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    PCR技術(shù)在食品 微生物檢測中的應(yīng)用

    2021-09-27 00:58:34李亞男
    中國食品 2021年17期
    關(guān)鍵詞:致病菌引物食品

    李亞男

    隨著生活水平的不斷提升,人們?cè)絹碓疥P(guān)注食品安全問題,因?yàn)槭称钒踩珕栴}與人們的健康息息相關(guān),一旦食品存在質(zhì)量問題就可能導(dǎo)致疾病傳播,并造成社會(huì)恐慌。為了全力保障食品安全,諸多食品檢測技術(shù)得到利用,其中的PCR技術(shù)就是先進(jìn)的食品微生物檢測技術(shù)之一,操作便捷,準(zhǔn)確性高,可以有效檢測食品中的微生物。本文從PCR技術(shù)在食品微生物檢測中的應(yīng)用類型入手,介紹了PCR技術(shù)的特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì),并分析了如何在食品微生物檢測中利用PCR技術(shù),希望對(duì)相關(guān)研究有所幫助。

    一、PCR技術(shù)在食品

    微生物檢測中的應(yīng)用類型

    PCR也被稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),結(jié)合了生物體DNA復(fù)制技術(shù),20世紀(jì)80年代,美國利用并迅速發(fā)展該技術(shù),能夠促進(jìn)特定生物體外的特定DNA序列擴(kuò)增。

    PCR技術(shù)包括變性階段、退火階段和延伸階段,在變性階段打開DNA雙鏈;在退火階段將DNA單鏈和特性異物結(jié)合;在延伸階段將DNA單鏈作為模板,并在DNA聚合酶的影響下合成DNA。利用PCR技術(shù)可以獲取大量的DNA分子,然后對(duì)DNA進(jìn)行分析,通過檢測DNA序列及其豐度可以確定微生物的種類和數(shù)量,其中少量微生物可以利用PCR技術(shù)進(jìn)行檢測。目前,PCR技術(shù)廣泛用于核酸檢測領(lǐng)域,相較于傳統(tǒng)的克隆技術(shù)來說是巨大的突破。

    1.基礎(chǔ)PCR技術(shù)。改革開放以來我國食品行業(yè)迅速發(fā)展,食品生產(chǎn)企業(yè)的數(shù)量逐年增加,但是部分企業(yè)受經(jīng)濟(jì)、設(shè)備等條件的限制,在生產(chǎn)和加工食品的過程中未能做好微生物檢測工作,導(dǎo)致部分問題產(chǎn)品流入市場。如今,越來越多的食品生產(chǎn)企業(yè)利用PCR技術(shù)對(duì)食品中的多數(shù)微生物進(jìn)行檢測,有相關(guān)人員利用PCR技術(shù)進(jìn)行沙門氏菌基因檢測,檢出率高達(dá)99%,從而有效預(yù)防微生物污染,保障食品質(zhì)量安全。

    2.多重PCR技術(shù)。借助PCR多重檢測技術(shù)能夠簡化操作流程,對(duì)多種基因進(jìn)行檢測,有相關(guān)人員對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌進(jìn)行檢測,證實(shí)可行性較高。相較于基礎(chǔ)PCR技術(shù),多重PCR技術(shù)的綜合性更強(qiáng),增加了更多元素和檢測環(huán)節(jié),也就是說除了具有基礎(chǔ)檢測技術(shù)的優(yōu)勢(shì),還可以在此基礎(chǔ)上一次性地檢測多種微生物。不過,多重PCR技術(shù)也存在敏感度不高、檢測效率低的缺陷。

    3.RT-PCR檢測技術(shù)。這是一種更為高端的檢測技術(shù),可以對(duì)食品中絕大多數(shù)的微生物進(jìn)行檢測,并且檢測靈敏性更強(qiáng),可以鑒別微生物的種類,區(qū)分微生物的特征。

    4.熒光PCR技術(shù)。對(duì)不同類別的熒光分子染色處理,動(dòng)態(tài)化檢測基因標(biāo)榜,分析微生物的特異性,結(jié)合病原體類別選擇與其相匹配的熒光劑,可以短時(shí)間判斷不同的病原體。

    二、PCR技術(shù)在食品

    微生物檢測中的特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)

    傳統(tǒng)的食品微生物檢測主要是培養(yǎng)致病菌,這一過程耗時(shí)長,操作流程繁瑣,需要投入大量的人力和物力,加之不同微生物生長所需的溫度和pH值存在差異,這就要求檢測人員仔細(xì)觀察革蘭氏染色狀況和細(xì)胞特征。而PCR技術(shù)可以快速獲取檢測結(jié)果,并且準(zhǔn)確性更高。

    1.操作更便捷。傳統(tǒng)的食品檢測技術(shù)耗時(shí)長,檢測結(jié)果不準(zhǔn)確,整體工作效率偏低,而PCR技術(shù)只需要一名檢測人員即可完成工作,能夠縮短檢測步驟,有效提升檢測速度,并且操作更加便捷。

    2.檢測結(jié)果快。以往對(duì)食品中的微生物進(jìn)行檢測時(shí),一般菌種需要將近兩天時(shí)間才能得到檢測報(bào)告,具有明顯的滯后性,食品已經(jīng)流入市場,但檢測結(jié)果尚未生成,所以失去了檢測的意義。而PCR技術(shù)可在幾小時(shí)到一天的時(shí)間內(nèi)得到檢測結(jié)果,有利于指導(dǎo)食品生產(chǎn),保障消費(fèi)者利益。

    3.準(zhǔn)確性更高。食品微生物的種類繁多,不同微生物的檢測方法存在差異,以往的微生物檢測技術(shù)難以區(qū)分微生物種類,而PCR技術(shù)可以憑借其自動(dòng)化的優(yōu)勢(shì)來識(shí)別微生物種類,因此成為把控食品質(zhì)量的重要技術(shù)之一。

    三、PCR技術(shù)在食品

    微生物檢測中的操作要點(diǎn)

    1.引物設(shè)計(jì)。引物質(zhì)量決定了PCR擴(kuò)張?zhí)禺愋再|(zhì)量,并且擴(kuò)征微生物特異性會(huì)隨PCR引物效果的改善進(jìn)一步提升,讓檢測過程更加簡化。此外,被檢測對(duì)象的背景分析也決定了引物設(shè)計(jì)的準(zhǔn)確性,進(jìn)而分析遺傳背景。

    2.模板制備。PCR技術(shù)具有可靠性,可以準(zhǔn)確測量目標(biāo)分子,要求在檢測食品的過程中對(duì)PCR抑制因子加以分析,并且移除DNA蛋白,這可以讓提取過程更加高效。因此,模板制備十分關(guān)鍵。

    四、PCR技術(shù)在食品

    微生物檢測中的應(yīng)用范圍

    1.食品致病菌檢測。傳統(tǒng)的食品致病菌檢測方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力,需要經(jīng)過富集培養(yǎng)、分離培養(yǎng)血清、鑒定形態(tài)特征、觀察等不同環(huán)節(jié),整個(gè)流程需要5天時(shí)間,而利用PCR技術(shù)可在一天時(shí)間完成以上全部流程。在食品致病菌檢測過程中,PCR技術(shù)可以檢測0.1mg的DNA中序列數(shù)量,還能更加深入地檢測殘留的rDNA。具體來說,利用離心沉淀和濾膜過濾的方法可以獲取細(xì)胞細(xì)菌,通過細(xì)胞裂解處理可將DNA釋放,然后利用電泳法,也就是使用特異性核酸探針分析DNA擴(kuò)增序列數(shù)量。比如在分析金黃色葡萄球菌的過程中,利用PCR技術(shù)和基因探針可以進(jìn)一步提升檢測質(zhì)量。

    2.食品非致病菌檢測。在食品非致病菌檢測期間,PCR技術(shù)主要是對(duì)乳酸菌進(jìn)行檢測。乳酸菌在自然界中的分布非常廣泛,具有極大的化學(xué)價(jià)值和生物價(jià)值。絕大多數(shù)乳酸菌對(duì)人體有益,并且可在真空環(huán)境下生存,因此在部分真空包裝食品中加入乳酸菌可以減少食物腐敗,延長食物的保質(zhì)期。

    五、如何在食品

    微生物檢測中利用PCR技術(shù)

    1.在大腸桿菌檢測中的利用。由于大腸桿菌主要存在糞便當(dāng)中,所以人們普遍認(rèn)為大腸桿菌是人體的腸道桿菌類型,但是它對(duì)人體卻有致命的危害。大量實(shí)踐發(fā)現(xiàn),大腸桿菌包括致病菌和不致病菌兩種類型,其中致病菌可導(dǎo)致腸道出血。利用PCR檢測技術(shù)能夠提取樣品的基因組,再借助特異引物擴(kuò)增DNA分子得到DNA片段,之后進(jìn)行測序,既可判斷微生物的種類和數(shù)量,也能夠鑒別大腸桿菌的類型。

    2.在沙門氏菌檢測中的利用。與大腸桿菌類似,沙門氏菌也是一種腸道桿菌,主要危害哺乳動(dòng)物,并且感染性強(qiáng),一旦進(jìn)入人體即可導(dǎo)致食物中毒。利用PCR技術(shù)可以比對(duì)DNA序列,推算金黃色葡萄球菌的數(shù)量,檢測準(zhǔn)確率極高。

    3.在綠膿桿菌檢測中的利用。綠膿桿菌可在人體產(chǎn)生外毒素,利用PCR技術(shù)可以檢測外毒素基因,分析食品中是否含有該物質(zhì)。以綠膿桿菌中存在的外毒素a基因?yàn)槔@種基因結(jié)構(gòu)目前十分明確,加入特性引物之后可以擴(kuò)增DNA,進(jìn)而分析食物樣品中是否含有綠膿桿菌,檢測效率很有保障。

    綜上所述,當(dāng)前我國PCR技術(shù)仍處于發(fā)展時(shí)期,在食品微生物檢測方面的應(yīng)用將會(huì)越來越廣泛,這就要求檢測人員根據(jù)實(shí)際需求選擇相關(guān)技術(shù),以此保障食品安全,打造良好的市場環(huán)境。

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