BUB1、Jdp2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性

李長(zhǎng)生 薛永飛 袁小筍 冀 葉 任中海

肺癌是我國(guó)發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤，其中超過(guò)80%患者為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)[1]。NSCLC早期確診率低，大部分患者于局部晚期或晚期確診而無(wú)法行手術(shù)根治，預(yù)后較差，NSCLC早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷對(duì)患者治療及預(yù)后尤為重要[2]。隨著分子生物學(xué)研究的迅速發(fā)展，癌癥研究已進(jìn)入基因組學(xué)時(shí)代，了解癌癥基因變化從而輔助診斷癌癥、聯(lián)合臨床病理學(xué)參數(shù)評(píng)估預(yù)后成為癌癥研究熱點(diǎn)[3]。近年臨床發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞分裂周期中紡錘體檢查點(diǎn)功能缺陷會(huì)引起細(xì)胞染色體不穩(wěn)定和非整倍體傳代，引起細(xì)胞惡變，這是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞存在的主要原因之一。苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白-1(budding uninhibited by benzimidazoles-1，BUB1)是紡錘體檢測(cè)點(diǎn)蛋白，通過(guò)調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為參與多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展[4-5]。此外，還有研究[6]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄活化因子(AP-1)家族成員的Jun二聚化蛋白2(jun dimerization protein 2，Jdp2)，可與原癌基因Fos、活化轉(zhuǎn)錄因子ATF形成Jun-Jun、Jun-Fos和Jun-ATF 二聚體，形成的二聚體是AP-1抑制蛋白，參與細(xì)胞分化、衰老、凋亡等過(guò)程，抑制癌基因活性，在多種腫瘤細(xì)胞中均呈低表達(dá)。基于此，本研究分析BUB1、Jdp2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)水平及其與臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性，探討二者在NSCLC中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年6月至2017年6月于我院經(jīng)外科手術(shù)切除且經(jīng)病理證實(shí)的72例NSCLC癌組織標(biāo)本和相匹配的癌旁組織(腫瘤邊緣>5 cm的組織)標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)術(shù)后病理確診為NSCLC；首次NSCLC確診；術(shù)前未接受放化療、靶向藥物治療等抗癌治療；臨床資料完整；對(duì)研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤或存在NSCLC遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；標(biāo)本采集困難或不正確；合并嚴(yán)重心腦血管疾病等危急重癥；術(shù)后3年失訪；術(shù)前存在全身性炎癥反應(yīng)。72例患者中男性46例，女性26例，年齡42～80歲，平均(63.27±7.31)歲；體質(zhì)量指數(shù)19～26 kg/m2，平均(21.59±2.32)kg/m2；腫瘤直徑≤3 cm 32例、>3 cm 40例；腫瘤TNM分期[7]：Ⅰ期24例、Ⅱ期21例、Ⅲ期27例；分化程度：低分化28例、中分化24例、高分化20例；病理類(lèi)型：腺癌46例、鱗癌26例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例。

1.2 方法

1.2.1 基線資料收集 收集患者臨床資料，統(tǒng)計(jì)患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤直徑、腫瘤TNM分期、分化程度、病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及隨訪3年生存情況，隨訪截止至2020年6月。

1.2.2 組織取材 患者均接受手術(shù)治療，手術(shù)切除NSCLC腫瘤組織和距腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁正常肺組織，腫瘤組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，確診NSCLC。癌組織與癌旁組織均以10%中性甲醛固定，進(jìn)行常規(guī)酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋處理，制成2 μm的層厚切片，置于組織漂烘儀的水槽中展平，載玻片撈片，放入60 ℃電熱恒溫烤箱中烤片1 h，固定組織切片。

1.2.3 BUB1、Jdp2表達(dá)檢測(cè)及結(jié)果判讀 (1)采用免疫組化法檢測(cè)BUB1、Jdp2在癌組織及癌旁組織中的表達(dá)，操作步驟包括：脫蠟、脫水、高壓抗原熱修復(fù)、滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶、加入一抗、加入二抗、二氨基聯(lián)苯胺顯色、蘇木精復(fù)染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封片；封片后晾干鏡檢，觀察BUB1、Jdp2蛋白表達(dá)。(2)結(jié)果判讀由資深病理科醫(yī)師進(jìn)行，蛋白表達(dá)判定標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞核中出現(xiàn)黃染為陽(yáng)性染色，各切片于光學(xué)顯微鏡下(×400)選取5個(gè)不同視野，每個(gè)視野至少含100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比(BUB1：≤5%計(jì)0分，>5%～25%計(jì)1分，>25%～75%計(jì)2分，>75%計(jì)3分；Jdp2：≤5%計(jì)0分，>5%～25%計(jì)1分，>25%～50%計(jì)2分，>50%計(jì)3分)和染色程度(無(wú)染色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，黃色至棕黃色計(jì)2分，棕褐色至褐色計(jì)3分)分別評(píng)分，BUB1蛋白表達(dá)將兩種評(píng)分相加獲得結(jié)果，Jdp2蛋白表達(dá)將兩種評(píng)分相乘獲得評(píng)分結(jié)果，均以<2分為陰性(-)，≥2分為陽(yáng)性(+)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較癌組織、癌旁組織中BUB1、Jdp2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率；比較BUB1、Jdp2蛋白陽(yáng)性表達(dá)和陰性表達(dá)患者的一般資料。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 BUB1、Jdp2蛋白在癌組織、癌旁組織中表達(dá)情況

BUB1蛋白在癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織(P<0.05)；Jdp2蛋白在癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁組織(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 BUB1、Jdp2蛋白在癌組織、癌旁組織中的表達(dá)情況(例，%)

2.2 BUB1、Jdp2蛋白表達(dá)情況與NSCLC患者臨床病理參數(shù)關(guān)系

BUB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與患者的臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；Jdp2蛋白陽(yáng)性表達(dá)與患者的腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 BUB1、Jdp2蛋白表達(dá)情況與NSCLC患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后的關(guān)系(例，%)

2.3 BUB1、Jdp2蛋白表達(dá)情況與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

隨訪3年，NSCLC生存患者BUB1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于死亡患者，Jdp2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率高于死亡患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 BUB1、Jdp2蛋白表達(dá)情況與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系(例，%)

2.4 BUB1、Jdp2蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，BUB1蛋白表達(dá)上調(diào)與NSCLC臨床分期等級(jí)、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)(γ=0.286、0.427、0.368，P均<0.05)，與預(yù)后生存負(fù)相關(guān)γ=-0.296，P<0.05)；Jdp2蛋白表達(dá)上調(diào)與NSCLC腫瘤直徑、臨床分期等級(jí)、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移負(fù)相關(guān)(γ=-0.725、-0.509、-0.355、-0.317，P均<0.05)，與預(yù)后生存正相關(guān)(γ=0.294，P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 BUB1、Jdp2蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性

3 討論

癌癥的發(fā)生是多基因、多步驟、多階段的過(guò)程，涉及不同的基因及不同的變化形式，基因變化與基因間的信號(hào)傳遞均能夠?yàn)榘┌Y治療提供具有敏感性的信息，從分子水平上分析腫瘤基因變化，能夠輔助癌癥治療及預(yù)后判斷，甚至更能為新的治療靶點(diǎn)提供方向，具有重要意義[8]。隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，腫瘤基因組學(xué)數(shù)據(jù)測(cè)序工程的完成，使得臨床提高了對(duì)癌癥的分子特征認(rèn)知，中晚期NSCLC治療策略已由基于組織病理學(xué)的化療轉(zhuǎn)向基于致癌因素的個(gè)體化精準(zhǔn)治療，也迫切需要癌癥基因變化及癌癥基因表達(dá)的相關(guān)蛋白變化信息，指導(dǎo)臨床、評(píng)估預(yù)后[9]。

BUB1蛋白是紡錘體檢查點(diǎn)蛋白，在細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中能夠調(diào)控細(xì)胞有絲分裂的激活和監(jiān)控，保證染色體的正常分離。當(dāng)有絲分裂檢查點(diǎn)功能缺陷時(shí)染色體異常分離形成非整倍體，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，這是腫瘤的本質(zhì)特征之一[10]。此外，BUB1還能夠監(jiān)控有絲分裂過(guò)程中微管與著絲點(diǎn)的結(jié)合、免疫細(xì)胞腫瘤內(nèi)浸潤(rùn)，影響機(jī)體微環(huán)境和血管的生成[11]；目前臨床研究已證實(shí)BUB1通過(guò)多種分子生物學(xué)機(jī)制參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，與前列腺癌、胃癌、乳腺癌等多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[12-14]，但目前在其N(xiāo)SCLC中的作用尚不明確。Jdp2蛋白則是通過(guò)SOS 募集系統(tǒng)從AP-1的Jun亞基分離出來(lái)的蛋白，是AP-1的抑制物，可調(diào)控相應(yīng)區(qū)域組蛋白轉(zhuǎn)錄、修飾、結(jié)合和激活的過(guò)程，具有抑制c-Jun、c-Fos、ATF等癌基因活性的作用[15]。有研究指出[16]，抑癌基因Jdp2能夠抑制肝細(xì)胞癌，與患者臨床病理特征存在潛在聯(lián)系，可作為評(píng)估肝細(xì)胞癌預(yù)后的良好指標(biāo)。陳蕾等[17]研究指出，Jdp2在NSCLC中呈低表達(dá)，與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后均有關(guān)。但目前關(guān)于Jdp2在NSCLC中的應(yīng)用價(jià)值報(bào)道較少，值得臨床關(guān)注?；贐UB1、Jdp2表達(dá)變化在NSCLC中的應(yīng)用現(xiàn)狀，本研究分析二者表達(dá)水平與NSCLC患者病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，以期能夠輔助NSCLC臨床診療及預(yù)后評(píng)估。本研究回顧性分析72例NSCLC患者癌組織、癌旁組織中BUBI、Jdp2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在癌組織中BUB1高表達(dá)、Jdp2低表達(dá)，在癌旁組織中的表達(dá)則相反，且NSCLC患者中BUB1、Jdp2表達(dá)情況不同的患者在臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移資料及預(yù)后存在明顯差異，Jdp2表達(dá)不同的患者在腫瘤直徑上也存在明顯差異，表明BUB1、Jdp2均參與了NSCLC的發(fā)生與發(fā)展，且與臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)。進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)性分析，顯示BUB1蛋白表達(dá)上調(diào)與NSCLC臨床分期等級(jí)、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，與預(yù)后生存負(fù)相關(guān)；Jdp2蛋白表達(dá)上調(diào)與NSCLC腫瘤直徑、臨床分期等級(jí)、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移負(fù)相關(guān)，與預(yù)后生存正相關(guān)，說(shuō)明BUB1蛋白表達(dá)上調(diào)、Jdp2蛋白表達(dá)下調(diào)均預(yù)示NSCLC患者腫瘤細(xì)胞迅速增殖，腫瘤惡性程度增加，提高了腫瘤臨床分期、分化程度，同時(shí)促進(jìn)了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，不利于患者預(yù)后，與彭鳳翔等[18]研究結(jié)果、潘峰[19]研究結(jié)果一致。本研究雖表明BUB1蛋白、Jdp2蛋白可作為NSCLC病情及預(yù)后評(píng)估的檢測(cè)指標(biāo)，但僅采用免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析，對(duì)二者在NSCLC中高表達(dá)和低表達(dá)的具體機(jī)制尚不清楚，有待后續(xù)展開(kāi)深入研究。

綜上所述，經(jīng)免疫組化檢測(cè)證實(shí)BUB1、Jdp2蛋白在NSCLC癌組織中對(duì)應(yīng)呈現(xiàn)高表達(dá)和低表達(dá)，二者表達(dá)情況與患者腫瘤直徑(僅Jsp2)、臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，可作為NSCLC的檢測(cè)指標(biāo)用于指導(dǎo)臨床治療。