茯苓多糖的提取、結(jié)構(gòu)及藥理作用研究進展

王悅 田雙雙 劉曉謙 張永欣 閆利華 王智民

摘要 茯苓是我國傳統(tǒng)藥食兩用中藥材，具有利水滲濕、健脾、寧心的功效。茯苓多糖是其主要活性成分之一，具有抗腫瘤、抗炎、保肝、調(diào)節(jié)機體免疫力等藥理作用，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥及保健品等領(lǐng)域。本文對茯苓多糖的提取、分離純化、降解、結(jié)構(gòu)表征、結(jié)構(gòu)修飾及其藥理作用進行總結(jié)，為茯苓多糖的進一步研究和開發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞 茯苓;多糖;提取分離;降解;結(jié)構(gòu)分析;結(jié)構(gòu)修飾;藥理作用

Research Progress on Extraction，Structures and Pharmacological Activities of Poria Cocos Polysaccharides

WANG Yue1，2，TIAN Shuangshuang2，LIU Xiaoqian2，ZHANG Yongxin2，YAN Lihua2，WANG Zhimin2

（1 Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 301617，China; 2 National Engineering Laboratory for Quality Control Technology of Chinese Materia Medica， Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China）

Abstract Poria cocos is a traditional Chinese medicinal material for food and medicine，with the effects of promoting diuresis，eliminating dampness，enhancing spleen and calming heart.Polysaccharides are one of its main active components of poria cocos，which have a variety of pharmacological activities，such as anti-tumor，anti-inflammatory，liver protection，and regulating body immunity.Therefore，poria cocos polysaccharides have been widely used in food，medicine，health products and other fields.This paper summarizes the extraction，separation，purification，degradation，structural characterization，structural modification and pharmacological effects of Poria cocos polysaccharides，and offers references to the further research，development and utilization of Poria cocos polysaccharides.

Keywords Poria cocos（Schw.） Wolf; Polysaccharides; Extraction and separation; Degradation; Structural characterization; Structural modification; Pharmacological effects

中圖分類號：R282;R284;R285文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.17.006

茯苓是多孔菌科茯苓屬真菌茯苓Poria cocos（Schw.） Wolf的干燥菌核，作為藥物始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，具有利水滲濕、健脾、寧心的功效，用于水腫尿少，痰飲眩悸，脾虛食少，便溏泄瀉等[1]。多糖為茯苓的主要化學(xué)成分之一，根據(jù)提取方式的不同，茯苓多糖可分為水溶性多糖和堿溶性多糖，其中水溶性多糖的含量為0.7%～2.6%[2]，堿溶性多糖的含量高達70%～90%[3-4]。茯苓多糖的生物活性與其結(jié)構(gòu)特征密切相關(guān)，由于茯苓堿溶性多糖不易溶于水，在臨床水煎使用時無法充分提取，造成極大的浪費。近年來，隨著學(xué)科交叉以及新的分析儀器和分析方法的發(fā)展，茯苓多糖的分離純化及其衍生物的藥理活性等相關(guān)研究，吸引了眾多國內(nèi)外科研工作者的興趣。本文查閱、分析了有關(guān)茯苓的文獻報道，對茯苓多糖的提取、分離純化、降解、結(jié)構(gòu)表征、結(jié)構(gòu)修飾及藥理活性進行歸納總結(jié)，為茯苓多糖的進一步研究及其相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 茯苓多糖的提取

茯苓多糖主要來源于茯苓的子實體、菌絲以及發(fā)酵液中，不同部位的多糖含量不同，根據(jù)提取部位的不同可將其分為胞外多糖和胞內(nèi)多糖，經(jīng)液體發(fā)酵得到的多糖稱為胞外多糖，子實體和菌絲體中的多糖稱為胞內(nèi)多糖[5]。

1.1 胞外多糖的提取 廖彥[6]采用單因素考察優(yōu)化搖瓶發(fā)酵條件，最優(yōu)發(fā)酵條件為：碳源為葡萄糖，氮源為酵母浸粉，金屬離子為MnSO4、CuSO4、MgSO4、FeSO4、ZnSO4，輔助因子為2-硫代巴比妥，初始pH值為5.0，以上述最優(yōu)條件為基礎(chǔ)放大研究，發(fā)酵至第11天時，多糖產(chǎn)量為1.58 g/L。李羿等[7]通過比較不同種類初始培養(yǎng)基的發(fā)酵罐補料液體發(fā)酵，考察出最適初始培養(yǎng)基以及最佳發(fā)酵時間，實驗結(jié)果顯示最佳條件為：采用復(fù)合藥性培養(yǎng)基發(fā)酵124 h，在此條件下胞外多糖產(chǎn)量為8.47 g/L。

1.2 胞內(nèi)多糖的提取

1.2.1 傳統(tǒng)水提取法 由于多糖極性大且多數(shù)易溶于水，一般可采用水提法對其進行提取，該法具有成本低，操作簡單的優(yōu)點。何麗芳等[8]對茯苓藥材粒徑及攪拌方式進行了考察，以粗多糖得率、相對分子質(zhì)量及單糖組成作為考察指標，運用單因素考察得出：提取溫度應(yīng)小于70 ℃，料液比應(yīng)在1∶7.5～1∶15（g/mL）之間，提取時間2 h，提取2次，藥材過20目篩，攪拌更有利于多糖的提取，此時粗多糖得率為0.285%。實驗發(fā)現(xiàn)提取溫度、次數(shù)以及攪拌方式對茯苓多糖的提取有較明顯的影響。方毅等[9]通過單因素考察以及L9（34）正交試驗優(yōu)化提取工藝，得出茯苓水溶性多糖的最優(yōu)提取條件為：藥材粉碎過60目篩、料液比1∶10（g/mL），提取時間100 min，提取1次，平均提取率為0.339%。韓勇和宋金玉[10]采用單因素考察及響應(yīng)面法優(yōu)化茯苓菌絲體多糖的提取：料液比1∶20（g/mL），pH值為7.1，提取溫度66 ℃，提取時間31 min，在上述條件下多糖的提取率為3.36%。傳統(tǒng)水提取法耗時久且提取率低，并且長時間的高溫加熱提取可能會破壞多糖的結(jié)構(gòu)，該方法現(xiàn)已逐漸被其他提取方法所取代。

1.2.2 超聲輔助提取法 超聲提取是利用超聲波高頻振蕩產(chǎn)生的空化效應(yīng)破壞植物細胞的細胞壁，從而加快多糖的溶出，提高提取率。Chen等[11]運用正交矩陣設(shè)計（Orthogonal Array Design，OAD）比較超聲提取與傳統(tǒng)水提取的總多糖提取率，發(fā)現(xiàn)超聲提取可以顯著縮短提取時間;最佳提取工藝為提取時間75 min，藥材粒度70目，提取溫度90 ℃，在此條件下，提取率為1.38%。葉丹等[12]用超聲輔助法提取茯苓皮總多糖，通過單因素實驗和正交試驗得出最佳提取條件為：料液比1∶25（g/mL），溫度45 ℃，超聲功率100 W，超聲時間10 min，在此條件下茯苓皮多糖提取率為3.373%。劉穎等[13]采用正交試驗設(shè)計超聲輔助熱水提取法，得出茯苓多糖提取最佳條件為超聲時間30 min，液料比1∶50（g/mL），提取溫度100 ℃，提取時間4 h，經(jīng)驗證多糖得率均值為5.30%。

1.2.3 酶輔助提取法 酶輔助熱水浸提法可以有效縮短提取時間并提高提取率。酶提法是使用相應(yīng)的酶破壞植物細胞壁，使胞內(nèi)多糖充分溶出。該法提取條件溫和，不易破壞多糖結(jié)構(gòu)。陳莉和郁建平[14]將茯苓粉碎加水浸泡30 min，加入植物復(fù)合酶（纖維素酶、中性蛋白酶、果膠酶等）在48 ℃、pH值為5.0條件下浸提90 min，中和后升溫至80 ℃提取90 min，結(jié)果表明該提取法可以縮短近一半的浸提時間，多糖提取率是熱水浸提法的2.32倍。肖云[15]通過單因素考察及正交試驗得出復(fù)合酶結(jié)合超聲輔助的最佳提取條件為：木瓜蛋白酶1.0%，果膠酶1.5%，纖維素酶1.5%;超聲波功率360 W，料液比1∶50（g/mL），溫度50 ℃，提取時間50 min，在該方法下多糖提取率為3.72%。

1.2.4 微波提取法 微波提取法是根據(jù)細胞中不同物質(zhì)在微波場中吸收微波能力的不同，細胞內(nèi)分子被選擇性加熱升溫，從而破壞細胞膜及細胞壁，提高多糖的溶出率。該方法具有顯著縮短提取時間，節(jié)能環(huán)保的特點。葉振梅[16]采用單因素及響應(yīng)面法設(shè)計實驗優(yōu)化最佳提取工藝條件：微波功率471.3 W，提取時間8.5 min，醇沉?xí)r乙醇濃度82.3%，液料比1∶19.9（g/mL），優(yōu)化條件下多糖提取率為2.96%。

1.2.5 超臨界流體萃取法 超臨界流體萃取法是利用溫度和壓力的改變對流體在臨界點溶解能力的影響，從而將物質(zhì)進行提取、分離純化，具有操作簡便、產(chǎn)物安全無污染、提取速度快、提取率高等優(yōu)點。段麗麗等[17]采用單因素及響應(yīng)面法設(shè)計實驗確定最佳提取工藝條件：萃取溫度50 ℃，萃取壓力21.78 MPa，夾帶劑乙醇濃度83.19%，在此條件下，多糖萃取量為3.104%。該方法提取所得多糖無色素及脂類物質(zhì)，僅有少量蛋白存在，純度較高。

1.2.6 堿水提取法 上述提取方法均采用水或者乙醇為溶劑，茯苓多糖的得率在0.285%～5.30%。茯苓多糖中堿溶性多糖占80%以上，運用堿提法提取茯苓多糖可得到較高提取率。李曉潔等[18]采用單因素和響應(yīng)面試驗，得到最佳提取條件為：料液比1∶50（g/mL），NaOH濃度0.6 mol/L，堿提時間1 h，茯苓酸性多糖的提取率可以達到78.5%。Wang等[19]利用響應(yīng)面法設(shè)計超聲輔助堿提取實驗，得出最佳提取條件為超聲輔助提取2.44 min，NaOH濃度0.789 mol/L，料液比1∶53，在此條件下多糖得率為82.3%。使用堿提法要注意：強堿和高溫條件下都會破壞多糖的結(jié)構(gòu)，可能會導(dǎo)致多糖糖苷鍵斷裂從而降低提取率。

2 茯苓多糖的分離純化

2.1 多糖提取液除雜 經(jīng)過上述方法所提取得到的茯苓粗多糖中往往含有單糖、色素、蛋白質(zhì)、無機鹽等雜質(zhì)，會影響后續(xù)的活性研究及結(jié)構(gòu)鑒定。除雜純化方法主要包括過氧化氫法脫色;Sevag法、離子交換樹脂法、三氟乙酸法等除蛋白;透析法除鹽等[20]。在除雜過程中，注意反應(yīng)不要過于劇烈，選擇合適的方法保證茯苓多糖的結(jié)構(gòu)不被破壞。

2.2 多糖的分離 多糖的分離過程較為復(fù)雜，大多數(shù)多糖提取物僅為粗多糖，多糖的分離純化是分析多糖的重要前提，得到分子量均一且極性均一的多糖對于其后續(xù)研究至關(guān)重要。茯苓多糖的分離方法主要包括分級沉淀法、柱色譜分離法及膜分離法等。連賓和郁建平[21]用Sephadex G-15葡聚糖凝膠柱色譜法洗脫，洗脫液經(jīng)不同濃度的乙醇沉淀得到3個組分Pc-1、Pc-2、Pc-3。林標聲等[22]從茯苓菌株發(fā)酵液提取茯苓多糖，采用DEAE-32纖維素層析柱分離得到PD，用Sephadex G-200進一步分離得到PG。胡康等[23]采用DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換樹脂分離和Superdex-75系列凝膠純化后得到PPSW-1。Zhang等[24]用DEAE-52纖維素色譜法分離得到PCWPW和PCWPS。

3 茯苓多糖的結(jié)構(gòu)表征

3.1 茯苓多糖的相對分子質(zhì)量測定 相對分子質(zhì)量的大小及分布對多糖的理化性質(zhì)及生物活性有密切的影響。多糖的純度可以根據(jù)多糖分子量的分布，測定重均相對分子質(zhì)量及數(shù)均相對分子質(zhì)量來間接反映，可作為多糖質(zhì)量控制的指標，因此多糖相對分子質(zhì)量的測定極其重要[20]。目前對茯苓多糖相對分子質(zhì)量的測定主要采用高效體積排阻色譜法（HPSEC）、高效凝膠過濾色譜法（HPGPC）、凝膠滲透色譜法（GPC）等。劉穎等[25]采用高效體積排阻色譜聯(lián)用多角度激光散射檢測器及示差折光檢測器分析茯苓水溶性粗多糖分子量及其分布，結(jié)果顯示：多糖相對分子質(zhì)量分布在6.144×104～4.671×106，分子量分布寬度（Mw/Mn）為1.475～1.538。顏軍等[26]通過高效凝膠過濾色譜法測定茯苓中性多糖（TAP 1）及酸性多糖（TAP 2）的分子量分別為11 721和44 065。盧華杰[27]采用凝膠滲透色譜法測定不同堿濃度下提取的茯苓酸性多糖，結(jié)果顯示：酸性多糖分子量分布在3×105～13×105，并且發(fā)現(xiàn)提取所用堿濃度越高得到的多糖分子量越大。

3.2 茯苓多糖的結(jié)構(gòu)分析 根據(jù)單糖組成不同可將茯苓多糖分為2類：一類是β-茯苓聚糖（β-Pachyman），主要是由含少量（1→6）和（1→2）支鏈的β-（1→3）-D-葡聚糖構(gòu)成，也是茯苓多糖的主要成分;另一類是以葡萄糖為主，可能含有木糖、巖藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖等單糖所組成的雜多糖[28]。目前對于茯苓多糖的研究尚停留在多糖的相對分子質(zhì)量、單糖組成、摩爾比及鏈接順序等簡單結(jié)構(gòu)信息，對于茯苓多糖的高級結(jié)構(gòu)研究還處在起步階段。主要的分析方法包括采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS），氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）測定多糖的單糖組成及含量;甲基化后進行GC-MS測定明確糖苷鍵的連接方式及單糖連接順序。高級結(jié)構(gòu)的研究包括紅外光譜法及磁共振成像法確定官能團及糖構(gòu)型等信息，二維磁共振成像法與剛果紅法確定是否含有三螺旋結(jié)構(gòu)，以及掃描電子顯微鏡、原子力顯微鏡明晰顯微結(jié)構(gòu)等[29-30]。到目前為止，已從茯苓中分離出56種多糖，名稱、相對分子質(zhì)量、單糖組成及結(jié)構(gòu)特征見表1。

4 茯苓多糖的降解

茯苓多糖制備方法較為簡單，但其相對分子質(zhì)量較大，人體腸道無法有效地吸收利用大分子多糖，極大地阻礙了其發(fā)揮生物活性，研究合適的方法降解茯苓多糖，是進一步研究茯苓多糖生物活性的關(guān)鍵。

4.1 酸降解法 酸降解是利用酸性條件下多糖分子的糖苷鍵水解而造成糖鏈斷裂，采用不同濃度的酸對茯苓多糖進行水解，可得到不同分子量的衍生物。使用烏氏黏度計測量降解產(chǎn)物的黏度，運用體積排阻色譜法測定茯苓多糖的分子量，結(jié)果顯示酸濃度及水解溫度是影響多糖降解的兩大主要因素，可以控制這2個條件得到一定分子量范圍的茯苓多糖。以4 mol/L的硫酸加熱水解，茯苓多糖分子量可以下降到1萬以下，具有很好的水溶性[49]。

4.2 輻照降解法 輻照降解法[50]是利用γ射線以及電子束穿透物質(zhì)時，與多糖類物質(zhì)作用，所攜帶的能量被多糖物質(zhì)所吸收，從而使糖苷鍵斷裂得到低分子量的產(chǎn)物。該法具有無污染、易操控等優(yōu)點。采用不同劑量的60Co輻射茯苓原料，采用掃描電鏡、水溶性多糖含量檢測、紫外光譜、紅外光譜等方法分析其降解效應(yīng)，結(jié)果顯示：輻射后，茯苓微觀結(jié)構(gòu)上顆粒變小、形狀不規(guī)則，輻射劑量增大時，水溶性總糖及水溶性茯苓多糖含量隨之增加。紫外、紅外光譜顯示，經(jīng)此方法可將茯苓多糖有效裂解成為以羰基類化合物為主且分子量較小的物質(zhì)[51]。

4.3 電Fenton降解法 電Fenton降解法通過電化學(xué)作用，利用強氧化性將多糖降解為低分子量化合物。將濃度為200 mg/mL的大分子量茯苓多糖溶液置于設(shè)有陰、陽極的電解槽中，調(diào)節(jié)溶液為酸性，每升多糖溶液向陰極通入7.2 L氧氣，通入直流電并控制陰極電流密度為14 mA/cm2，在此條件下進行降解，收集電解液，將電解液用1 mol/L的氫氧化鈉溶液中和后，用截留分子量10～50 kDa的超濾膜超濾，收集濃縮液，冷凍干燥，可得平均分子量為32.1 kDa的茯苓多糖[52]。

4.4 酶降解法 酶降解法可以使用專一酶斷裂特定的糖苷鍵，或采用非專一酶對多糖進行降解，具有高效、反應(yīng)條件溫和，無副產(chǎn)物生成等優(yōu)點。王在貴等[53]以還原糖釋放率為指標對木聚糖酶、纖維素酶和β-葡聚糖酶降解茯苓多糖的能力進行考察，降解能力為：β-葡聚糖酶>纖維素酶>木聚糖酶。采用混合酶降解多糖，不僅沒有提高其降解能力，纖維素酶還可能對β-葡聚糖酶起拮抗作用。β-葡聚糖酶的最佳降解條件為：溫度37 ℃，pH值為6.0，反應(yīng)時間45 min，在此條件下還原糖釋放量約為1.1 mg。李悅等[54]運用蝸牛酶降解茯苓多糖，通過單因素考察以及正交試驗，優(yōu)選茯苓多糖降解條件為：pH值為6.0，加酶率1.8%，固液比1∶20，酶解溫度40 ℃，酶解時間5 h，在此條件下茯苓多糖的降解率可達到40.2%。

5 茯苓多糖的結(jié)構(gòu)修飾

茯苓堿溶性多糖含量雖高達70%～90%，但因其溶解性差，無法被人體吸收利用，極大地限制了其開發(fā)利用。對茯苓堿溶性多糖進行結(jié)構(gòu)修飾可以增加其溶解度，提高其生物活性，從而提高生物利用率。目前對于茯苓多糖的衍生化以硫酸化和羧甲基化為主，此外還有磷酸化等。

5.1 硫酸化 陳群[55]分別采用氯磺酸和氨基磺酸作為硫酸化試劑制備茯苓硫酸多糖PS-Ⅰ、PS-Ⅱ及PS-Ⅲ，并分析各硫酸多糖的取代度及取代位置。結(jié)果顯示：PS-Ⅰ取代度為2.80，全部自由羥基均被硫酸酯化;PS-Ⅱ取代度為1.55，全部C-6羥基均被取代;PS-Ⅲ取代度為0.95，部分C-2和C-4羥基發(fā)生酯化反應(yīng)。韋英益等[56]采用氯磺酸-吡啶法進行硫酸酯化，以取代度為指標優(yōu)化反應(yīng)條件。最佳條件為：反應(yīng)時間5 h，反應(yīng)溫度50 ℃，氯磺酸與吡啶摩爾比1∶2，在此條件下，取代度為0.98。陳小紅[57]采用氨基磺酸法對茯苓堿溶性多糖進行硫酸酯化結(jié)構(gòu)修飾，以硫酸基團取代度為響應(yīng)值，運用單因素實驗及響應(yīng)面法優(yōu)化制備條件，得出硫酸酯化的最佳工藝為：反應(yīng)溫度85 ℃，反應(yīng)時間4 h，氨基磺酸與多糖質(zhì)量之比為3.77∶1，在此條件下，硫酸基團的取代度為1.041。修飾后的多糖表現(xiàn)出較好的凝血作用，與未經(jīng)修飾的多糖比較，全凝血時間、出血時間、全凝血時間延長率均有提高。

5.2 羧甲基化 宋波等[58]將干燥后的茯苓堿溶性多糖在異丙醇-氫氧化鈉溶液中進行堿化，用氯乙酸醚化，通過醇沉得到粗羧甲基茯苓多糖（Carboxymethytl Pachyma，CMP），采用MTT法檢測對比茯苓堿溶性多糖（PPS）與CMP對人肝癌細胞HepG-2的毒性反應(yīng)。結(jié)果顯示：經(jīng)PPS處理過的細胞，成活率均大于80%;而經(jīng)CMP作用48 h后，IC50值為210.2 μg/mL，與PPS對比，CMP的細胞毒性更大。舒暢等[59]以CMP為底物，以檸檬酸三鈉為催化劑，在堿性條件下與FeCl3反應(yīng)制得羧甲基化茯苓多糖鐵復(fù)合物（CMPIC）。運用單因素實驗以及響應(yīng)面法優(yōu)化CMPIC的合成條件，得出最佳反應(yīng)條件為：pH值為8.3，反應(yīng)溫度72.9 ℃，檸檬酸三鈉與羧甲基茯苓多糖的質(zhì)量比為0.69。FRAP法測定CMPIC的抗氧化能力發(fā)現(xiàn)：濃度為10 mg/mL時清除率達到最大為45.33%;CMPIC對金屬離子及ABTS+自由基具有一定的清除能力。劉汶星等[60]采用水媒一步法制備羧甲基茯苓多糖，將茯苓堿溶性多糖的提取及多糖的醚化合為一步;該法所制得的CMP口服安全性較高。

5.3 磷酸化 Huang和Zhang[61]采用磷酸作為磷酸化試劑，將分級提取得到的9個組分的茯苓堿溶性多糖進行磷酸化，將多糖溶于含尿素的氯化鋰或二甲亞砜溶液中，加入磷酸后100 ℃下進行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，透析凍干后得到不同分子量的磷酸化衍生物。根據(jù)構(gòu)象參數(shù)可知：磷酸化后的衍生物水溶性和鋼鏈度增加;磷酸化的衍生物對S180腫瘤細胞表現(xiàn)出較強的體內(nèi)和體外抗腫瘤活性，分子量在5×104～50×104范圍內(nèi)更有利于增強多糖的抗腫瘤活性。

6 茯苓多糖的藥理作用

6.1 抗腫瘤作用 研究表明，多糖的分子量及其鏈結(jié)構(gòu)對抗腫瘤活性有一定的影響，而β-（1→3）D-葡聚糖的三重螺旋構(gòu)象和位于螺旋外表面的親水基團，具有很重要的抗腫瘤及免疫增強活性[62]。早年，有學(xué)者認為茯苓多糖無抗腫瘤作用，將其用高碘酸氧化并進行Smith降解后，發(fā)現(xiàn)有明顯的抗腫瘤作用[63]。茯苓多糖具有抗腫瘤活性可能是由于其對腫瘤細胞的毒性，也可能是其能增強免疫力從而抑制腫瘤的生長[64]。陳春霞[65]以25～500 mg/kg的劑量向ICR/JCL小鼠腹腔注射CMP注射液，結(jié)果顯示對腫瘤U-14的抑制作用較為顯著，抑制率為75.5%～92.7%;按5～50 mg/kg、25～100 mg/kg的劑量向昆明種小鼠靜脈注射CMP注射液，結(jié)果顯示對S-180肉瘤、肝癌H22瘤細胞有一定的抑制作用，抑制率分別為34.8%～61.0%、20.1%～36.7%;體外實驗表明0.25%～0.5%的CMP對小鼠艾氏腹水癌的瘤細胞抑制作用較強，抑制率為20.1%～36.7%。王燦紅等[66]建立小鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型，探究CMP對腸癌小鼠的生命延長作用及對環(huán)磷酰胺（Cyclophosphamide，CTX）的減毒作用。結(jié)果顯示，CMP可以調(diào)節(jié)腫瘤免疫相關(guān)蛋白的表達并明顯延長腸癌小鼠的生存周期，最高可達24.59%，具有一定的量效關(guān)系;并可明顯抑制CTX引起的免疫及造血功能異常，減輕CTX的不良反應(yīng)。劉曉菲等[67]采用MTT法測定CMP44對人結(jié)腸癌細胞HT-29、人肝癌細胞HepG-2、人胃癌細胞SGC-7901、人乳腺癌細胞MCF-7以及人肺癌細胞A549增殖的抑制率，IC50值分別為140.5、264.3、102.5、256.4、313.2 μg/mL。該多糖對脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的小鼠巨噬細胞RAW 264.7有一定的抑制作用，但在無LPS刺激的條件下對該細胞具有一定的激活效果。

6.2 抗炎作用 侯安繼等[68]建立二甲苯所致小鼠急性炎癥和無菌棉球所致大鼠慢性炎癥模型，結(jié)果表明小劑量的茯苓多糖可以明顯抑制二甲苯所致小鼠耳腫，但在大劑量下會增強小鼠耳腫;茯苓多糖對棉球所致大鼠皮下肉芽腫生成有一定的抑制作用，實驗初步證明茯苓多糖可以抑制急、慢性炎癥反應(yīng)。石振國等[69]探究茯苓多糖對急性胰腺炎（Acute Pancreatitis，AP）大鼠腸道屏障功能損傷和炎癥反應(yīng)的作用，結(jié)果表明，與模型組比較，低、中、高劑量組的茯苓多糖均可減少AP大鼠的腹水量，降低血清淀粉酶和脂肪酶含量;增加小腸黏膜厚度和絨毛高度，減少上皮損傷;降低TNF-α，IL-1β和IL-6水平;抑制JAK2，STAT3的磷酸化;以上作用均呈劑量依賴性。茯苓多糖可緩解AP大鼠腸道屏障和炎癥反應(yīng)等病理損傷可能與抑制JAK2/STAT3通路有關(guān)。

6.3 保肝作用 劉成等[70]以異硫氰酸-α-萘酯（ANIT）建立大鼠黃疸模型，分別以低、中、高劑量（5、50、500 mg/kg）對大鼠連續(xù)腹腔注射茯苓多糖1周，結(jié)果顯示茯苓多糖改善黃疸大鼠肝功能呈劑量依賴性，高劑量組退黃作用最為顯著。程玥等[71]建立四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型，研究茯苓多糖對肝損傷的保護作用，以低、中、高劑量組（10、20、40 mg/kg）連續(xù)灌胃2周后腹腔注射0.5%四氯化碳溶液誘發(fā)小鼠急性肝損傷，結(jié)果表明，與模型組比較，各劑量組均可顯著降低小鼠血清ALT、AST水平以及小鼠肝組織中MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α水平，顯著升高SOD活性，均呈劑量依賴性，高劑量組接近陽性藥作用。提示茯苓多糖可能是通過抑制機體氧化應(yīng)激，降低炎癥介質(zhì)的釋放，從而保護肝損傷。

6.4 對免疫功能的作用 茯苓多糖可以增強機體的免疫功能，增強細胞免疫和體液免疫，抗胸腺萎縮、抗脾臟增大[72-73];不能對抗環(huán)磷酰胺所致的大鼠白細胞數(shù)減少，但用藥后可以提升白細胞的回升速度，在一定程度上加快機體造血功能的恢復(fù)[74]。羧甲基茯苓多糖同時具有非特異免疫增強功能和特異免疫增強功能，可以增強荷瘤小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能，促進小鼠脾抗體分泌細胞數(shù)及其特異抗原結(jié)合細胞數(shù)，明顯加快脾T細胞生長，這些可能是羧甲基茯苓多糖能夠增強荷瘤小鼠免疫應(yīng)答功能的機制[65]。王慧蓮等[75]探究茯苓多糖對系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）患者外周血輔助性T細胞17（Th 17）和調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）的影響及免疫調(diào)節(jié)作用機制。結(jié)果顯示，與對照組比較，SLE患者的Th 17細胞比例顯著增加，Treg細胞比例明顯下降。經(jīng)100 μg/L的茯苓多糖處理后的SLE患者CD4+T細胞，與空白組比較，IL-17和IL-6的含量明顯下降，IL-10和TGF-β的含量明顯上升，RORγt的mRNA和蛋白表達顯著下降，F(xiàn)oxp3的mRNA和蛋白表達明顯增加;Th 17/Treg的比值降低。說明茯苓多糖可以通過降低Th 17并增加Treg的比例，對SLE患者起到一定的治療作用。

6.5 其他作用 相關(guān)研究表明，茯苓多糖還具有一定的抗抑郁、抑菌、降血糖等功效。陳可琢等[76]以慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)模式構(gòu)建抑郁模型大鼠，分別以低、中、高劑量（0.1、0.3、0.5 g/kg）連續(xù)灌胃給予茯苓酸性多糖14 d，結(jié)果表明不同劑量組均有一定的抗抑郁作用，作用機制可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)和NLRP3炎癥小體信號通路有關(guān)。別蒙等[77]研究不同取代度CMP的抑菌效果，結(jié)果顯示，CMP對食源性致病菌的抑制能力隨著取代度的增大而增強，且對革蘭陽性菌的抑菌能力高于革蘭陰性菌。黃聰亮等[78]采用高糖高脂飼料和小劑量鏈脲佐菌素方式誘導(dǎo)構(gòu)建2型糖尿病小鼠模型，分別以低、中、高劑量（50、100、200 mg/kg）連續(xù)灌胃給予茯苓水溶性粗多糖4周，結(jié)果表明茯苓水溶性粗多糖具有一定的降血糖功效，同時能夠一定程度上改善糖尿病引起的脂代謝紊亂。

7 結(jié)語與展望

中藥多糖是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的大分子化合物，是中藥湯劑的主要水溶性活性物質(zhì)。茯苓作為傳統(tǒng)中藥，素有“十方九苓”之稱，而茯苓多糖作為茯苓的主要活性成分之一，具有抗腫瘤、抗炎、保肝、調(diào)節(jié)免疫功能等藥理活性，具有廣闊的開發(fā)利用前景。但茯苓多糖大部分是難溶于水的堿溶性多糖，對其進行結(jié)構(gòu)修飾以獲得水溶性更好、生物活性更高的多糖是國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點。茯苓多糖的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系是目前的研究難點之一，體內(nèi)代謝過程及其作用機制有待于進一步的研究。將生物修飾與化學(xué)修飾相結(jié)合，可能對于闡明茯苓多糖的構(gòu)效關(guān)系，為開發(fā)茯苓多糖的新藥物與生物材料提供基礎(chǔ)[27]。目前茯苓多糖研究主要停留在一級結(jié)構(gòu)，對于高級結(jié)構(gòu)及其結(jié)構(gòu)與功效關(guān)系的研究僅處在初級階段。在茯苓多糖的質(zhì)量控制方面，沒有形成科學(xué)完善的檢測體系。今后研究的重點應(yīng)加強對茯苓多糖的基礎(chǔ)研究，探索高級結(jié)構(gòu)的解析技術(shù)，明確其構(gòu)效關(guān)系并加大產(chǎn)品開發(fā)力度，從而提升茯苓多糖的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用價值。

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（2021-08-06收稿 責(zé)任編輯：王明）