基于線粒體凋亡通路探究益氣活血方對(duì)肝纖維化模型大鼠的干預(yù)效果

王立業(yè) 孟萍

〔摘要〕 目的 探究益氣活血方對(duì)肝纖維化模型大鼠的干預(yù)效果及相關(guān)作用機(jī)制。方法 選取27只SD健康雄性大鼠，其中9只為正常組，其余18只建立肝纖維化模型，并隨機(jī)分為模型組、益氣活血方組，每組9只，益氣活血方組大鼠使用4 mL益氣活血方灌胃干預(yù)，正常組、模型組大鼠使用4 mL生理鹽水灌胃干預(yù)，各組大鼠均連續(xù)干預(yù)8周。計(jì)算各組大鼠肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)、肝纖維化程度評(píng)分，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能指標(biāo)[天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）]、肝纖維化指標(biāo)[透明質(zhì)酸酶（HA）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、層粘連蛋白（LN）]水平，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)炎癥因子[白介素-3（IL-3）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α））]、氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)[過氧化氫酶（CAT）、晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP）]水平，Western blot法檢測(cè)TGF-β/Smads通路蛋白及線粒體凋亡通路蛋白相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果 與正常組比較，其他兩組大鼠肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)較高;與模型組比較，益氣活血方組大鼠肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)、肝纖維化程度評(píng)分較低（P<0.05）。與正常組比較，其他兩組大鼠AST、ALT、HA、PCⅢ、LN、IL-3、TNF-α、AOPP水平較高，CAT水平較低;與模型組比較，益氣活血方組大鼠AST、ALT、HA、PCⅢ、LN、IL-3、TNF-α、AOPP水平較低，CAT水平較高（P<0.05）。與正常組比較，其他兩組大鼠Smad3、Smad2、TGF-β1、Bcl-2相對(duì)表達(dá)量較高，Bax、Caspase-3相對(duì)表達(dá)量較低;與模型組比較，益氣活血方組大鼠Smad3、Smad2、TGF-β1、Bcl-2相對(duì)表達(dá)量較低，Bax、Caspase-3相對(duì)表達(dá)量較高（P<0.05）。結(jié)論 使用益氣活血方對(duì)肝纖維化模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，改善大鼠肝功能，減輕肝纖維化程度及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)，其作用機(jī)制可能為益氣活血方干預(yù)能夠調(diào)控TGF-β/Smads通路及線粒體凋亡通路蛋白表達(dá)，從而起到肝臟保護(hù)作用。

〔關(guān)鍵詞〕 肝纖維化;益氣活血方;線粒體凋亡通路;肝功能;氧化應(yīng)激

〔中圖分類號(hào)〕R256.4? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.09.005

To Explore the Intervention Effect of Yiqi Huoxue Formula on Liver Fibrosis

Model Rats Based on Mitochondrial Apoptosis Pathway

Wang Liye， MENG Ping

（Shijiazhuang Hospital of Traditional Chinese Medicine， Shijiazhuang， Hebei 050051， China）

〔Abstract〕 Objective To explore the intervention effect and related mechanism of Yiqi Huoxue Formula on liver fibrosis model rats. Methods 27 SD healthy male rats were selected， 9 of which were in the normal group， and the remaining 18 were established to model liver fibrosis， and were randomly divided into model group， Yiqi Huoxue Formula group， 9 rats in each group. Rats in Yiqi Huoxue Formula group were given 4 mL Yiqi Huoxue Granule intragastric intervention， while rats in normal group and model group were given 4 mL normal saline intragastric intervention， rats in each group were continuously intervened for 8 weeks. The scores of liver and spleen coefficient and liver fibrosis degree were calculated. The levels of liver function indexes [aspartate aminotransferase （AST）， alanine aminotransferase （ALT）] and liver fibrosis indexes [hyaluronidase （HA）， procollagen type Ⅲ （PCⅢ）， laminin （LN）] were detected by automatic biochemical analyzer. The levels of inflammatory factors [interleukin （IL-3）， tumor necrosis factor-alpha （TNF-α）] and oxidative stress indexes [catalase （CAT）， advanced oxidation protein products （AOPP）] were detected by ELISA. The relative expression levels of TGF-β/Smads pathway protein and mitochondrial apoptosis pathway protein were detected by Western blot. Results Compared with normal group， liver coefficient and spleen coefficient of the other two groups were higher. Compared with model group， liver coefficient， spleen coefficient and liver fibrosis degree score of rats in Yiqi Huoxue Formula group were lower （P<0.05）. Compared with the normal group， the levels of AST， ALT， HA， PCⅢ， LN， IL-3， TNF-α and AOPP in the other two groups were higher， and the level of CAT was lower. Compared with model group， the levels of AST， ALT， HA， PCⅢ， LN， IL-3， TNF-α and AOPP in Yiqi Huoxue Formula group were lower， and the level of CAT was higher （P<0.05）. Compared with the normal group， the relative expression levels of Smad3， Smad2， TGF-β1 and Bcl-2 were higher in the other two groups， while the relative expression levels of Bax and Caspase-3 were lower in the other two groups. Compared with model group， the relative expression levels of Smad3， Smad2， TGF-β1 and Bcl-2 in Yiqi Huoxue Formula group were lower， while the relative expression levels of Bax and Caspase-3 were higher （P<0.05）. Conclusion Yiqi Huoxue Formula was used to intervent liver fibrosis model rats can improve the rat liver function， reduce the degree of liver fibrosis and inflammation， oxidative stress， its mechanism may be that Yiqi Huoxue Formula intervention can control TGF-β/Smads pathway and mitochondrial apoptosis protein expression， thereby playing a protective role in liver.

〔Keywords〕 hepatic fibrosis; Yiqi Huoxue Formula; mitochondrial apoptotic pathway; liver function; oxidative stress

肝纖維化并不是獨(dú)立的疾病種類，而是一種較為復(fù)雜的生理病理過程[1-2]。研究[3]表示，機(jī)體肝臟組織受到損傷后修復(fù)過程中均會(huì)伴有肝纖維化過程，但是若肝損傷未能短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)，肝纖維化現(xiàn)象持續(xù)存在，可能會(huì)進(jìn)一步惡化，發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重威脅患者身體健康和預(yù)后。臨床常用的治療肝纖維化的手段為針對(duì)原發(fā)病的治療以及針對(duì)肝纖維化的治療，但效果不能使人滿意。研究[4]表示，中醫(yī)藥在肝纖維化的治療過程中具有一定的優(yōu)勢(shì)，益氣活血方為我國(guó)著名肝病專家南月敏教授所創(chuàng)方劑，有學(xué)者在研究中將益氣活血方應(yīng)用于肝纖維化的治療[5]，但是關(guān)于益氣活血方治療肝纖維化的機(jī)制尚不明確。本研究使用益氣活血方干預(yù)肝纖維化大鼠，旨在探究益氣活血方對(duì)肝纖維化的干預(yù)效果及作用機(jī)制。

1 材料

1.1? 動(dòng)物

選取27只SD健康雄性大鼠，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（豫）2017-0001），年齡9～10（9.5±0.4）月;體質(zhì)量228～252（240.5±9.6）g。在相對(duì)濕度50%～55%、溫度（22.8±2.1）℃的環(huán)境中喂養(yǎng)1周，光照12 h/d。

1.2? 主要試劑

兔抗大鼠過氧化氫酶（catalase，CAT）抗體（美國(guó)Hyclone公司，批號(hào)：A25291）;兔抗大鼠晚期氧化蛋白產(chǎn)物（adanced oxidation protein products，AOPP）抗體（美國(guó)Hyclone公司，批號(hào)：A23652）;小鼠抗大鼠白介素-3（interleukin-3，IL-3）抗體（美國(guó)BD公司，批號(hào)：N3667）;小鼠抗大鼠腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）抗體（美國(guó)BD公司，批號(hào)：N4237）;小鼠抗兔轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor-β1， TGF-β1）抗體（美國(guó)Invi?trogen公司，批號(hào)：C1358）;小鼠抗兔Caspase-3抗體（美國(guó)Invitrogen公司，批號(hào)：C1592）;大鼠抗小鼠透明質(zhì)酸酶（hyaluronidase，HA）抗體（美國(guó)Selleck公司，批號(hào)：S8753）;大鼠抗小鼠Ⅲ型前膠原（procollagen Ⅲ，PCⅢ）抗體（美國(guó)Selleck公司，批號(hào)：S2357）;大鼠抗小鼠層粘連蛋白（laminin，LN）抗體（美國(guó)Selleck公司，批號(hào)：S1675）;小鼠抗兔Bcl-2抗體（丹麥Dako公司，批號(hào)：D8569）;小鼠抗兔Bax抗體（丹麥Dako公司，批號(hào)：D9231）;大鼠抗小鼠Smad3抗體（美國(guó)Gibco公司，批號(hào)：A2317）;大鼠抗小鼠Smad2抗體（美國(guó)Gibco公司，批號(hào)：A3552）;兔抗小鼠天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）抗體（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：D9423）;兔抗小鼠丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）抗體（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：D9251）。

2 方法

2.1? 模型建立及分組干預(yù)

隨機(jī)選取9只大鼠為正常組，其余18只大鼠建立肝纖維化模型[6]。將18只模型大鼠隨機(jī)分為模型組、益氣活血方組各9只，均使用3 mL/kg 30% CCl4橄欖油溶液（上海麥克林生化科技有限公司，批號(hào)：H20120225）進(jìn)行灌胃，2次/周，連續(xù)8周。益氣活血方組大鼠自造模起使用益氣活血方（由黃芪、丹參、茯苓、豆蔻、郁金組成，配方顆粒由廣東一方制藥有限公司提供）灌胃，1次/d，4 mL/次，正常組、模型組大鼠使用生理鹽水灌胃處理，1次/d，4 mL/次。實(shí)驗(yàn)期間所有大鼠均在相同環(huán)境中，使用標(biāo)準(zhǔn)飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，每日稱各組大鼠體質(zhì)量。末次給藥后禁食12 h，稱量體質(zhì)量后麻醉處死，采集所需標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2? 觀察指標(biāo)

2.2.1? 臟器系數(shù)? 對(duì)各組大鼠進(jìn)行麻醉處理后，頸椎脫臼法處死，取大鼠肝臟、脾臟組織，稱量濕質(zhì)量后對(duì)臟器系數(shù)進(jìn)行計(jì)算，臟器系數(shù)=濕質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（kg）[7]。將所取肝臟組織固定在4%甲醛中，完全浸泡，于24 h后行常規(guī)石蠟包埋及連續(xù)切片，將切片烤干后進(jìn)行脫蠟處理，之后順序置入不同濃度的酒精中各復(fù)水3 min。使用蘇木精染色15 min后清洗3次，使用鹽酸酒精分化處理30 s，充分清洗之后使用1%伊紅染色，使用酒精進(jìn)行脫水處理后進(jìn)行脫蠟處理，封片后使用顯微鏡進(jìn)行觀察。

2.2.2? 肝纖維化程度[8]? （1）0級(jí)：未發(fā)現(xiàn)纖維化，計(jì)0分;（2）1級(jí)：肝組織匯管區(qū)出現(xiàn)纖維化擴(kuò)大，小葉內(nèi)、局限竇周出現(xiàn)纖維化，計(jì)1分;（3）2級(jí)：匯管區(qū)四周出現(xiàn)纖維化，纖維間隔形成，肝小葉結(jié)構(gòu)保留，計(jì)2分;（4）3級(jí)：纖維間隔伴小葉結(jié)構(gòu)紊亂，但未出現(xiàn)肝硬化情況，計(jì)3分;（5）4級(jí)：出現(xiàn)嚴(yán)重纖維化、早期肝硬化情況，計(jì)4分。

2.2.3? 肝功能、肝纖維化指標(biāo)檢測(cè)? 取各組大鼠麻醉處死前腹部靜脈血3 mL，400 g離心處理15 min后分離上清液，在-80 ℃環(huán)境中保存待檢。采用全自動(dòng)生化分析儀對(duì)肝功能指標(biāo)AST、ALT及肝纖維化指標(biāo)HA、PCⅢ、LN水平進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)過程嚴(yán)格按照全自動(dòng)生化分析儀操作說明書進(jìn)行。

2.2.4? 炎癥因子、氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)檢測(cè)? 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)炎癥因子IL-3、TNF-α及氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)CAT、AOPP水平。設(shè)置10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔，設(shè)置1個(gè)空半空及若干待測(cè)樣品，在10 μL待測(cè)樣品中加入40 μL樣本稀釋液，封板膜封板，置于37 ℃水浴箱溫育30 min，清洗反應(yīng)板5次，每次間隔30 s，拍干，在除空白孔以外的各孔中加入酶標(biāo)液50 μL，封膜溫育30 min，清洗反應(yīng)板5次，每次間隔30 s，拍干，在各孔中加入顯色A液、B液各50 μL，輕輕震蕩混勻，37 ℃避光環(huán)境下顯色15 min，在反應(yīng)孔內(nèi)加入終止液50 μL/孔以終止反應(yīng)，450 nm波長(zhǎng)測(cè)量每孔吸光度，檢測(cè)IL-3、TNF-α、CAT、AOPP水平。

2.2.5? TGF-β/Smads通路蛋白及線粒體凋亡通路蛋白表達(dá)檢測(cè)? Western blot法檢測(cè)TGF-β/Smads通路蛋白Smad3、Smad2、TGF-β1及線粒體凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3相對(duì)表達(dá)量。提取50 μg蛋白，煮沸5 min使蛋白變性后用SDS-PAGE凝膠電泳，然后依據(jù)蛋白分子大小把凝膠切開并轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用Western blot封閉液把待測(cè)蛋白和內(nèi)參蛋白封閉90 min在室內(nèi)，按1∶1 000加到待測(cè)蛋白抗體，內(nèi)參抗體以1∶2 000加入抗體，孵育過夜，使用Western blot洗滌液洗滌5次，10 min/次。按1∶5 000加入稀釋山羊抗兔IgG，孵育60 min室溫水平搖床，洗滌5次Western blot洗滌液，10 min/次。經(jīng)過ECL顯色和曝光后，進(jìn)行BIO-RAD成像，使用Image J圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)條帶的灰度值，以內(nèi)參條帶灰度值與蛋白比值為結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

2.3? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用“x±s”表示，若資料滿足正態(tài)性及方差齊性，則用單因素方差分析，進(jìn)一步采用LSD法對(duì)各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的數(shù)據(jù)進(jìn)行組間比較，反之則采用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 各組大鼠肝組織病理學(xué)觀察

正常組大鼠肝組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索自中央靜脈向四周放射排列，排列緊密且大小均一;模型組大鼠肝組織細(xì)胞出現(xiàn)明顯結(jié)構(gòu)損壞情況，伴有纖維結(jié)締組織增生、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞壞死現(xiàn)象，排列較為雜亂、疏松;益氣活血方組大鼠肝組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)損壞情況明顯緩解，纖維結(jié)締組織增生、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞壞死現(xiàn)象明顯減輕，細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為清晰，排列較為整齊。見圖1。

3.2? 各組大鼠肝臟、脾臟系數(shù)、肝纖維化程度評(píng)分比較

與正常組比較，模型組、益氣活血方組大鼠肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)較高（P<0.05）;與模型組比較，益氣活血方組大鼠肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)、肝纖維化程度評(píng)分較低（P<0.05）。見表1。

3.3? 各組大鼠肝功能、肝纖維化指標(biāo)水平比較

與正常組比較，模型組、益氣活血方組大鼠AST、ALT、HA、PCⅢ、LN水平較高（P<0.05）;與模型組比較，益氣活血方組大鼠AST、ALT、HA、PCⅢ、LN水平較低（P<0.05）。見表2。

3.4? 各組大鼠炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較

與正常組比較，模型組、益氣活血方組大鼠CAT水平較低，IL-3、TNF-α、AOPP水平較高（P<0.05）;與模型組比較，益氣活血方組大鼠CAT水平較高，IL-3、TNF-α、AOPP水平較低（P<0.05）。見表3。

3.5? 各組大鼠TGF-β/Smads通路蛋白表達(dá)比較

與正常組比較，模型組、益氣活血方組大鼠Smad3、Smad2、TGF-β1相對(duì)表達(dá)量較高（P<0.05）;與模型組比較，益氣活血方組大鼠Smad3、Smad2、TGF-β1相對(duì)表達(dá)量較低（P<0.05）。見表4、圖2。

3.6? 各組大鼠線粒體凋亡通路蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

與正常組比較，模型組、益氣活血方組大鼠Bcl-2相對(duì)表達(dá)量較高，Bax、Caspase-3相對(duì)表達(dá)量較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組比較，益氣活血方組大鼠Bcl-2相對(duì)表達(dá)量較低，Bax、Caspase-3相對(duì)表達(dá)量較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表5、圖3。

4 討論

肝纖維化是一種臨床較為常見的持續(xù)肝損傷的病理表現(xiàn)，在機(jī)體肝臟組織慢性損傷過程中持續(xù)存在，若得不到及時(shí)控制改善，肝纖維化可能會(huì)進(jìn)一步發(fā)展惡化，因此，尋找一種安全有效的控制肝纖維化的手段具有重要意義[9]。臨床常用的治療肝纖維化的手段為西醫(yī)藥物治療，但是臨床療效并不理想。我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為肝纖維化癥狀的主要發(fā)生機(jī)制為血瘀氣虛、肝脾同病，認(rèn)為治療肝纖維化應(yīng)以健脾、補(bǔ)肝、活血、益氣為原則[10]。益氣活血方由黃芪、丹參、茯苓、豆蔻、郁金組成，其中黃芪具有益氣、健脾的功效;丹參具有活血祛瘀的作用。

本研究中設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，建立肝纖維化大鼠模型，并使用益氣活血方進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示，使用益氣活血方進(jìn)行干預(yù)的肝纖維化大鼠肝臟、脾臟系數(shù)、肝纖維化程度評(píng)分下降（P<0.05），說明益氣活血方干預(yù)有效緩解肝纖維化大鼠結(jié)締組織異常增生，減輕大鼠肝纖維化嚴(yán)重程度，從而發(fā)揮干預(yù)效果。

肝纖維化的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體肝功能損傷密切相關(guān)，大量臨床研究表明，減輕肝纖維化嚴(yán)重程度，對(duì)患者肝功能恢復(fù)、預(yù)后改善具有重要意義[11-13]。楚振榮等[14]設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，建立肝纖維化大鼠模型，檢測(cè)大鼠肝功能指標(biāo)AST、ALT水平，并通過病理學(xué)觀察對(duì)大鼠肝纖維化程度進(jìn)行評(píng)價(jià)，認(rèn)為肝纖維化的發(fā)生發(fā)展與肝功能、肝纖維化指標(biāo)水平變化密切相關(guān)。本文研究結(jié)果顯示，肝纖維化模型大鼠AST、ALT、HA、PCⅢ、LN水平異常升高，使用益氣活血方對(duì)肝纖維化模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，肝纖維化大鼠AST、ALT、HA、PCⅢ、LN水平下降（P<0.05），說明肝纖維化大鼠出現(xiàn)一定程度的肝功能損傷，使用益氣活血方進(jìn)行干預(yù)后，肝纖維化大鼠纖維化指標(biāo)HA、PCⅢ、LN水平受到調(diào)控，肝纖維化程度得到減輕，肝功能也得到一定程度的改善。

肝纖維化的發(fā)生發(fā)展伴隨著炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)[15-16]。許瓊梅等[17]等設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，建立肝纖維化大鼠模型，其研究結(jié)果認(rèn)為肝纖維化的發(fā)生發(fā)展與肝組織氧化應(yīng)激損傷、炎癥反應(yīng)具有密切聯(lián)系。本文研究結(jié)果顯示，肝纖維化大鼠IL-3、TNF-α、CAT、AOPP水平出現(xiàn)明顯異常，使用益氣活血方對(duì)肝纖維化模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，肝纖維化大鼠IL-3、TNF-α、AOPP水平下降，CAT水平上升（P<0.05），說明使用益氣活血方進(jìn)行干預(yù)能夠抑制炎癥因子釋放，減輕肝纖維化大鼠肝組織炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)嚴(yán)重程度，從而起到肝臟保護(hù)作用，可能是因?yàn)橐鏆饣钛街熊蜍呔哂锌棺杂苫?、抑制脂質(zhì)過氧化的作用。

TGF-β/Smads信號(hào)通路在機(jī)體組織纖維化發(fā)展過程中起到重要作用[18-19]。有研究表示，肝星狀細(xì)胞激活是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，TGF-β/Smads信號(hào)通路在肝星狀細(xì)胞激活過程中起到關(guān)鍵作用。TGF-β1具有調(diào)節(jié)免疫的作用，其表達(dá)異常變化能夠誘導(dǎo)細(xì)胞分化，促進(jìn)肝星狀細(xì)胞激活及細(xì)胞外基質(zhì)形成，Smads蛋白為TGF-β的受體后蛋白，在肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。本文研究結(jié)果顯示，肝纖維化大鼠肝臟組織中Smad3、Smad2、TGF-β1呈現(xiàn)異常高表達(dá)，使用益氣活血方對(duì)肝纖維化模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，肝纖維化大鼠Smad3、Smad2、TGF-β1相對(duì)表達(dá)量明顯下調(diào)（P<0.05），說明使用益氣活血方干預(yù)能夠有效抑制TGF-β1表達(dá)，促進(jìn)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞再生，阻斷TGF-β受體Smad3、Smad2表達(dá)，抑制肝纖維化進(jìn)程，從而起到肝臟保護(hù)作用。

肝臟組織細(xì)胞凋亡是慢性肝損傷、肝纖維化發(fā)展過程中的主要特征[20-21]。Bcl-2、Bax是線粒體細(xì)胞凋亡通路中的重要基因，二者表達(dá)的變化與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。Caspase-3作為Caspase家族重要成員，其表達(dá)變化與機(jī)體組織細(xì)胞凋亡能力變化密切相關(guān)。本文研究結(jié)果顯示，肝纖維化大鼠肝臟組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá)出現(xiàn)明顯異常，使用益氣活血方對(duì)肝纖維化模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，Bcl-2表達(dá)下調(diào)，Bax、Caspase-3表達(dá)上調(diào)，說明使用益氣活血方進(jìn)行干預(yù)能夠調(diào)控細(xì)胞線粒體凋亡通路蛋白表達(dá)，抑制肝臟組織細(xì)胞凋亡，從而起到抑制肝纖維化發(fā)展的作用。

綜上所述，使用益氣活血方對(duì)肝纖維化模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，改善大鼠肝功能，減輕肝纖維化程度及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)，其作用機(jī)制可能為益氣活血方干預(yù)能夠調(diào)控TGF-β/Smads通路及線粒體凋亡通路蛋白表達(dá)，從而起到肝臟保護(hù)作用，為肝纖維化的臨床治療提供新的研究方向。

參考文獻(xiàn)

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