馬尾松抗松材線蟲(chóng)病育種研究基礎(chǔ)上，從皖南、皖西和皖中地區(qū)低山丘陵馬尾松資源集中分布區(qū)林分中選擇324個(gè)優(yōu)良個(gè)體，分系采集種子育苗，最終獲得251個(gè)家系在圃地進(jìn)行生長(zhǎng)和對(duì)松材線蟲(chóng)病抗性測(cè)定。結(jié)果表明，篩選的14個(gè)SCAR標(biāo)記引物能夠較好覆蓋馬尾松基因組。其中，引物Pmscar 053和引物Pmscar 025對(duì)區(qū)分馬尾松的不同無(wú)性系有很高的辯識(shí)率，分別達(dá)到90.00%和78.18%。同時(shí)，這兩個(gè)引物檢測(cè)到的多態(tài)位點(diǎn)出現(xiàn)率也相對(duì)較高，分別為16.63%和14.45%。說(shuō)明運(yùn)用SCAR標(biāo)記的MuPS反應(yīng)技術(shù)體系，對(duì)具有抗松材線蟲(chóng)病表型的馬尾松無(wú)性系進(jìn)行識(shí)別和用于馬尾松抗性種子園的建園無(wú)性系親本的管理是可行性。

但是，在采用引物Pmscar 053和引物Pmscar 025引物進(jìn)行馬尾松抗性無(wú)性系MuPS分型還存在一些不足，如還有31個(gè)抗性無(wú)性系不能為唯一的MuPS分型所識(shí)別。分別存在2個(gè)或3個(gè)甚至是4個(gè)無(wú)性系共享同一種MuPS分型的情況。除了使用的引物數(shù)量，組成入選材料的原群體遺傳結(jié)構(gòu)(如同胞親緣關(guān)系或近交率)，也會(huì)影響分子標(biāo)記分型的識(shí)別率和不同無(wú)性系的檢出率。本研究的10組兩兩共享一個(gè)MuPS分型碼的(20個(gè))無(wú)性系中，有一組MuPS同型無(wú)性系廣62-5和廣62-3，均是從家系廣62中選出的(有半同胞親緣關(guān)系)；另有3組兩兩共享1個(gè)MuPS分型的6個(gè)無(wú)性系(廣63-2和廣61-4、廣49-3和廣27-2、廣56-3和廣52-2)，以及3個(gè)無(wú)性系(廣6-5、廣31-4和廣26-5)共享同一MuPS分型的組中的無(wú)性系均來(lái)組廣德種源區(qū)；在4個(gè)無(wú)性系共享一個(gè) MuPS分型的2組無(wú)性系中(組1為休8-4、休32-1、廣5-4和廣34-5；組2為休8-4、休32-1、廣62-2和廣3-2)，來(lái)自休寧和廣德種源區(qū)的各占一半。這些數(shù)據(jù)顯示，譜系關(guān)系或自然群體內(nèi)的近交率(或自交)引起的親緣關(guān)系改變，在使用引物較少時(shí)會(huì)導(dǎo)致遺傳多態(tài)性位點(diǎn)的檢出率和無(wú)性系分型的識(shí)別率降低。因此，無(wú)論試樣材料的群體遺傳結(jié)構(gòu)怎樣變化，適當(dāng)增加SCAR擴(kuò)增引物的數(shù)量，提高分子標(biāo)記多態(tài)性位點(diǎn)的檢出率和無(wú)性系的識(shí)別率，對(duì)于提高馬尾松抗性種子園親本的遺傳多樣性、降低種子園自(近)交率等核心技術(shù)管理水平，都是有益的。

值得指出的是，本研究揭示的馬尾松人工選擇群體在兩輪接種松材線蟲(chóng)的選擇壓力下遺傳多樣性主要參數(shù)的動(dòng)態(tài)變化信息，是具有重要參考價(jià)值。雖然由于接種松材線蟲(chóng)致死和不明原因的自然死亡等因素，初選無(wú)性系的原始群體的遺傳信息無(wú)法系統(tǒng)追蹤和進(jìn)行縱向比較。但通過(guò)報(bào)道的同類研究結(jié)果橫向比較[31-32]，可以發(fā)現(xiàn)本研究結(jié)果中蘊(yùn)含的重要信息。初選材料經(jīng)兩次松材線蟲(chóng)接種試驗(yàn)抗性篩選，家系數(shù)量由251個(gè)減少到81個(gè)，初選無(wú)性系(家系內(nèi)單株)數(shù)量也由1 201個(gè)降低到79個(gè)MuPS分型確切識(shí)別的無(wú)性系。參與遺傳多樣性分析的79個(gè)無(wú)性系僅占初選無(wú)性系的6.5%(即松材線蟲(chóng)接種和自然死亡淘汰了93.5%的初選無(wú)性系)，但其遺傳多樣性參數(shù)(Ne=1.508 1，H=0.302 3，I=0.459 1)，仍高于陳雪蓮[33]、朱必鳳等[34]和張恒慶等[35]報(bào)道的黃山松抗性候選個(gè)體、馬尾松種子園和紅松人工林群體的遺傳參數(shù)水平。這說(shuō)明，本研究從皖南、皖西和皖中馬尾松主要栽培區(qū)選擇的優(yōu)良個(gè)體培育成的家系后代群體，經(jīng)接種松材線蟲(chóng)逆境脅迫保留下來(lái)的無(wú)性系人工群體，仍然保留了相對(duì)較高的遺傳多樣性。同時(shí)，本研究在初選材料接種松材線蟲(chóng)進(jìn)行抗性篩選15年后進(jìn)行無(wú)性系生長(zhǎng)量和保存率調(diào)查表明，經(jīng)110個(gè)候選材料二次接種松材線蟲(chóng)篩選保存下來(lái)的83個(gè)無(wú)性系間，樹(shù)高、胸徑和單株材積生長(zhǎng)性狀上均達(dá)到極顯著差異水平。其中，生長(zhǎng)量最高的無(wú)性系休3-3的單株立木材積(0.189 3 m3)超過(guò)材積生長(zhǎng)最小的無(wú)性系廣27-2(0.012 3 m3)的15倍以上。結(jié)果說(shuō)明，這批經(jīng)松材線蟲(chóng)接種篩選成活下來(lái)的馬尾松無(wú)性系，不僅是抗松材線蟲(chóng)病育種的重要基因資源，而且也可能是抗松材線蟲(chóng)病和材積生長(zhǎng)兩個(gè)性狀得到聯(lián)合改良有潛力的寶貴遺傳資源，值得在馬尾松抗松材線蟲(chóng)病種質(zhì)創(chuàng)新和新品種培育中加以深入研究和開(kāi)發(fā)利用。