沙棘與2 種易混淆品的鑒別

雷 蕾，譚 鵬，文永盛，羅 霄，代 琪，張 繼，楊小艷*

（1.成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中藥材質(zhì)量監(jiān)測評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都610045； 2.四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，國家中醫(yī)藥管理局中藥質(zhì)量生物評價重點(diǎn)研究室，四川 成都610041；3.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050）

沙棘為蒙古族、藏族習(xí)用藥材，是胡頹子科植物沙棘Hippophae rhamnoidesL.的干燥成熟果實(shí)，有活血散瘀、止咳祛痰、健脾消食的功效，臨床治療脾虛食少、食積腹痛、胸痹心痛等癥［1］。沙棘主要含有黃酮類［2?3］、有機(jī)酸類及酚類［4?6］、三萜和 甾體類［7?8］、油和脂肪酸類［9?10］及維生素［11?12］等成分，具有抗氧化［13?14］、抗心肌缺血［15?16］、降血糖［17?18］、增強(qiáng)免疫力［19?20］和保護(hù)肝臟［21?22］等藥理作用。沙棘是國家衛(wèi)健委公布的第一批藥食兩用中藥材之一，目前已被開發(fā)成保健食品［23?24］和飲料［25?26］。

目前，國內(nèi)外對沙棘的質(zhì)量評控方法主要有DNA 條形碼［30］、超高壓液相色譜飛行時間質(zhì)譜儀［33］、高分辨質(zhì)譜法［31，34］、紅外光譜法［32］等。課題組通過對國內(nèi)主要藥材市場調(diào)研發(fā)現(xiàn)，有2 種沙棘的易混淆品被當(dāng)做沙棘正品在藥材市場流通，尤其是南方地區(qū)藥材市場的藥材商販對其真?zhèn)坞y以區(qū)分。經(jīng)初步鑒定，這2 種沙棘的易混淆品為蒺藜科白刺屬植物不同種的果實(shí)。本實(shí)驗(yàn)嘗試采用傳統(tǒng)性狀鑒別、顯微鑒別、TLC 和HPLC 相結(jié)合的方法區(qū)分沙棘及其易混淆品，找出相應(yīng)的鑒別要點(diǎn)，以期為沙棘及其易混淆品的鑒別研究提供參考。

1 材料

Nikon D810 照相機(jī)、Nikon Eclipse 50i 型實(shí)體顯微鏡及數(shù)碼成像系統(tǒng)［尼康（中國）有限公司］；ATS 4 全自動點(diǎn)樣儀、TLC Visualizer 薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)（瑞士Camag 公司）；Waters 高效液相色譜儀（美國Waters 公司，配置Waters e2695 Separations Module、2998 PDA 檢測器）。

乙腈（色譜純，美國Fisher 公司）；水合氯醛（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（廣東光華科技股份有限公司）；磷酸（廣東光華科技股份有限公司）；其他試劑均為分析純；水為超純水。

沙棘對照品（批號121519?201302）購自中國食品藥品檢定研究院。6 批沙棘收集于新疆、西藏和青海等地；2 種沙棘的易混淆品共4 批，收集于四川省成都市；1 批白刺收集于甘肅民勤縣，以上樣品均由中國食品藥品檢定研究院原中藥標(biāo)本館張繼主任中藥師鑒定，藥材標(biāo)本現(xiàn)保存于成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院中藥標(biāo)本館，信息見表1。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別 觀察樣品外觀性狀、形態(tài)特征，具體見圖1，結(jié)果見表2。

圖1 沙棘及其混淆品性狀

表2 沙棘與其混淆品性狀鑒別特征比較

2.1.1 沙棘 表面橙黃色或棕紅色，皺縮，頂端有殘存花柱，基部具短小果梗或果梗痕，果肉油潤，質(zhì)柔軟；種子斜卵形，長約4 mm，寬約2 mm；表面褐色，有光澤，中間有一縱溝；氣微，味酸、澀。

2.1.2 沙棘易混淆品1 表面橙黃色或棕褐色，皺縮，呈類球形或扁球形，單個直徑5～8 mm；基部無短小果?；蚬：?，質(zhì)柔軟；果核狹卵形，長5～6 mm，上有數(shù)十個蜂窩狀凹陷，先端漸尖，有3 條雙線形裂縫，約占果核長度1／3；果肉微甜，微香。

2.1.3 沙棘易混淆品2 較沙棘易混淆品1 稍大，表面黑褐色，有光澤；果核狹卵形，長6～8 mm，直徑3～4 mm，蜂窩狀凹陷較淺；果肉微酸甜，微香。

2.1.4 白刺 表面橙黃色或棕褐色，皺縮，呈類球形或扁球形，單個直徑5～8 mm；基部無短小果?；蚬：?，質(zhì)柔軟；果核狹卵形，長5～6 mm，上有數(shù)十個蜂窩狀凹陷，先端漸尖，有3 條雙線形裂縫，約占果核長度1／3；果肉微甜，微香。

2.2 顯微鑒別 選取沙棘與其易混淆品，粉碎后過4 號篩，取粉末加水合氯醛試液，置Nikon Eclipse 50i 型實(shí)體顯微鏡下觀察、拍照，結(jié)果見表3。

表3 沙棘、沙棘混淆品與白刺顯微鑒別特征比較

2.2.1 沙棘 粉末呈紅棕色；果皮表皮細(xì)胞表面觀多角形，垂周壁稍厚；表皮上盾狀毛較多，由多個單細(xì)胞毛毗連而成，末端分離，毛脫落后的疤痕由7～8 個圓形細(xì)胞聚集而成，細(xì)胞壁稍厚，鮮黃色油滴甚多，結(jié)果見圖2。

2.2.2 沙棘混淆品1 粉末棕褐色，外果皮細(xì)胞多角形，內(nèi)含色素及顆粒狀物質(zhì)；具非腺毛，單細(xì)胞，表面具疣狀突起可見不等式氣孔及草酸鈣結(jié)晶，結(jié)果見圖3。

圖3 沙棘混淆品1 的粉末顯微特征（×40）

2.2.3 沙棘混淆品2 粉末棕褐色，外果皮細(xì)胞多角形，內(nèi)含紫紅色色素及顆粒狀物；非腺毛，單細(xì)胞，表面具疣狀突起；可見不等式氣孔及草酸鈣晶體，結(jié)果見圖4。

圖4 沙棘混淆品2 的粉末顯微特征（×40）

2.2.4 白刺 粉末棕褐色，外果皮細(xì)胞多角形，內(nèi)含橙紅色色素；非腺毛，單細(xì)胞表面具疣狀突起?？梢姴坏仁綒饪准安菟徕}晶體，結(jié)果見圖5。

圖5 白刺粉末的顯微特征（×40）

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液制備 取沙棘藥材HP01、HP03、HP05，沙棘易混淆品WP01?1，沙棘易混淆品WP02?1 粉末（過3 號篩）各0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL乙醇，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，置具塞錐形瓶中，加鹽酸3.5 mL，在75 ℃水浴中加熱水解1 h，立即冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL 量瓶中，用適量乙醇洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 對照品溶液制備 取沙棘對照品0.5 g，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備對照品溶液。另取白刺N(yùn)I01，同法制成藥材溶液。

2.3.3 檢測 含3%醋酸鈉溶液制備的硅膠G 薄層板，展開劑甲苯?乙酸乙酯?甲酸（5 ∶2 ∶1），顯色劑5%三氯化鋁試液，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果見圖6。

圖6 沙棘及其易混淆品薄層鑒別圖

由此可知，沙棘易混淆品、白刺顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，與沙棘存在部分相同顏色的熒光斑點(diǎn)，主要集中在薄層板的上端，提示三者可能存在部分共有的化學(xué)成分；但在薄層板下端，前兩者都與沙棘存在明顯的差異斑點(diǎn)，可作為真?zhèn)螀^(qū)分鑒別要點(diǎn)。另外，圖中虛線框內(nèi)部分提示2種易混淆品、白刺與沙棘之間存在化學(xué)成分的差異。

2.4 HPLC 鑒別

2.4.1 色譜條件 Sunfire C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相乙腈（A）?0.2%磷酸（B），梯度洗脫（0～8 min，17% A；8～18 min，17%～20% A；18～35 min，20%～40%A；35～40 min，40%～17%A；40～45 min，17%A）；體積流量1.0 mL／min；檢測波長260 nm；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.4.2 供試品溶液制備 取沙棘對照品HF07，沙棘藥材HF01、HF03，沙棘混淆品WP01?1、WP02?1 粉末及白刺粉末NI01（過2 號篩）各2 g，加70%甲醇回流1 h，冷卻至室溫，濾過，蒸干，70%甲醇溶解定容至10 mL，搖勻，用0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取供試品溶液各10 μL，在“2.4.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果見圖7。

圖7 沙棘藥材及其混淆品HPLC 色譜圖

由此可知，沙棘與2 種易混淆品在0～25 min 前色譜峰相似，提示這3 者可能存在部分共有的化學(xué)成分；但在25～38 min 之間，沙棘與其易混淆品色譜峰有顯著差異，可作為真?zhèn)舞b別要點(diǎn)。另外，圖中虛線框內(nèi)部分提示2 種易混淆品與沙棘之間存在化學(xué)成分的差異。

3 討論與結(jié)論

沙棘的2 種易混淆品果核狹卵形，上有多個蜂窩狀凹陷，先端漸尖，有3 條雙線形裂縫等特征，與《中國植物志》 中收載的白刺屬植物果實(shí)性狀描述基本相符［27］。通過與收集的白刺果實(shí)標(biāo)本進(jìn)行比對，進(jìn)一步確證了鑒定結(jié)果，同時通過實(shí)驗(yàn)研究顯示2 種易混淆品顯微鑒別與白刺顯微特征基本一致，薄層色譜與白刺斑點(diǎn)基本一致，兩者液相色譜基本一致，認(rèn)為2 種混淆品是白刺屬植物果實(shí)。在研究中還發(fā)現(xiàn)2 種易混淆品在性狀特征、顯微鑒別、薄層色譜斑點(diǎn)和液相色譜峰上存在些許差異，提示2 種易混淆品雖同為蒺藜科白刺屬植物果實(shí)，但可能分屬不同的種，具體化學(xué)成分差異還有待進(jìn)一步研究。白刺屬是蒺藜科下的一個小屬，白刺屬有11 個種，分布于亞洲、歐洲、非洲和澳大利亞；我國有帕米爾白刺、毛瓣白刺、大白刺、小果白刺、泡泡刺和白刺6 種。主要分布于西北各省，生于鹽漬化沙，是沙區(qū)為優(yōu)良固沙植物［27］。本實(shí)驗(yàn)未對2 種易混淆品進(jìn)行品種鑒定，待今后收集到所有的樣品，再進(jìn)行這6 個種的鑒定研究。

黃酮類成分是沙棘的主要活性成分［2?3］，而白刺屬植物果實(shí)存在類似成分［28］，課題組在TLC 和HPLC 鑒別研究中得到證實(shí)，TLC 中混淆品中的部分斑點(diǎn)對沙棘樣品存在干擾，在HPLC 鑒別研究中，選取了原兒茶酸、蘆丁、鞣花酸、水仙苷、槲皮素和異鼠李素6 種組分作為對照品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6 種成分均存在于沙棘和其混淆品中，而且兩者諸多色譜峰的相同保留時間均有重合，也表明兩者所含成分有相似之處。本實(shí)驗(yàn)計(jì)劃進(jìn)一步收集沙棘與其混淆品同屬相關(guān)基源品種的樣品進(jìn)行研究，確認(rèn)兩者之間的具體成分差異，補(bǔ)充完善沙棘專屬性化學(xué)鑒別方法。